孫灌寧

【摘 要】目的：提高液質(zhì)聯(lián)用法的測量不確定度的普及與運(yùn)用水平。方法：精選匯總了近年來國內(nèi)采用液質(zhì)聯(lián)用法評(píng)定不確定度方面發(fā)表的論文。結(jié)果與討論總結(jié)不確定度評(píng)定的主要參數(shù)，指出了目前研究中存在的主要問題，以期為今后的研究提供基礎(chǔ)資料。

【關(guān)鍵詞】不確定度；液質(zhì)聯(lián)用；研究進(jìn)展

0 概述

1993年，BIPM（國際計(jì)量局）、ISO（國際標(biāo)準(zhǔn)化組織）、IFXX（國際臨床化學(xué)聯(lián)會(huì)）等七個(gè)國際組織聯(lián)合制定了《測量不確定度表示指南》[1]，將測量不確定度定義為：“與測量結(jié)果相關(guān)聯(lián)的一個(gè)參數(shù)，用以表征合理地賦予被測量之值的分散性”，即不確定度用于表達(dá)測量結(jié)果的分散程度，是一個(gè)可用數(shù)字描述的定量概念[2]。，測量的水平越高，試驗(yàn)質(zhì)量越高，則測量不確定度越??；反之亦然。測量不確定度評(píng)定的包括以下幾步：第一，規(guī)定被測量；第二，識(shí)別不確定度的來源；第三，不確量化定度分量；第四，計(jì)算合成不確定度；第五，報(bào)告不確定度[3]。隨著時(shí)代的發(fā)展，檢測手段和檢驗(yàn)方法的逐步完善，為了更合理、科學(xué)地控制質(zhì)量，測量不確定度被引入食品藥學(xué)領(lǐng)域[3]。

液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（Liquid Chromatography-Massspectrometry）是20世紀(jì)發(fā)展起來的一門綜合分析技術(shù)，該技術(shù)在天然藥物化學(xué)成分分離和鑒定、藥物動(dòng)力學(xué)和藥物代謝產(chǎn)物研究、蛋白質(zhì)分離和鑒定、殘留物分析、臨床診斷研究等方面都具有廣泛的應(yīng)用[4]。作為目前最重要的分離和鑒定分析方法之一的技術(shù)，其不確定度的評(píng)定也理所應(yīng)當(dāng)受到充分重視。近年來液質(zhì)聯(lián)用測定的不確定度評(píng)定也有不少文獻(xiàn)報(bào)道，但由于液質(zhì)聯(lián)用測定不像傳統(tǒng)光譜或高效液相色譜法測定參數(shù)簡單、重現(xiàn)性好，不同儀器、不同參數(shù)、不同目標(biāo)物質(zhì)……甚至不同分析時(shí)間均產(chǎn)生不同誤差，因此不確定度的評(píng)定也相對復(fù)雜。

本文綜述了近年來發(fā)表的在食品藥品等領(lǐng)域液質(zhì)聯(lián)用法評(píng)定不確定度的主要文獻(xiàn)。

1 液質(zhì)聯(lián)用法的測量不確定度評(píng)定

張清華、楊勁、賀英等[5]采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測定曲克蘆丁血藥濃度，用自底向上法與方法學(xué)驗(yàn)證數(shù)據(jù)相結(jié)合的方法，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度和合成相對不確定度。結(jié)果：提取回收率和標(biāo)準(zhǔn)曲線是最主要不確定度分量。其中，標(biāo)準(zhǔn)曲線分量大小與濃度范圍和重復(fù)次數(shù)密切相關(guān)。

楊杰、譚潔，鄒建軍[6]，評(píng)價(jià)了液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定氯吡格雷羧酸代謝物SR26334血藥濃度的不確定度，結(jié)果20μg/L的SR26334的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為0.816μg/L，擴(kuò)展不確定度為1.63μg/L。結(jié)論是樣品前處理和標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合是濃度測定結(jié)果的主要的不確定度來源。

武利慶、王晶[7]比對了直接流動(dòng)注射電噴霧質(zhì)譜法和液質(zhì)聯(lián)用電噴霧質(zhì)譜法測定牛血清白蛋白相對分子質(zhì)量的測量不確定度：直接流動(dòng)注射法較液質(zhì)聯(lián)用法測定擴(kuò)展不確定度高。作者認(rèn)為：液質(zhì)聯(lián)用電噴霧質(zhì)譜法測定結(jié)果的中心值與理論值更為接近主要是由于在直接流動(dòng)注射分析時(shí)樣品中殘留的緩沖鹽和少量的多肽等雜質(zhì)可能與牛血清白蛋白形成加合物，使相對分子質(zhì)量測定結(jié)果發(fā)生偏差；而液質(zhì)聯(lián)用測定時(shí)經(jīng)過色譜柱的分離和脫鹽，雜質(zhì)對相對分子質(zhì)量測定結(jié)果的影響大大降低。

徐淑暖、韓媛媛、陳硯朦等通過超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定動(dòng)物源性食品中氯霉素的殘留[8]量，內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果：不確定度的來源主要是標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合、待測樣品的制備時(shí)、回收率和樣品測定的重復(fù)性等。作者對測量不確定度較大的原因進(jìn)行了討論，并對計(jì)算方法進(jìn)行簡化，認(rèn)為樣品中氯霉素的含量低，對照品稀釋步驟較多，引入貢獻(xiàn)最大。并且待測樣品基底和前處理復(fù)雜，造成回收率偏低，引入的不確定度較大。作者將與天平稱量操作的重復(fù)性、定容體積重復(fù)性和移液體積重復(fù)性這幾項(xiàng)重復(fù)性分量合并為總測量過程的一個(gè)分量，由測量結(jié)果的重復(fù)性表示，不再單獨(dú)計(jì)算。

任雪冬、劉成雁、林雪征等[9]對畜禽肉中十種磺胺類獸藥殘留檢測的不確定度進(jìn)行了分析和評(píng)定。結(jié)果：標(biāo)準(zhǔn)品的配制、稀釋，標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)，樣品回收率對樣品的相對不確定度貢獻(xiàn)較大。作者同樣認(rèn)為樣品前處理中樣本制備、提取、凈化等環(huán)節(jié)帶來的污染或損失，基質(zhì)干擾，儀器進(jìn)樣、檢測器響應(yīng)等誤差均可以通過增加回收率實(shí)驗(yàn)考察不確定度貢獻(xiàn)。

2 結(jié)果與討論

測定不確定度與測量誤差既有區(qū)別，又有聯(lián)系。誤差是客觀存在的測量結(jié)果與真值之差。但由于真值往往不知道，無法準(zhǔn)確得到。測量不確定度是說明測量分散性的參數(shù)，由分析和評(píng)定得到，因而與人的認(rèn)識(shí)程度有關(guān)[10]。測量誤差很小，但對不確定度的認(rèn)識(shí)不足，計(jì)算的不確定度可能較大；反之分析估計(jì)不足，給出的不確定度比實(shí)際偏小。因此，科學(xué)的評(píng)估方法是關(guān)鍵。

高效液相色譜法評(píng)估測量不確定度的文獻(xiàn)較多，鑒于液質(zhì)聯(lián)用法與普通高效液相色譜法的主要區(qū)別：測量濃度范圍低和基質(zhì)效應(yīng)。采用液質(zhì)聯(lián)用法評(píng)定測量不確定度的文獻(xiàn)多得出結(jié)論：不確定度來源主要為標(biāo)準(zhǔn)曲線和前處理。這主要是由于低濃度需要更多的稀釋步驟，減少基質(zhì)效應(yīng)需要更復(fù)雜的樣品前處理步驟，更需要進(jìn)行回收率的驗(yàn)證；為了消除前處理回收率的變化，可以引入內(nèi)標(biāo)定量，而內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的回收率和基質(zhì)效應(yīng)又需要進(jìn)一步驗(yàn)證。因此，采用液質(zhì)聯(lián)用法評(píng)定測量不確定度時(shí)應(yīng)著重關(guān)注基質(zhì)效應(yīng)和回收率的問題，并且避免重復(fù)計(jì)算。

【參考文獻(xiàn)】

[1]顧志榮，金巖，師富貴.不確定度評(píng)定在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2014，10（04）：79-81.

[2]中國實(shí)驗(yàn)室國家認(rèn)可委員會(huì).化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南[M].北京：中國計(jì)量出版社，2002：11-32.

[3]陸明，范國榮，汪楊，陳桂良，楊美成，陳?？?測量不確定度在藥品檢測領(lǐng)域的研究進(jìn)展[J].中國藥事，2013，27（05）：485-492.

[4]雷勇勝，宋麗明，蔣慶峰.液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在藥物的有關(guān)物質(zhì)分析中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代儀器，2011，17（04）：9-13+8.

[5]張清華，楊勁，賀英，湯麗玲，杜迎翔.對液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定曲克蘆丁血藥濃度的不確定度評(píng)價(jià)[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2010，26（01）：68-70.

[6]楊杰，譚潔，鄒建軍.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定氯吡格雷羧酸代謝物SR26334血藥濃度的不確定度評(píng)價(jià)[J].中國新藥與臨床雜志，2013，32（08）：664-668.

[7]武利慶，王晶.電噴霧質(zhì)譜法測定牛血清白蛋白相對分子質(zhì)量及測定結(jié)果的不確定度評(píng)估[J].化學(xué)分析計(jì)量，2007，16（1）：20-25.

[8]徐淑暖，韓媛媛，陳硯朦，彭寨玉，張少彬. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定動(dòng)物源性食品中氯霉素殘留量的不確定度評(píng)定[J].華南預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014，40（05）：454-458.

[9]任雪冬，劉成雁，林雪征，趙海波.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定畜禽肉中十種磺胺類獸藥殘留的不確定度評(píng)定[J].中國獸藥雜志，2011，45（05）：20-25.

[10]王麗楠，楊美華，陳建民.不確定度分析在藥物研究中的應(yīng)用[J].中草藥，2008（03）：464-467

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