錢春美　沈艷婷　闕任燁　林柳兵　陶智會(huì)　李　勇

(1 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心，上海，200071； 2 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院脾胃病科，上海，200071； 3 上海市嘉定區(qū)中醫(yī)醫(yī)院腫瘤科，上海，201800)

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納達(dá)合劑對(duì)大鼠胃腸動(dòng)力的影響

錢春美1沈艷婷2闕任燁2林柳兵2陶智會(huì)3李勇2

(1 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心，上海，200071； 2 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院脾胃病科，上海，200071； 3 上海市嘉定區(qū)中醫(yī)醫(yī)院腫瘤科，上海，201800)

目的：本實(shí)驗(yàn)旨在觀察納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性大鼠胃腸動(dòng)力的調(diào)節(jié)作用。方法：利用大鼠膽汁反流性胃炎模型，將60只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、納達(dá)低劑量組、納達(dá)中劑量組、納達(dá)高劑量組和嗎丁啉組，每組10只。通過(guò)ELISA檢測(cè)膽汁反流性胃炎大鼠血清胃動(dòng)素(MTL)、血管活性腸肽(VIP)及胃黏膜P物質(zhì)(SP)含量變化。通過(guò)比色法檢測(cè)膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜一氧化氮(NO)含量變化。結(jié)果：納達(dá)合劑能夠顯著提高膽汁反流性大鼠胃黏膜SP及血清MTL含量(P<0.05)，能顯著降低膽汁反流性大鼠血清VIP及NO含量(P<0.05)。結(jié)論：納達(dá)合劑具有調(diào)節(jié)胃腸激素(SP、MTL、VIP、NO)的作用。

納達(dá)合劑；膽汁反流性胃炎；胃腸動(dòng)力

膽汁反流性胃炎(Bile Reflux Gastritis，BRG)，是由于多種原因?qū)е率改c胃反流(Duodenogastric Reflux，DGR)現(xiàn)象異常增多，引起胃黏膜損傷的一種疾病[1-2]。臨床上根據(jù)發(fā)病原因是否與胃腸術(shù)相關(guān)而分為繼發(fā)性和原發(fā)性膽汁反流性胃炎[3]。

十二指腸胃反流作為一種存在于機(jī)體內(nèi)的常見(jiàn)生理現(xiàn)象，其發(fā)生及反流量與胃十二指腸動(dòng)力異常以及幽門括約肌功能失常密切相關(guān)[4]。胃十二指腸動(dòng)力異常主要表現(xiàn)在胃竇清除能力下降以及十二指腸逆蠕動(dòng)的增加，當(dāng)幽門括約肌存在自身缺陷或遭受內(nèi)外源性刺激因素導(dǎo)致幽門括約肌功能異常，出現(xiàn)關(guān)閉不全情況時(shí)，十二指腸胃反流增加，其內(nèi)容物與胃黏膜長(zhǎng)時(shí)間接觸，最終導(dǎo)致胃黏膜損傷的發(fā)生，隨著病情的持續(xù)和進(jìn)展，引起胃黏膜的慢性炎癥、糜爛，更有甚者可以進(jìn)展為胃潰瘍[5-6]。

納達(dá)合劑方是我院余莉芳老中醫(yī)擬定經(jīng)驗(yàn)方，本方主要以北沙參、玉竹、麥冬、天花粉組方，功效為養(yǎng)陰清胃、降逆理氣，是治療慢性胃炎的常用方，廣泛應(yīng)用于慢性胃炎患者，包括慢性淺表性胃炎、膽汁反流性胃炎、非潰瘍性消化不良等疾病。大量的臨床實(shí)踐證明具有良好的的作用，能夠明顯緩解慢性胃炎患者胃脹、胃痛、反酸、噯氣、燒心、嘈雜等癥狀。因此，為了進(jìn)一步驗(yàn)證納達(dá)合劑的療效并深入探討其作用機(jī)制，本研究通過(guò)正常小鼠、阿托品誘導(dǎo)的胃腸動(dòng)力障礙模型小鼠以及膽汁反流性胃炎模型大鼠，觀察納達(dá)合劑對(duì)胃腸動(dòng)力的調(diào)節(jié)作用。

1　材料與方法

1.1試劑納達(dá)合劑由上海市中醫(yī)醫(yī)院制劑科提供(滬藥制字Z05190757，批號(hào)：14061901)，嗎丁啉(西安楊森制藥有限公司)，牛膽酸鈉(上海源葉生物科技有限公司)，胰酶(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，卵磷脂(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，大鼠胃動(dòng)素ELISA測(cè)定試劑盒、大鼠血管活性腸肽ELISA測(cè)定試劑盒、大鼠P物質(zhì)ELISA測(cè)定試劑盒(上海西唐生物科技有限公司)、一氧化氮試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2儀器Neofuge 15R型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(Heal force公司)，Var10skan Flash熒光酶標(biāo)儀(Thermo scientific公司)，Wellwash 4mk2型洗板機(jī)(Labsystems dragon公司)，JX-FSTPRP-48型電動(dòng)勻漿機(jī)(上海凈信公司)。

1.3動(dòng)物SD大鼠，清潔級(jí)，雄性，體重180～220 g，購(gòu)自上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。清潔級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)，恒溫(25±2)℃恒濕，人工光照12 h，黑暗12 h，自由進(jìn)食飲水。

2　方法

2.1試劑及中藥合劑配制嗎丁啉的配制：將10 mg嗎丁啉碾磨成粉狀后，溶于10 mL生理鹽水中，配制成1 mg/mL的嗎丁啉混懸液用于灌胃，現(xiàn)用現(xiàn)配。反流液的配制：以牛膽酸鈉5 g，胰酶3 g，卵磷脂0.5 g溶于生理鹽水200 mL中，充分?jǐn)嚢璨⒒靹?，用于大鼠灌胃，現(xiàn)用現(xiàn)配。納達(dá)合劑配制：納達(dá)合劑以臨床成人用量的5倍、10倍、15倍濃縮成低、中、高劑量用于灌胃，現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.2BRG大鼠血清胃動(dòng)素、血管活性腸肽，胃黏膜P物質(zhì)、一氧化氮的測(cè)定膽汁反流性胃炎模型制備：根據(jù)大鼠體重將其隨機(jī)分為6組，10只每組，共60只，按下述方法給于灌胃：對(duì)照組：生理鹽水15 mL/kg(1～8周)+生理鹽水15 mL/kg(5～8周)；模型組：反流液15 mL/kg(1～8周)+生理鹽水15 mL/kg(5～8周)；納達(dá)低劑量組：反流液15 mL/kg(1～8周)+納達(dá)低劑量15 mL/kg(5～8周)；納達(dá)中劑量組：反流液15 mL/kg(1～8周)+納達(dá)中劑量15 mL/kg(5～8周)；納達(dá)高劑量組：反流液15 mL/kg(1～8周)+納達(dá)高劑量15 mL/kg(5～8周)；嗎丁啉組：反流液15 mL/kg(1～8周)+嗎丁啉10 mg/kg(5～8周)。

大鼠給藥完畢后，禁食不禁水24 h，烏拉坦腹腔麻醉后開(kāi)腹，于腹主動(dòng)脈采血并摘取全胃，用生理鹽水漂洗后濾紙吸干剩余血液，并沿胃大彎側(cè)將胃剪開(kāi)，去除胃內(nèi)容物后，做常規(guī)標(biāo)本取材，按照試劑盒說(shuō)明(大鼠胃動(dòng)素、血管活性腸肽、一氧化氮、P物質(zhì)檢測(cè)試劑盒)，用ELISA法測(cè)定大鼠血清中胃動(dòng)素、血管活性腸肽，胃黏膜P物質(zhì)；用比色法測(cè)定一氧化氮的含量。

3　結(jié)果

3.1納達(dá)合劑對(duì)BRG大鼠胃腸激素的影響胃腸激素是機(jī)體調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力的另一種方式，因此，我們通過(guò)檢測(cè)膽汁反流性胃炎大鼠血清與胃黏膜中胃動(dòng)素與P物質(zhì)的含量，觀察納達(dá)合劑對(duì)胃腸激素的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果顯示，模型組較之于對(duì)照組，大鼠胃動(dòng)素與P物質(zhì)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。納達(dá)合劑具有提高大鼠胃動(dòng)素與P物質(zhì)的作用，且呈劑量依賴性(P<0.01)。結(jié)果表明，納達(dá)合劑的促胃腸動(dòng)力效應(yīng)可能與調(diào)節(jié)體內(nèi)胃動(dòng)素與P物質(zhì)水平密切相關(guān)。(表1)

表1　納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠血清胃動(dòng)素、胃黏膜P物質(zhì)的影響

注：**與對(duì)照組比較具有顯著差異(P<0.01)；##與模型組比較具有顯著差異(P<0.01)。

表2　納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠血清血管活性腸肽、一氧化氮的影響

注：**與對(duì)照組比較具有顯著差異(P<0.01)；##與模型組比較具有顯著差異(P<0.01)。

3.2納達(dá)合劑對(duì)BRG大鼠胃腸激素(VIP、NO)的影血管活性腸肽是一種重要的抑制性胃腸激素，而NO的產(chǎn)生可增強(qiáng)VIP的釋放。因此，我們通過(guò)檢測(cè)膽汁反流性胃炎大鼠血清與胃黏膜中VIP與NO的含量，觀察納達(dá)合劑對(duì)胃腸激素的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果顯示，模型組較之于對(duì)照組，大鼠VIP與NO顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。納達(dá)合劑具有降低大鼠VIP與NO的作用，且呈劑量依賴性(P<0.01)。結(jié)果表明，納達(dá)合劑的促胃腸動(dòng)力效應(yīng)可能與降低大鼠VIP與NO水平密切相關(guān)。(表2)

4　討論

膽汁反流性胃炎是由于十二指腸內(nèi)容物反流至胃，且未得到立即清除，造成胃黏膜損傷、炎性反應(yīng)發(fā)生的一種疾病。因此，十二指腸逆行蠕動(dòng)的增加、幽門功能下降，胃竇清除能力降低都提高了膽汁反流的可能性[7-8]。另外，胃排空延遲增加了膽汁與胃黏膜的接觸時(shí)間，從而引起B(yǎng)RG的發(fā)生。

胃腸激素是機(jī)體調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力的另一種方式。而MTL、P物質(zhì)、VIP作為重要的胃腸道激素，其作用于胃腸組織，其通過(guò)相互影響及協(xié)同作用，從而完成胃腸道分泌及運(yùn)動(dòng)功能[9]。

胃動(dòng)素的產(chǎn)生與小腸黏膜隱窩以及絨毛中的Mo細(xì)胞周期性分泌作用有關(guān)[10]，其具有推動(dòng)消化道運(yùn)動(dòng)的作用[11]。MTL通過(guò)結(jié)合胃動(dòng)素受體，使胃腸平滑肌收縮加強(qiáng)，從而加速胃內(nèi)容物的排空，而且可以縮短食物在小腸內(nèi)的停留時(shí)間。MTL促使胃腸發(fā)生MMC Ⅲ相活動(dòng)，加速胃的排空，使消化道內(nèi)殘留物、病菌以及組織碎片等被排除，此作用即所謂的“清道夫”效應(yīng)。

P物質(zhì)是一種神經(jīng)肽，其廣泛分布于神經(jīng)纖維內(nèi)，屬于速激肽家族，主要具有收縮胃腸道平滑肌，促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)的作用。外周P物質(zhì)存在于整個(gè)消化道中，主要由黏膜下神經(jīng)叢以及肌間神經(jīng)叢釋放，通過(guò)兩種不同的機(jī)制促進(jìn)消化道平滑肌收縮。其一，P物質(zhì)和消化道平滑肌質(zhì)膜上的P物質(zhì)受體相結(jié)合后升高胞質(zhì)中第二信使cAMP的水平，使胃腸道收縮。其二，P物質(zhì)通過(guò)擬膽堿樣作用，促使平滑肌收縮。

血管活性腸肽是神經(jīng)遞質(zhì)的一種，主要存在于中樞神經(jīng)和腸神經(jīng)系統(tǒng)中，其具有抑制胃蠕動(dòng)和胃酸分泌、促進(jìn)胰島素分泌等作用。在胃腸道中，VIP主要以神經(jīng)遞質(zhì)的方式發(fā)揮局部作用，它通過(guò)促進(jìn)靶細(xì)胞合成NO而使胃腸平滑肌和胃腸括約肌舒張，從而維持正常的胃腸下行蠕動(dòng)；并且其能促進(jìn)分泌和吸收功能，可促進(jìn)腸道水及電解質(zhì)的分泌[12]，刺激胰液以及小腸液的產(chǎn)生。

一氧化氮在胃腸平滑肌中是ATP、VIP等公認(rèn)NANC神經(jīng)遞質(zhì)引起松弛的最終遞質(zhì)[13]。NO的產(chǎn)生可增加VIP的釋放，而NO的釋放又是通過(guò)VIP的作用實(shí)現(xiàn)的，兩者協(xié)同促使胃腸平滑肌和胃腸括約肌的舒張[14]。

當(dāng)前，西醫(yī)學(xué)治療BRG的常用藥物[15-16]有質(zhì)子泵抑制劑、H2受體拮抗劑、促動(dòng)力藥、胃黏膜保護(hù)劑等。臨床上，應(yīng)用以上這幾類藥物，可以在一定程度上緩解癥狀，但療效單一，往往需要配合使用，增加了出現(xiàn)藥物毒副作用的可能性。而中醫(yī)藥在治療BRG上具有其特有的優(yōu)勢(shì)及療效。

膽汁反流性胃炎本病歸屬于中醫(yī)學(xué)之“胃脘痛”“嘈雜”“嘔吐”“膽癉”等范疇。本病病因主要與外感邪氣、飲食失調(diào)、七情失和、久病體虛等因素有關(guān)，氣機(jī)不利、胃失和降是發(fā)病的基本病機(jī)。納達(dá)合劑其主要成分為：北沙參，麥冬，黃連，天花粉，黃芩，元胡，甘草，制半夏，廣木香，玉竹，海螵蛸，枳殼，蒲公英，芙蓉葉，代赭石等。本方功效為養(yǎng)陰清胃、降逆理氣，是治療慢性胃炎的常用方，廣泛應(yīng)用于慢性胃炎患者，包括慢性淺表性胃炎、膽汁反流性胃炎、非潰瘍性消化不良等疾病。本科室自1993年起對(duì)該方進(jìn)行臨床研究發(fā)現(xiàn)納達(dá)合劑治療非潰瘍性消化不良62例總有效率達(dá)到95.2%，并且發(fā)現(xiàn)加味納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎合并黃疸亦具有良好的臨床療效[17-18]。因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)BRG大鼠血清胃動(dòng)素、血管活性腸肽，胃黏膜P物質(zhì)及一氧化氮含量變化。進(jìn)一步探討納達(dá)合劑的促胃腸動(dòng)力機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果研究發(fā)現(xiàn)，納達(dá)合劑能夠顯著提高BRG大鼠血清胃動(dòng)素及胃黏膜P物質(zhì)含量，且能夠顯著降低膽汁反流性大鼠血清VIP及NO含量。

綜上所述，納達(dá)合劑具有調(diào)節(jié)胃腸激素分泌，促進(jìn)胃腸動(dòng)力的作用。這為臨床上納達(dá)合劑治療BRG提供了現(xiàn)代藥效學(xué)基礎(chǔ)，為我們進(jìn)一步擴(kuò)大納達(dá)合劑臨床適應(yīng)癥、加速納達(dá)合劑的臨床推廣提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為現(xiàn)代中藥復(fù)方的發(fā)展提供了技術(shù)方法學(xué)的支撐。

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(2015-10-09收稿責(zé)任編輯：張文婷)

Effects of Nada Mixture on Rat's Gastrointestinal Motility

Qian Chunmei1，Shen Yanting2，Que Renye2，Lin Liubing2，Tao Zhihui2，Li Yong2

(1 Department of Central Laboratory，Shanghai Municipal Hospital of Traditional Chinese Medicine Affiliated to Shanghai UniversityofTraditionalChineseMedicine，Shanghai200071，China； 2DepartmentofGastroenterology，ShanghaiMunicipalHospitalofTraditionalChineseMedicineAffiliatedtoShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Shanghai200071，China； 3DepartmentofOncology,JiadingHospitalofTraditionalChineseMedicine,Shanghai201800，China)

Objective:To observe the regulative effect of Nada Mixture on gastrointestinal motility of bile reflux gastritis(BRG) rats.Methods:SD rats were randomly divided into control group, model group, low-dose Nada Mixture group, middle-dose Nada Mixture group, high-dose Nada Mixture group and Domperidone group. Each group has 10 rats. ELISA was used to detect SP content in gastric mucosa tissue and MTL, VIP in serum. Colorimetry was used to detect NO's content in gastric mucosa tissue.Results:Nada Mixture significantly increased the content of SP in gastric mucosa tissue and MTL in serum of BRG rats. And it significantly decreased the content of NO in gastric mucosa tissue and VIP in serum of BRG rats.Conclusion:Nada Mixture has the effect of regulating gastrointestinal hormones (SP, MTL, VIP, NO).

Nada Mixture; Bile reflux gastritis; Gastrointestinal motility

上海市衛(wèi)生局資助項(xiàng)目(編號(hào)：2011ZJ006)；第二批上海市衛(wèi)生系統(tǒng)優(yōu)秀學(xué)科帶頭人和優(yōu)秀青年人才培養(yǎng)計(jì)劃基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：滬衛(wèi)計(jì)委科教[2013]9號(hào)-50)

錢春美(1988—)，女，碩士，中藥師，研究方向：中藥新藥開(kāi)發(fā)，E-mail：qcm_work@126.com

李勇(1968—)，男，博士，主任醫(yī)師，研究方向：消化疾病的臨床與基礎(chǔ)研究，E-mail：liyong8256@126.com

R285.5

A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.01.031