張青青++余勝民++蘇青++黃琳蕓

【摘要】目的：建立壯藥香花護(hù)乳凝膠劑的薄層鑒別方法，并探討其皮膚用藥的安全性。方法：采用TCL法對(duì)處方中龍血竭、莪術(shù)進(jìn)行定性鑒別，采用健康家兔進(jìn)行皮膚急性毒性試驗(yàn)。結(jié)果：TCL鑒別分離度良好，專屬性強(qiáng)；該制劑對(duì)家兔完整皮膚和破損皮膚均無(wú)急性毒性反應(yīng)。結(jié)論：TCL法可作為該制劑質(zhì)量控制方法之一；該制劑臨床經(jīng)皮膚給藥是安全的。

【關(guān)鍵詞】壯藥香花護(hù)乳凝膠劑；薄層色譜法；急性毒性

【中圖分類號(hào)】R9144【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2016）18-0008-02

壯藥香花護(hù)乳凝膠劑是我院自制的外用制劑，由龍血竭、蒲公英、莪術(shù)等8味藥材組成，具有活血化淤，軟堅(jiān)散結(jié)的作用，臨床用于治療氣滯血瘀引起的乳腺增生癥。方中主藥龍血竭具有活血化瘀，止痛的功效，莪術(shù)具有行氣活血，消積止痛的功效。為控制該制劑產(chǎn)品質(zhì)量，本研究對(duì)龍血竭、莪術(shù)進(jìn)行了薄層色譜鑒別，并采用動(dòng)物皮膚急性毒性的試驗(yàn)研究其安全性，為臨床用藥的提供理論依據(jù)。

1儀器與材料

11儀器XS 205 BDU梅特勒電子分析天平（瑞士梅特勒公司）；SB2200超聲波清洗器（上海必能信超聲有限公司）；UV-1型三用紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；微量進(jìn)樣器（上海醫(yī)用激光設(shè)備廠）。

12材料龍血竭對(duì)照藥材（批號(hào)110781-200613）、莪術(shù)對(duì)照藥材（批號(hào)110625-200902）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。香花護(hù)乳凝膠劑和試藥均由廣西壯醫(yī)醫(yī)院藥劑科提供。硅膠G、H薄層板（青島海洋化工集團(tuán)公司）。所用試劑均為分析純。

13動(dòng)物健康成年白色家兔20只，雌雄各半，體質(zhì)量20～25Kg，一級(jí)合格，由廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：HCXK桂2009-0002，動(dòng)物房溫度[BF]：（[BFQ]25±1）℃，相對(duì)濕度：50%～70%。試驗(yàn)期間動(dòng)物單獨(dú)分籠標(biāo)準(zhǔn)飼料飼養(yǎng)，自由飲水與攝食。

2薄層鑒別方法與結(jié)果[1]

21龍血竭的薄層鑒別取本品10g，加乙醚10mL，密塞，振搖10min，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液。另取缺龍血竭的供試品10g、龍血竭對(duì)照藥材01g，同法制成陰性對(duì)照溶液、對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、陰性樣品溶液、對(duì)照藥材溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（95∶[KG-*3/5]05）溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

22莪術(shù)的薄層鑒別取本品內(nèi)容物10g，置具塞三角瓶中，加石油醚（30～60℃）10mL，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另各取莪術(shù)供試樣品10g、莪術(shù)對(duì)照藥材05g，同上述方法制得陰性對(duì)照溶液、對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以石油醚（30～60℃）–乙酸乙酯（96：4）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%磷鉬酸試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)（莪術(shù)特征斑點(diǎn)a的Rf值為052，b的Rf值為056）。陰性無(wú)干擾。見(jiàn)圖2。

3皮膚急性毒性試驗(yàn)[2]

31分組及給藥將20只家兔隨機(jī)分為5組，每組4只，即完整皮膚受試藥組，完整皮膚賦形劑組，破損皮膚受試藥組，破損皮膚賦形劑組，生理鹽水組。于實(shí)驗(yàn)前24h，將每只家兔背部脊柱兩側(cè)用剪刀去毛，再用8%硫化鈉脫毛（每側(cè)約為10cm×10cm）。給藥前檢查去毛皮膚是否受損傷，有損傷的皮膚不宜進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。破損皮膚的制作采用滅菌注射針頭將去毛消毒皮膚“#”字型劃破，以輕度滲血為度。

按照分組分別在家兔背部去毛區(qū)涂生理鹽水2mL，空白凝膠劑及香花護(hù)乳凝膠劑涂藥量為每只2g，用消毒紗布和無(wú)刺激性膠布將涂藥區(qū)覆蓋固定。給藥24h后，用溫水洗去殘留涂抹物。去除涂抹物后1、24、48、72h至第7日，每日觀察涂抹部位有無(wú)紅斑和水腫等情況，以及上述變化的恢復(fù)情況和時(shí)間，并按評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)打分及強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)判斷刺激強(qiáng)度。若有死亡動(dòng)物應(yīng)及時(shí)進(jìn)行尸檢并進(jìn)行病理學(xué)檢查。

32皮膚刺激性反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》，以紅斑、水腫等為評(píng)價(jià)指標(biāo)。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)及刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)分別見(jiàn)表1、2。

每組動(dòng)物平均分值=∑紅斑和水腫積分/每組動(dòng)物數(shù)

33測(cè)定結(jié)果由表3可知，香花護(hù)乳凝膠劑與其空白凝膠劑對(duì)完整皮膚組和破損皮膚組動(dòng)物的受試部位均無(wú)紅腫、紅斑、腫脹等刺激變化，其皮膚刺激平均分值均<050分，表明兩者對(duì)正常皮膚和破損皮膚均無(wú)刺激性；生理鹽水組動(dòng)物皮膚無(wú)紅腫、紅斑及水腫等刺激現(xiàn)象。

4討論

本方劑型為凝膠膏劑，根據(jù)各藥材所含主要活性成分及理化性質(zhì)對(duì)方中藥材進(jìn)行定性研究，龍血竭的展開劑三氯甲烷和甲醇的比例經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)，最后以三氯甲烷–甲醇（95∶[KG-*3/5]05）分離效果最佳；莪術(shù)對(duì)比了環(huán)乙烷–醋酸乙酯（8∶[KG-*3/5]2）、石油醚（30～60℃）–乙酸乙酯（96∶[KG-*3/5]4），發(fā)現(xiàn)后者斑點(diǎn)分離度較清晰，展開效果更好，故選擇后者。由結(jié)果可知，認(rèn)為本次實(shí)驗(yàn)所選方法科學(xué)準(zhǔn)確，具有較好重現(xiàn)性，能較好地控制該制劑質(zhì)量。

皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果表明，香花護(hù)乳凝膠劑對(duì)完整皮膚、破損皮膚均無(wú)刺激性反應(yīng)，未見(jiàn)毒性癥狀表現(xiàn)，表明本制劑是安全可靠的。

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)（第二版）[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006.

（編輯：梁志慶）