劉莎莎吳名杰王曉龍*

（1.黑龍江省林業(yè)監(jiān)測(cè)規(guī)劃院　哈爾濱　150090）

（2.東北林業(yè)大學(xué)保護(hù)醫(yī)學(xué)與生態(tài)安全研究中心　哈爾濱　150040）

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科學(xué)實(shí)驗(yàn)

四種魚類蛙病毒調(diào)查

劉莎莎1吳名杰2王曉龍2*

（1.黑龍江省林業(yè)監(jiān)測(cè)規(guī)劃院哈爾濱150090）

（2.東北林業(yè)大學(xué)保護(hù)醫(yī)學(xué)與生態(tài)安全研究中心哈爾濱150040）

我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速，養(yǎng)殖密度不斷增加，發(fā)生病害的幾率也逐漸加大。當(dāng)前，魚類極其重要的一種新生病毒性傳染病——蛙病毒病，普遍分布于全球，黑龍江省魚類中尚未見(jiàn)報(bào)道。本調(diào)查從黑龍江省撫遠(yuǎn)縣采集魚樣本共計(jì)114尾，其中鱘魚8尾，鮭魚42尾，鯉魚42尾，鯽魚22尾。利用PCR方法對(duì)其蛙病毒帶毒情況進(jìn)行調(diào)查。檢測(cè)結(jié)果表明黑龍江省撫遠(yuǎn)縣鱘魚、鮭魚、鯉魚和鯽魚均未檢測(cè)出蛙病毒。蛙病毒可經(jīng)貿(mào)易傳播，考慮到在黑龍江地區(qū)魚養(yǎng)殖規(guī)模以及貿(mào)易市場(chǎng)的擴(kuò)大，必須嚴(yán)格控制本地市場(chǎng)上的魚類貿(mào)易，加大檢疫力度，減少蛙病毒引入的風(fēng)險(xiǎn)。

魚類；蛙病毒；調(diào)查

魚類蛙病毒病是魚類疾病中最難以預(yù)防和治療的一類疾病，它不僅造成野生魚種的損失，對(duì)于養(yǎng)殖魚種，由于特定的生存環(huán)境，常造成毀滅性及巨額損失，已成為制約魚類養(yǎng)殖業(yè)持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展的重要因素之一。

本文僅就黑龍江省撫遠(yuǎn)縣魚類蛙病毒病調(diào)查相關(guān)情況介紹如下。

1　材料

黑龍江省撫遠(yuǎn)縣四種魚類肝臟組織樣本共計(jì)114個(gè)，其中鱘魚8個(gè)，鮭魚42個(gè)，鯉魚42個(gè)，鯽魚22個(gè)。

2　方法

2.1DNA的提?。?/p>

按天恩澤試劑公司動(dòng)物DNAOUT試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作提取魚肝臟樣本組織DNA，備用。

2.2蛙病毒PCR方法檢測(cè)：

根據(jù)所優(yōu)化的反應(yīng)體系進(jìn)行反應(yīng)。

PCR反應(yīng)體系為20μL：DNA模板0.5μL，ddH2O 8.7μL，2×Taq Mix10μL，上游引物（10uM）0.4μL，下游引物（10uM）0.4μL。反應(yīng)條件：94℃預(yù)處理5min；進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括94℃30sec，55℃30sec，72℃30sec；循環(huán)完成后72℃充分延伸5min；最后4℃保存。

3　結(jié)果

檢測(cè)結(jié)果表明黑龍江省撫遠(yuǎn)縣鱘魚、鮭魚、鯉魚和鯽魚均未檢測(cè)出蛙病毒，表明未被蛙病毒感染。

圖1　鱘魚樣本檢測(cè)結(jié)果

圖2　鮭魚樣本檢測(cè)結(jié)果

圖3　鯉魚樣本檢測(cè)結(jié)果

圖4　鯽魚樣本檢測(cè)結(jié)果

本次調(diào)查是黑龍江省撫遠(yuǎn)縣第一次進(jìn)行魚類蛙病毒的調(diào)查，未出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，說(shuō)明了蛙病毒在黑龍江省撫遠(yuǎn)縣魚類中并無(wú)分布，可能與該地區(qū)的各種生境因子有關(guān)，仍然需要更詳細(xì)的數(shù)據(jù)和進(jìn)一步的分析。

該研究將對(duì)蛙病毒在高寒地區(qū)魚類種群中的全球分布研究提供依據(jù)。同時(shí)，考慮到黑龍江省冷水魚類種群的多樣性，在未來(lái)的研究中，也應(yīng)該對(duì)黑龍江省其它冷水魚類種群的蛙病毒帶毒率情況進(jìn)行詳細(xì)的調(diào)查。

本次調(diào)查的結(jié)果也為我們對(duì)不斷變化的環(huán)境下中國(guó)冷水魚類種群健康狀況進(jìn)行評(píng)價(jià)并提出相應(yīng)保護(hù)策略具有重要的意義。

由于國(guó)外的一些研究己經(jīng)證實(shí)蛙病毒在同一地區(qū)每年的流行率都呈現(xiàn)出較大的波動(dòng)，因此在黑龍江省撫遠(yuǎn)縣加強(qiáng)對(duì)魚類種群蛙病毒流行的長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)也就顯得尤其重要，這將有助于我們了解這個(gè)地區(qū)蛙病毒的流行情況以及重復(fù)發(fā)生的頻率等，為我們對(duì)本地區(qū)魚類物種的保護(hù)提供更好的建議。

蛙病毒有通過(guò)貿(mào)易傳播的可能［3］。在最近國(guó)外的很多關(guān)于蛙病毒的研究，也已經(jīng)證實(shí)了通過(guò)貿(mào)易傳播蛙病毒的可能性。考慮到在黑龍江地區(qū)高寒魚養(yǎng)殖范圍的擴(kuò)大以及其在本地貿(mào)易市場(chǎng)的擴(kuò)大，同時(shí)考慮到本地區(qū)外來(lái)物種貿(mào)易量的增加，蛙病毒引入到黑龍江地區(qū)冷水魚種群中的原因也就變得非?？赡?，我們必須加強(qiáng)對(duì)這個(gè)地區(qū)高寒魚物種貿(mào)易市場(chǎng)的監(jiān)控，嚴(yán)格控制本地市場(chǎng)上的魚類貿(mào)易，加大檢疫力度，減少蛙病毒外來(lái)引入的風(fēng)險(xiǎn)。

一作簡(jiǎn)介：劉莎莎，女，1983年4月生人，山東招遠(yuǎn)人，本科學(xué)歷，工程師。研究方向：野生動(dòng)物保護(hù)與利用。

*為通訊作者，聯(lián)系方式：yttuhh@yeah.net