李　夢，錢海兵

(貴陽中醫(yī)學院,貴州 貴陽　550002)

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◇研究簡報◇

鐵筷子醇提物對佐劑性關節(jié)炎大鼠HIF-1α、VEGF和MMP-3表達的影響

李夢，錢海兵

(貴陽中醫(yī)學院,貴州 貴陽550002)

鐵筷子；醇提物；佐劑性關節(jié)炎；缺氧誘導因子-1α；血管內皮因子；基質金屬蛋白酶-3

鐵筷子(ChimonanthuspraecoxL. Link.)為臘梅科臘梅屬植物臘梅及山臘梅的干燥根，是苗族人民用于治療類風濕性關節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)的傳統(tǒng)用藥[1]。前期研究表明鐵筷子醇提物可以減輕佐劑性關節(jié)炎(AA)大鼠足腫脹，對RA具有一定的治療作用。本研究以佐劑性關節(jié)炎大鼠模型為基礎，觀察鐵筷子醇提物對AA大鼠HIF-1α、VEGF以及MMP-3的影響。

1　材料與儀器

1.1實驗動物SPF級SD大鼠，體質量(200±20 g)，由中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學實驗動物中心提供(動物合格證書編號:2012-0003)。

1.2主要藥品與試劑鐵筷子，采自貴陽市烏當區(qū)三江鎮(zhèn)農場，經貴陽中醫(yī)學院藥學院生藥教研室鑒定為臘梅科臘梅屬植物臘梅的根。雷公藤多苷片，福建匯天生物藥業(yè)有限公司。滅活卡介苗(BCG)，中國衛(wèi)生部上海生物制品研究所。ELISA試劑盒由海藍基生物科技有限公司提供。免疫組化抗體由Santa Cruz公司提供。

1.3主要儀器石蠟切片機CUT4062，德國萊卡；電動勻漿機S25，德國IKA。

2　方法

2.1鐵筷子醇提物浸膏的制備鐵筷子用體積分數為0.78的乙醇熱回流提取，減壓濃縮，蒸干得浸膏。

2.2完全弗氏佐劑(CFA)及AA大鼠模型的制備高壓滅菌后的石蠟油和羊毛脂加入卡介苗，制備成含卡介苗100 g·L-1的完全弗氏佐劑，于大鼠左足跖皮內注射, 復制成AA大鼠模型。

2.3動物分組及給藥72只健康SD大鼠，♀♂各半,隨機分為空白組、模型組、雷公藤組(31.5 mg·kg-1·d-1)、鐵筷子醇提物高、中、低劑量組(生藥量為7.0、3.5、1.75 g·kg-1·d-1)。

2.4指標的檢測

2.4.1病理學檢測踝關節(jié)HE染色，并對病理損傷評分。

2.4.2血清中HIF-1α的測定根據ELISA試劑盒說明書檢測HIF-1α的含量。

2.4.3滑膜組織中VEGF、MMP-3的檢測用免疫組化方法檢測VEGF、MMP-3的蛋白表達，并分析其平均光密度的變化。

3　結果

3.1鐵筷子醇提物對AA大鼠踝關節(jié)病理損傷的影響HE染色結果顯示鐵筷子醇提物能改善AA大鼠踝關節(jié)病理病變情況。根據病理學評分原則進行評分，如Tab 1所示，鐵筷子醇提物高、中劑量組可明顯降低病理學評分分值(P<0.05)。

GroupDosage/mg·kg-1PathologicaldamagescoreNormalcontrol-1.17±0.98Modelcontrol-11.17±0.75**High-dosage6646.83±0.98#Middle-dosage3327.67±1.51#Low-dosage1669.83±1.17Tripterygiumwilfordiiglycosidestablets31.56.67±0.82#

**P<0.01vsnormal control;#P<0.05vsmodel control

3.2鐵筷子醇提物對AA大鼠血清中HIF-1α濃度的影響如Tab 2所示，鐵筷子醇提物各劑量組可降低HIF-1α的濃度，其中高、中劑量組作用明顯(P<0.05)。

3.3鐵筷子醇提物對AA大鼠滑膜組織VEGF、MMP-3蛋白表達的影響如Tab 2所示，鐵筷子醇提物高、中劑量組可明顯降低VEGF、MMP-3光密度值(P<0.05)。

Tab 2　Effect on concentrations of HIF-1α in serum and optical density value of VEGF,MMP-3 in synovial tissue in AA ±s，n=12)

*P<0.05vsnormal control;#P<0.05vsmodel control

4　討論

近年在對RA發(fā)病機制的研究過程中，滑膜血管新生被認為發(fā)揮了重要作用。HIF-1α是低氧狀態(tài)下血管生成的核心調控因子，主要通過提高VEGF 的表達促進血管生成，從而促進滑膜細胞增殖、活化[2]，VEGF在缺氧條件下能被HIF-1α誘導激活,導致RA血管生成和滑膜炎癥[3]。MMP-3作為金屬蛋白酶家族成員之一，是RA的一種重要致病因素。有學者認為在RA過程中，某些細胞因子會使MMP-3得到釋放，導致軟骨基質的降解，從而破壞RA軟骨和骨骼[4]。本實驗結果顯示，鐵筷子醇提物可以降低HIF-1α水平以及VEGF、MMP-3的表達，因此推測鐵筷子醇提物通過降低細胞因子水平，減輕了細胞因子對滑膜細胞和軟骨細胞的刺激，從而減少滑膜組織中MMP-3的分泌，最終阻止骨質的破壞。

綜上所述，鐵筷子醇提物能改善AA大鼠關節(jié)的病理改變，說明其可以抑制關節(jié)炎癥，對RA具有一定的療效。且鐵筷子醇提物下調HIF-1α及VEGF、MMP-3的表達可能是其治療RA的相關機制。

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Effects of alcohol extract from root of wintersweet on expression of HIF-1α,VEGF and MMP-3 in adjuvant arthritis rats

LI Meng,QIAN Hai-bing

(GuiyangCollegeofTraditionalChineseMedicine,Guiyang550002,China)

root of wintersweet;alcohol extract;adjuvant arthritis;hypoxia-inducible factor-1α;vascular endothelial growth factor; matrix metalloproteinase-3

2016-03-03,修回稿日期：2016-05-23

貴州省科技廳聯合基金(No 黔科合中藥字[2012]LKZ7030；貴陽市科技計劃項目(No 筑科合同[2011204]22號)；貴州省研究生教育創(chuàng)新基地(No 黔教研合CXJD字[2014]004)

李夢(1991-)，女，碩士生，研究方向：中藥及民族藥藥效物質基礎及作用機制，E-mail：359473448@qq.com；

錢海兵(1977-)，男，博士，教授，研究方向：中藥及民族藥藥效物質基礎及作用機制，通訊作者，E-mail:279753407@qq.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2016.09.027

A

1001-1978(2016)09-1326-02

R-332；R284.1；R322.72；R593.22；R684.3

網絡出版時間：2016-8-23 14:29:00網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160823.1429.054.html