劉婧依， 陳趙玲， 劉歧煥

（湖北省十堰市東風(fēng)總醫(yī)院血液風(fēng)濕內(nèi)科， 湖北 十堰 442008）

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清OSCAR與TNF-α相關(guān)性研究

劉婧依， 陳趙玲， 劉歧煥

（湖北省十堰市東風(fēng)總醫(yī)院血液風(fēng)濕內(nèi)科， 湖北 十堰 442008）

目的：探討類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）患者血清破骨細(xì)胞相關(guān)受體（OSCAR）與腫瘤壞死因子-α （TNF-α）的相關(guān)性。方法：選取2011年3月至2015年12月期間我院血液風(fēng)濕科收治的155例RA患者（RA組）、120例骨關(guān)節(jié)炎患者（骨關(guān)節(jié)炎組）以及同期我院體檢科確診120例健康體檢者（對(duì)照組）作為研究對(duì)象。此外，再根據(jù)臨床分期將155例RA患者分為早期組（42例）、中期組（37例）、嚴(yán)重期組（40例）、終末期組（36例）。檢測(cè)所有研究對(duì)象的血清OSCAR、TNF-α，這2個(gè)指標(biāo)測(cè)定均采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。結(jié)果：①三組研究對(duì)象血清OSCAR、TNF-α相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0. 05）。RA組血清OSCAR顯著低于骨關(guān)節(jié)炎組、對(duì)照組（P＜0.05），血清TNF-α顯著高于骨關(guān)節(jié)炎組、對(duì)照組（P＜0.05）。骨關(guān)節(jié)炎組與對(duì)照組血清OSCAR、TNF-α相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。②不同臨床分期RA患者血清OSCAR、TNF-α相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。早期組血清OSCAR顯著高于中期組，血清TNF-α顯著低于中期組（P＜0.05）。中期組血清OSCAR顯著高于嚴(yán)重期組，血清TNF-α顯著低于嚴(yán)重期組（P＜0.05）。嚴(yán)重期組血清OSCAR顯著高于終末期組，血清TNF-α顯著低于終末期組（P＜0.05）。③RA組患者血清OSCAR與TNF-α的相關(guān)系數(shù)r=-0.752（P＜0.05），骨關(guān)節(jié)炎組、對(duì)照組血清OSCAR與TNF-α無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。結(jié)論：RA患者血清OSCAR與TNF-α之間呈負(fù)相關(guān)，且這兩個(gè)指標(biāo)與患者臨床分期的關(guān)系十分密切，從而有可能成為評(píng)價(jià)RA疾病活動(dòng)度的指標(biāo)。

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎； 破骨細(xì)胞相關(guān)受體； 腫瘤壞死因子-α

RA是一種多系統(tǒng)性、炎癥性自身免疫病，其主要累及周?chē)P(guān)節(jié)，且關(guān)節(jié)慢性炎性疾病呈對(duì)稱(chēng)性。既往研究表明，OSCAR、TNF-α在RA的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著著十分重要的作用［1，2］。本研究即旨在探討RA患者血清OSCAR與TNF-α的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象：選取2011年3月至2015年12月期間我院血液風(fēng)濕科收治的155例RA患者（RA組）、120例骨關(guān)節(jié)炎患者（骨關(guān)節(jié)炎組）以及同期我院體檢科確診120例健康體檢者（對(duì)照組）作為研究對(duì)象。再根據(jù)臨床分期將155例RA患者分為早期組（42例）、中期組（37例）、嚴(yán)重期組（40例）、終末期組（36例）。三組研究對(duì)象性別、年齡相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），不同臨床分期RA患者性別、年齡相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 研究方法：空腹抽取患者靜脈血3mL，離心分離血清，取血清進(jìn)行OSCAR、TNF-α檢測(cè)，檢測(cè)方法均為ELISA雙抗體夾心法，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。血清OSCAR、TNF-α檢測(cè)方法大致相近，敘述如下：檢測(cè)前20min從2～8℃冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。然后配置8個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品以及生物素標(biāo)記抗體工作液、辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素工作液、洗滌工作液等。加樣：在待測(cè)標(biāo)本孔與標(biāo)準(zhǔn)品孔中分別加入100μL患者血清以及標(biāo)準(zhǔn)品，輕輕晃動(dòng)搖勻，避免血清以及標(biāo)準(zhǔn)品濺出孔外，覆蓋上板貼，37℃孵育120min。棄除孔內(nèi)血清以及標(biāo)準(zhǔn)品，甩干即可。在待測(cè)標(biāo)本孔與標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入100μL生物素標(biāo)記抗體工作液，覆蓋上板貼，37℃孵育60min。棄除孔內(nèi)生物素標(biāo)記抗體工作液，甩干，連續(xù)3次洗板。在待測(cè)標(biāo)本孔與標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入100μL HRP標(biāo)記親和素工作液，覆蓋上板貼，37℃孵育60min。棄除孔內(nèi)HRP標(biāo)記親和素工作液，甩干，連續(xù)5次洗板。在待測(cè)標(biāo)本孔與標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入90μL底物溶液，37℃避光顯色15～30min。在待測(cè)標(biāo)本孔與標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入50μL終止液，終止顯色反應(yīng)5min。在450nm用酶標(biāo)儀測(cè)量待測(cè)標(biāo)本孔與標(biāo)準(zhǔn)品孔的光密度（OD值）。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為縱坐標(biāo)，其對(duì)應(yīng)的OD值為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以最小二乘法求得回歸方程，將樣本OD值代入回歸方程，求得樣本待測(cè)物濃度。

1.3 儀器與試劑：美國(guó)熱電公司生產(chǎn)的Multiskan FC全自動(dòng)酶標(biāo)儀，美國(guó)寶特公司生產(chǎn)的ELX-50全自動(dòng)洗板機(jī)，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)的低速離心機(jī)，上海嵐派生物科技有限公司生產(chǎn)的OSCAR、TNF-α試劑盒。

1.4 RA的臨床分期標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)破壞性改變判斷為早期；影像學(xué)檢查可見(jiàn)骨質(zhì)疏松以及輕度的軟骨破壞，伴隨或者不伴隨輕度軟骨下骨質(zhì)破壞，臨床可見(jiàn)關(guān)節(jié)活動(dòng)受限，但無(wú)關(guān)節(jié)畸形判斷為中期；影像學(xué)檢查可見(jiàn)骨質(zhì)疏松伴隨有軟骨或骨質(zhì)破壞，臨床可見(jiàn)關(guān)節(jié)畸形但是無(wú)纖維性或骨性強(qiáng)直判斷為嚴(yán)重期；影像學(xué)檢查可見(jiàn)骨質(zhì)疏松伴隨有軟骨或骨質(zhì)破壞，臨床可見(jiàn)關(guān)節(jié)畸形、纖維性或骨性強(qiáng)直判斷為終末期［3］。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，多個(gè)樣本均數(shù)之間的比較先采用單因素方差分析、Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)、Nemenyi檢驗(yàn)，2個(gè)指標(biāo)之間的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 三組研究對(duì)象血清OSCAR與TNF-α的比較：三組研究對(duì)象血清OSCAR、TNF-α相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。RA組血清OSCAR顯著低于骨關(guān)節(jié)炎組、對(duì)照組（P＜0.05），血清TNF-α顯著高于骨關(guān)節(jié)炎組、對(duì)照組（P＜0.05）。骨關(guān)節(jié)炎組與對(duì)照組血清OSCAR、TNF-α相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 三組研究對(duì)象血清OSCAR與TNF-α的比較（±s）

表1 三組研究對(duì)象血清OSCAR與TNF-α的比較（±s）

組別例數(shù)OSCAR（μg/L）TNF-α（ng/L）RA組15511.18±2.36106.97±23.85骨關(guān)節(jié)炎組12056.97±11.0734.25±10.57對(duì)照組12056.14±12.5132.19±10.06 H -13.567419.9533 P -0.00000.0000

表2 不同臨床分期RA患者血清OSCAR與TNF-α的比較（±s）

表2 不同臨床分期RA患者血清OSCAR與TNF-α的比較（±s）

組別例數(shù)OSCAR（μg/L）TNF-α（ng/L）早期組4214.54±2.7076.07±17.55中期組3711.97±2.4198.29±18.34嚴(yán)重期組409.93±2.05119.52±21.20終末期組367.84±1.76137.81±25.16 F -6.55169.0273 P -0.03070.0015

2.2 不同臨床分期RA患者血清OSCAR與TNF-α的比較：不同臨床分期RA患者血清OSCAR、TNF-α相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。早期組血清OSCAR顯著高于中期組，血清TNF-α顯著低于中期組（P＜0. 05）。中期組血清OSCAR顯著高于嚴(yán)重期組，血清TNF-α顯著低于嚴(yán)重期組（P＜0.05）。嚴(yán)重期組血清OSCAR顯著高于終末期組，血清TNF-α顯著低于終末期組（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 三組研究對(duì)象血清OSCAR與TNF-α的相關(guān)性分析：RA組患者血清OSCAR與TNF-α的相關(guān)系數(shù)r =-0.752，相關(guān)性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；骨關(guān)節(jié)炎組、對(duì)照組血清OSCAR與TNF-α相關(guān)系數(shù)分別為-0. 260、-0.174，相關(guān)性均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討 論

OSCAR可以從兩個(gè)方面發(fā)揮其功能：一方面，它可以促進(jìn)中性粒細(xì)胞激活肽78、單核細(xì)胞趨化蛋白1等趨化因子生成，促進(jìn)破骨細(xì)胞前體細(xì)胞向破骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化；另一方面，它可以結(jié)合含有免疫受體酪氨酸活化基序的銜接蛋白Fc受體γ鏈，從而發(fā)揮促進(jìn)破骨細(xì)胞分化等作用。有研究認(rèn)為，RA患者滑膜組織、滑液，外周血單核細(xì)胞上高表達(dá)OSCAR，且與患者血沉、C反應(yīng)蛋白、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎活動(dòng)度評(píng)分呈正相關(guān)，而RA患者血清可溶性O(shè)SCAR則與這3個(gè)指標(biāo)呈負(fù)相關(guān)。由此可見(jiàn)，滑膜組織、滑液，外周血單核細(xì)胞表達(dá)的OSCAR可以促進(jìn)RA的病情進(jìn)展，血清可溶性O(shè)SCAR則發(fā)揮保護(hù)作用，其機(jī)制應(yīng)該是血清可溶性O(shè)SCAR與細(xì)胞表面OSCAR競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合配體所致。

與RA相關(guān)的細(xì)胞因子較多，如TNF-α、白介素-1（IL-1）、白介素-6（IL-6）、白介素-17（IL-17）等，其中以TNF-α研究最多。TNF-α主要由巨噬細(xì)胞合成、分泌，它可以刺激破骨細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)核因子κB受體活化因子配基（RANKL），從而間接促進(jìn)破骨細(xì)胞生成。有報(bào)道，RA患者血清TNF-α明顯高于對(duì)照組，活動(dòng)期RA患者血清TNF-α明顯高于非活動(dòng)期患者，因此檢測(cè)血清TNF-α有利于判斷RA的病情。李海波等［2］報(bào)道，TNF-α拮抗劑治療骨量減少的活動(dòng)性RA患者，可以阻止其腰椎及髖部骨密度的繼續(xù)下降。由此可見(jiàn)，血清TNF-α是促進(jìn)RA的病情進(jìn)展的因素之一。

本研究結(jié)果顯示，RA患者血清OSCAR顯著低于骨關(guān)節(jié)炎患者、健康體檢者，而血清TNF-α顯著高于骨關(guān)節(jié)炎患者、健康體檢者。此外，不同臨床分期RA患者血清OSCAR、TNF-α差異具有顯著性，隨著RA患者病情的加重，血清OSCAR逐步下降，血清TNF-α逐步升高。經(jīng)Pearson相關(guān)分析，RA患者血清OSCAR 與TNF-α之間呈負(fù)相關(guān)。

［1］ 趙帥，楊麗麗，丁寧，等.類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清破骨細(xì)胞相關(guān)受體的臨床意義［J］.中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志，2010，4（4）：286～288.

［2］ 李海波，劉榮清，池淑紅，等.腫瘤壞死因子-α拮抗劑對(duì)伴有骨量降低的活動(dòng)性類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的骨量影響［J］.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2015，19（1）：46～50.

［3］ 洪常存.磁共振成像對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者膝關(guān)節(jié)病變的診斷價(jià)值［J］.中國(guó)基層醫(yī)藥，2014，21（17）：2679～2680.

1006-6233（2016）09-1467-03

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2016.09.024

湖北省自然科學(xué)基金，（編號(hào)：2014CFB613）

劉歧煥