趙莉

TWEAK及其受體與冠心病的相關(guān)性分析

趙莉1

目的探討冠心?。–HD）患者外周血中腫瘤壞死因子樣弱凋亡因子（TWEAK）及其受體可溶性CD163的表達(dá)水平及其臨床意義。方法選取2015年1月～2016年1月于延安大學(xué)附屬醫(yī)院東關(guān)心血管分院收治的154例經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影確診的CHD患者（病例組）、男性98例，女性56例，平均年齡64.8 ±10.2歲；另選取50例為正常研究對象（正常組），男性33例，女性17例，平均年齡62.3±11.0歲；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163的水平。結(jié)果急性心肌梗死（AMI）、不穩(wěn)定性心絞痛（UAP）、穩(wěn)定性心絞痛（SAP）患者和正常組外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；AMI患者的外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163顯著的高于UAP、SAP患者和正常組（P<0.05），UAP、SAP患者的外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163顯著的高于正常組（P<0.05）；AMI、UAP、SAP患者的Gensini評分呈逐漸降低趨勢且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CHD患者外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平與Gensini評分均呈顯著的正相關(guān)關(guān)系（P<0.05）。結(jié)論CHD患者外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平顯著的升高，并且與患者病情嚴(yán)重程度相關(guān)。

冠心??；腫瘤壞死因子樣弱凋亡因子；可溶性CD163

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。–HD）是臨床常見的心血管疾病，研究表明CHD的發(fā)病率可達(dá)1.6%以上，近年呈現(xiàn)明顯上升趨勢［1］。其發(fā)病機(jī)制為：動(dòng)脈粥樣硬化及繼發(fā)性血栓的形成是促進(jìn)CHD發(fā)生發(fā)展的重要因素，在此過程中泡沫細(xì)胞及低密度脂蛋白對于動(dòng)脈管壁內(nèi)皮細(xì)胞的侵襲能力增強(qiáng)，內(nèi)皮下脂質(zhì)沉積嚴(yán)重，粥樣硬化性改變更明顯。近年來相關(guān)細(xì)胞生物學(xué)分子機(jī)制的研究認(rèn)為，相關(guān)信號(hào)通路的激活可通過趨化因子、細(xì)胞炎癥因子的激活，參與到脂質(zhì)沉積及粥樣斑塊的形成過程中［2，3］。腫瘤壞死因子樣弱凋亡誘導(dǎo)因子（TWEAK）是腫瘤壞死家族成員，通過結(jié)合配體CD163，激活下游信號(hào)通路，進(jìn)而調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)及細(xì)胞因子的趨化效應(yīng)［4，5］，本文探討TWEAK及CD163在CHD患者中的異常表達(dá)，評估其與CHD病情的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2015年1月～2016年1月于延安大學(xué)附屬醫(yī)院東關(guān)心血管分院心內(nèi)二病區(qū)收治的154例經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影確診的CHD患者（病例組）和50例正常研究對象（正常組）進(jìn)行研究。病例組154例患者，男性98例，女性56例，年齡48～79歲，平均64.8±10.2歲，體質(zhì)指數(shù)（BMI）24.1±2.0 kg/m2，根據(jù)CHD臨床分型：急性心肌梗死（AMI）49例、不穩(wěn)定性心絞痛（UAP）62例、穩(wěn)定性心絞痛（SAP）53例。正常組50例，均來源于本院體檢中心，其中男性33例，女性17例，年齡45～79歲，平均62.3±11.0歲， BMI 23.7±2.3 kg/m2。兩組研究對象的年齡、性別、吸煙、BMI比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2納入排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn)冠心病的診斷及分型標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)歐洲心臟病協(xié)會(huì)（ESC）和美國心臟病學(xué)會(huì)（ACC）的診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］，主要依據(jù)冠狀動(dòng)脈（冠脈）造影檢查至少有一支冠狀動(dòng)脈血管腔直徑減少超過50%，同時(shí)結(jié)合心電圖及患者臨床表現(xiàn)證實(shí)；年齡范圍40～80歲；各項(xiàng)檢查資料完整。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn)近期合并嚴(yán)重感染、腫瘤、免疫性疾病、類風(fēng)濕性疾病者；伴先心病、心臟瓣膜病、慢阻肺疾病的患者；患惡性血液病者；近半年內(nèi)服用抗炎藥物、HMG-CoM藥物者。

1.3冠狀動(dòng)脈病變程度評分標(biāo)準(zhǔn)冠脈評分采用Gensini法進(jìn)行評分，冠狀動(dòng)脈分為左主干、左前降支、左回旋支或右冠狀動(dòng)脈，對每一支血管的病變都予以記分，如果一支血管存在多個(gè)部位病變，按照狹窄程度最嚴(yán)重的部位記分為準(zhǔn)，狹窄程度＜25%記為0分，25%～49%為1分，50%～74%為2分，75%～90%為3分，＞90%為4分，一個(gè)患者多支血管病變則將積分進(jìn)行累計(jì)相加。

1.4生化指標(biāo)及檢測方法檢測各組研究對象的收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、胱抑素C（Cys-C）、肌酐（Cr）、空腹血糖（FBG）、外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163的水平。

采取兩組患者靜脈血用E L I S A法檢測TWEAK、CD163水平，采用低溫高速離心機(jī)進(jìn)行離心，1000 r/min（離心半徑為15 cm），獲得血清后抽取50 ul樣品加入96孔板內(nèi)，采用去離子水作為陰性對照，采用50 ul cryab作為陽性對照，平衡搖晃20 s混勻，室溫下孵育2 h，采用TBSP緩沖液清洗3次，每次5 min，加入100 ul底物，平衡搖晃30～45 s，25℃下孵育40 min，加入250 ul終止物，直到96孔板中每孔的顏色變黃，最后以空白對照為基準(zhǔn)，采用分光光度計(jì)進(jìn)行讀數(shù)。TWEAK、CD163抗體購自羅氏檢測公司，相關(guān)配套試劑購自南京凱基生物科技有限公司，嚴(yán)格按照說明書的要求進(jìn)行操作。清晨采集空腹靜脈血，分離血清后，-20℃保存待測，采集標(biāo)本后1周內(nèi)檢測TG、TC、HDL-C、LDL-C、CysC，相關(guān)指標(biāo)測定采用電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析儀（美國雅培i2000），檢測試劑盒購自福建新大陸生物技術(shù)有限公司。具體檢測方法參照試劑盒說明書，試劑盒內(nèi)配有質(zhì)控血清或質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品，所有操作嚴(yán)格按照操作說明完成。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)分析及統(tǒng)計(jì)在專業(yè)軟件SAS9.0軟件包中處理，計(jì)量指標(biāo)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson線性相關(guān)分析法；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組CHD患者與正常組的血生化指標(biāo)比較AMI、UAP、SAP患者和正常組的TC、HDL-C、LDL-C、CysC水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；AMI、UAP、SAP患者的TC、LDL-C、CysC水平顯著的高于正常組（P＜0.05），AMI、UAP、SAP患者的HDL-C水平顯著的高于正常組（P＜0.05）（表1）。

2.2外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平、Gensini評分比較AMI、UAP、SAP患者和正常組外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；AMI患者的外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163顯著高于UAP、SAP患者和正常組（P＜0.05），UAP、SAP患者的外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163顯著高于正常組（P＜0.05）；AMI、UAP、SAP患者的Gensini評分呈逐漸降低趨勢且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表2）。

表1　各組血生化指標(biāo)比較（±s）

表1　各組血生化指標(biāo)比較（±s）

注：BMI：體質(zhì)指數(shù)；SBP：收縮壓；DBP：舒張壓；TC：總膽固醇；TG：三酰甘油；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇；Cys-C：胱抑素C；Cr：肌酐；FBG：空腹血糖；與正常組比較，aP＜0.05

項(xiàng)目　AMI（n=49）　UAP（n=62）　SAP（n=53）　正常組（n=50）　F值　P值BMI（kg/m2）　24.0±2.2　24.3±2.4　24.0±2.4　23.7±2.3　0.927　0.417 SBP（mmHg）　131.7±9.6　129.5±8.3　130.4±11.0　128.5±10.4　1.338　0.332 DBP（mmHg）　75.1±8.3　73.0±9.2　73.8±8.5　72.7±8.1　1.529　0.321 TC（mmol/L）　4.51±0.84　4.62±0.90　4.67±0.89　3.56±0.85a　17.983　<0.001 TG（mmol/L）　1.82±0.63　1.94±1.00　1.89±0.90　2.00±0.94　2.041　0.226 HDL-C（mmol/L）　0.94±0.12　1.04±0.09　1.06±0.14　1.17±0.15a　22.853　<0.001 LDL-C（mmol/L）　3.10±0.62　2.95±0.66　2.87±0.73　2.21±0.59a　16.594　<0.001 Cys-C（mg/L）　1.14±0.14　1.11±0.08　1.12±0.09　0.93±0.11a　13.387　0.001 Cr（umol/L）　83.51±15.92　81.62±17.39　82.25±16.15　78.32±18.00　1.963　0.241 FBG（mmol/L）　4.83±0.49　4.75±0.55　4.81±0.66　4.59±0.54　1.550　0.319

2.3外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平與Gensini評分相關(guān)性分析CHD患者外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平與Gensini評分均呈顯著的正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。

表2　外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平、Gensini評分（±s）

表2　外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平、Gensini評分（±s）

注：與正常組比較，aP＜0.05，與UAP患者比較，bP＜0.05，與SAP患者比較，cP＜0.05

Gensini評分（分）AMI　49　1330.95±417.39abc1841.66±419.75abc91.30±28.75bcUAP　62　916.53±390.84　1333.28±371.84ab　64.43±22.06cSAP　53　862.86±381.70　1296.30±398.51c　22.52±14.63正常組 50　801.47±332.95　857.05±318.42　-F值　-　19.617　26.842　37.539 P值　- <0.001　<0.001　<0.001組別　n　可溶性TWEAK（pg/ml）可溶性CD163（ng/ml）

3　討論

CHD是病死率較高的疾病，遠(yuǎn)期不良心血管事件的發(fā)生率較高［7］。對于CHD發(fā)病過程中相關(guān)機(jī)制特別是分子生物學(xué)機(jī)制的研究，能夠?yàn)镃HD的整體性防控提供臨床決策依據(jù)和決策思路。TWEAK屬于腫瘤壞死因子家族成員，在炎癥、過氧化損傷以及血栓形成等病理過程中可急劇上升。TWEAK與配體結(jié)合后可促進(jìn)LDL-C、TC、TG對動(dòng)脈管壁的損傷，加劇粥樣斑塊形成［8，9］。相關(guān)研究已證實(shí)TWEAK/CD163信號(hào)通路在CHD患者中的異常表達(dá)［10］，但其與CHD患者冠狀動(dòng)脈病變程度的分析研究尚不足。

AMI、UAP、SAP三組患者的收縮壓以及舒張壓均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，排除血壓對于最終統(tǒng)計(jì)結(jié)果的影響。TC、HDL-C、LDL-C、CysC等的代謝紊亂，可以促進(jìn)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展［11，12］，AMI、UAP、SAP三組患者的血清TC、HDL-C、LDL-C均明顯高于正常組，血脂代謝紊亂較為明顯，而保護(hù)性脂蛋白HDL明顯下降，提示CHD患者各項(xiàng)生化檢測指標(biāo)的異常。

在AMI患者中TWEAK及CD163的表達(dá)均明顯上升，明顯高于SAP、UAP組，而SAP、UAP組血清中的可溶性TWEAK及CD163也高于正常對照組，提示TWEAK及CD163在CHD的發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮了重要的作用。Moreno J A等［13，14］學(xué)者通過回顧性分析了35例CHD患者的臨床資料，發(fā)現(xiàn)AMI患者溶栓治療前后的TWEAK及CD163均明顯高于正常對照人群，上升幅度可達(dá)50%以上，這與本次研究的結(jié)論較為相似。Gensini評分是評估冠狀動(dòng)脈狹窄程度的重要指標(biāo)，Gensini評分越高，狹窄越嚴(yán)重［7，15］，在AMI、UAP、SAP患者中Gensini評分呈逐漸降低趨勢，同時(shí)更為重要的是，TWEAK、CD163水平與Gensini評分均呈顯著的正相關(guān)關(guān)系，TWEAK、CD163與冠狀動(dòng)脈狹窄或者病變的程度具有密切的關(guān)系。

綜上所述，TWEAK及其配體CD163在CHD患者中異常表達(dá)，同時(shí)與冠狀動(dòng)脈狹窄程度密切相關(guān)。

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本文編輯：孫竹

Correlation analysis between TWEAK and receptor with coronary heart disease

ZHAO Li.The secondcardiovascular heart ward， Dongguan branch of Affiliated Hospital of Yan'an University， Yan'an 716000， China.

Objective To investigate the expression and clinical significance of TNF-like weak inducer of apoptosis （TWEAK） and its receptor soluble CD163 in peripheral blood of patients with coronary heart disease （CHD）. Methods 154 CHD patients diagnosed by coronary angiography between January 2015 and January 2016 from Dongguan Branch of Yan'an University Affiliated Hospital with in patients were selected as case group， including 98 males， 56 females， with mean age of 64.8±10.2 years. 50 normal subjects were selected as control group， including 33 males and 17 females， with mean age of 62.3±11.0 years. The levels of soluble TWEAK and soluble CD163 in peripheral blood was detected by ELISA method. Results Levels of soluble TWEAK and soluble CD163 in peripheral blood of acute myocardial infarction （AMI） patients， unstable angina pectoris （UAP） patients， or stable angina pectoris（SAP） patients， patients of normal group were significantly different （P<0.05）. Levels of soluble TWEAK and soluble CD163 of AMI patients were significantly higher than UAP and SAP patients and normal group （P<0.05）. Levels of soluble TWEAK and soluble CD163 of UAP and SAP patients were significantly higher than normal group （P<0.05）. The Gensini score of AMI， UAP and SAP patients showed a gradual decreasing trend and were significantly different（P<0.05）. There was a significant positive correlation between soluble TWEAK， soluble CD163 level and Gensini score in peripheral blood of CHD patients （P<0.05）. Conclusion Peripheral blood soluble TWEAK， soluble CD163 were significantly elevated in CHD patients， and were related to the severity of the patient's condition.

Coronary heart disease； Tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis factor； Soluble CD163

R541.4

A

1674-4055（2016）08-0983-03

1716000延安，延安大學(xué)附屬醫(yī)院東關(guān)心血管分院心內(nèi)二病區(qū)

10.3969/j.issn.1674-4055.2016.08.28