徐建強(qiáng)，楊改鳳，田 娟，胡建功，李慧凱，林曉民

(河南科技大學(xué)林學(xué)院，河南 洛陽 471003)

7種殺菌劑對牡丹黃斑病菌生長和發(fā)育的影響

徐建強(qiáng)，楊改鳳，田 娟，胡建功，李慧凱，林曉民

(河南科技大學(xué)林學(xué)院，河南 洛陽 471003)

為篩選防治牡丹黃斑病的化學(xué)藥劑，采用菌絲生長速率法測定了7種殺菌劑對病菌菌絲生長的抑制活性，并采用涂布平板法測定了多菌靈、苯醚甲環(huán)唑及嘧菌酯對病菌分生孢子萌發(fā)的影響，在含藥平板上測定了對產(chǎn)孢量影響。結(jié)果表明，嘧菌酯和醚菌酯可強(qiáng)烈抑制菌絲生長，EC50分別為0.247、0.865 mg·L-1，嘧菌酯對孢子萌發(fā)和芽管伸長均具有很強(qiáng)的抑制活性，但對產(chǎn)孢量影響較弱。戊唑醇、氟環(huán)唑、丙環(huán)唑和苯醚甲環(huán)唑?qū)z生長也有不同程度的抑制活性，EC50分別為2.808、1.268、4.078、0.446 mg·L-1；苯醚甲環(huán)唑?qū)︽咦用劝l(fā)的影響較弱，但對病菌產(chǎn)孢有強(qiáng)烈的抑制作用。多菌靈對病菌菌絲生長的毒力為1.034 mg·L-1，對孢子萌發(fā)及產(chǎn)孢量均有一定的抑制活性。3類殺菌劑均可用于牡丹黃斑病的化學(xué)防治，根據(jù)其不同的形態(tài)毒理學(xué)效應(yīng)應(yīng)采用不同的施用方法：嘧菌酯可作為保護(hù)劑在病害發(fā)生前期噴施；苯醚甲環(huán)唑可作為治療劑在病害發(fā)生期使用；多菌靈可在病害發(fā)生前同嘧菌酯混用或病害發(fā)生期同苯醚甲環(huán)唑混用，以防止抗藥性的出現(xiàn)。

牡丹黃斑病；殺菌劑；菌絲生長；孢子萌發(fā)；孢子形成

牡丹(PaeoniasuffruticosaAndrews)隸屬于芍藥科芍藥屬牡丹組，為中國特有的植物資源，世界各地廣為種植的牡丹均起源于中國。牡丹不僅具有很高的觀賞價(jià)值，而且還有一定的藥用價(jià)值。中國已形成河南洛陽和山東菏澤2個(gè)主要的牡丹生產(chǎn)基地。牡丹侵染性病害有20多種，以真菌引起的葉斑病種類最多，危害最重[1]。感染葉斑病后，牡丹葉片光合作用及營養(yǎng)物質(zhì)合成等生理功能受到破壞，導(dǎo)致根養(yǎng)分貯藏減少，對當(dāng)年的花芽長勢及來年的開花品質(zhì)產(chǎn)生嚴(yán)重影響[2-3]，故對牡丹葉斑病的防治不能松懈。牡丹黃斑病是由斑點(diǎn)葉點(diǎn)霉(Phyllostictacommonsii)侵染引起，在洛陽各牡丹種植園區(qū)發(fā)生普遍，發(fā)病迅速，病斑擴(kuò)展快，嚴(yán)重時(shí)病斑相連，造成葉片失綠焦枯[4,5]。黃斑病已發(fā)展成為牡丹生產(chǎn)上的巨大障礙，對該病害的防治迫在眉睫，急需篩選一批對黃斑病有較好防效的化學(xué)殺菌劑。目前對牡丹病害的研究僅限于病原菌的鑒定及病害的大田防治方面，對病害防治藥劑篩選的研究較少[6]。在牡丹黃斑病化學(xué)防治方面，張格杰等[7]測定了7種殺菌劑對斑點(diǎn)葉點(diǎn)霉的離體抑制效果，結(jié)果表明嘧霉胺對病菌菌絲生長的抑制作用較好，但烯酰嗎啉和苯醚甲環(huán)唑?qū)Σ【亩玖ψ顝?qiáng)；賀春玲等[8]測定了12種殺菌劑對斑點(diǎn)葉點(diǎn)霉的離體抑制活性，發(fā)現(xiàn)百菌清和代森錳鋅對病菌菌絲生長的抑制率最大，病菌對百菌清更為敏感，而多菌靈對菌絲生長的抑制率和毒力均處于中等水平；但張國輝等[9]對從太子參斑點(diǎn)病上分離的斑點(diǎn)葉點(diǎn)霉的抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，多菌靈的抑制效果要優(yōu)于百菌清和代森錳鋅。上述研究僅測定了藥劑對菌絲生長的毒力，未測定藥劑對病菌孢子萌發(fā)及產(chǎn)孢量的影響，無法評估藥劑對病菌生長的全面效應(yīng)。為了篩選防治牡丹黃斑病的化學(xué)藥劑，并進(jìn)一步評估苯并咪唑類和三唑類藥劑對病菌孢子萌發(fā)和產(chǎn)孢量的影響，本研究測定了苯并咪唑類、三唑類及甲氧基丙烯酸酯類3類7種藥劑對病菌的毒力，評估藥劑對病菌生長發(fā)育的形態(tài)毒理學(xué)效應(yīng)，分析其應(yīng)用方法，為生產(chǎn)中牡丹黃斑病的化學(xué)防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1供試材料

1.1.1 供試菌株 2013年8月在洛陽市隋唐城遺址植物園千姿牡丹園采集發(fā)病典型、僅有單個(gè)病斑的牡丹葉片，采用組織分離法分離純化后獲得純培養(yǎng)；用無菌水制備孢子懸浮液，調(diào)節(jié)濃度為1×105孢子·mL-1，取0.1 mL 孢懸液涂抹于WA平板上，顯微鏡下挑單孢，獲得單孢菌株；經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定、并回接到牡丹葉片上進(jìn)行柯赫氏法則驗(yàn)證，鑒定為斑點(diǎn)葉點(diǎn)霉(P.commonsii)菌株放入4 ℃冰箱保存。

1.1.2 供試藥劑 97%苯醚甲環(huán)唑(Difenoconazole)原藥和97.5%嘧菌酯(Azoxystrobin)原藥由先正達(dá)(中國)投資有限公司生產(chǎn)；98%多菌靈(Carbendazim)原藥為山東省雙星農(nóng)藥廠生產(chǎn)；98%戊唑醇(Tebuconazole)原藥、95%醚菌酯(Kresoxim-methyl)原藥為廣西田園生化股份有限公司生產(chǎn)；98%丙環(huán)唑(Propiconazole)原藥和96.5%氟環(huán)唑(Epoxiconazole)原藥由江蘇利民化工有限公司生產(chǎn)。多菌靈原藥預(yù)溶于0.1 mol·L-1稀鹽酸中；嘧菌酯、戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑原藥預(yù)溶于甲醇中；氟環(huán)唑、丙環(huán)唑、醚菌酯預(yù)溶于丙酮中，均配置成1.0×104mg·L-1的母液，放置于4 ℃冰箱備用。

1.1.3 培養(yǎng)基 馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(Potato sugar agar，PSA)用于菌株的分離、純化、一般培養(yǎng)與保存和產(chǎn)孢量的測定；水瓊脂培養(yǎng)基(Water agar，WA)用于分生孢子萌發(fā)和芽管長度等測定；磷酸二氫鉀葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(KH2PO4dextrose agar，KDA)用于產(chǎn)孢時(shí)間的測定，其成分為：KH2PO41.0 g、KNO31.0 g、KCl 0.5 g、MgSO40.5 g、淀粉0.2 g、葡萄糖0.2 g、蔗糖0.2 g、瓊脂18 g、H2O 1 000 mL。

1.1.4 主要儀器 雙人單面垂直凈化工作臺SW-CJ-2D型(經(jīng)濟(jì)型)，蘇州凈化設(shè)備有限公司；生化培養(yǎng)箱SPX-250BSH-Ⅱ型，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司；立式壓力蒸汽滅菌器LS-50LD型，江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司；電熱恒溫干燥箱SZ202-2型，浙江諸暨電熱儀器廠；光學(xué)顯微鏡XSP-8C型，上海光學(xué)六廠；Olympus CX41光學(xué)顯微鏡，奧林巴斯(中國)有限公司；臺式高速冷凍離心機(jī)H-1850R型，長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司。

1.2方法

1.2.1 不同藥劑對病菌菌絲生長的影響 參考侯穎等[10]的方法。將分離純化所得菌株在PSA培養(yǎng)基上25 ℃黑暗培養(yǎng)5 d后，用直徑為5 mm的打孔器在菌落邊緣打菌餅，接在含系列質(zhì)量濃度藥劑的PSA平板上，其中多菌靈質(zhì)量濃度分別為0.25、0.5、1、2、5、10 mg·L-1，戊唑醇、氟環(huán)唑、丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑質(zhì)量濃度分別為0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10 mg·L-1，嘧菌酯、醚菌酯質(zhì)量濃度分別為0.031 25、0.062 5、0.125、0.25、0.5、1 mg·L-1，對照培養(yǎng)基不加藥，25 ℃培養(yǎng)10 d后，十字交叉法測量菌落直徑，每個(gè)處理3次重復(fù)。計(jì)算各質(zhì)量濃度處理下藥劑對菌絲生長的抑制率，求出毒力回歸方程及有效抑制中濃度EC50。

菌絲生長抑制率=(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對照菌落直徑-菌餅直徑)×100%

1.2.2 不同藥劑對病菌分生孢子萌發(fā)的影響 參考陳雨等[11]的方法。將菌株在PSA平板上25 ℃黑暗培養(yǎng)10 d后，用無菌水洗下分生孢子，4層紗布過濾除去菌絲，將濾液在5 000 r·min-1下離心10 min，去除上清液，將分生孢子重懸于無菌水中，調(diào)節(jié)孢子濃度至106個(gè)·mL-1，制備孢子懸液。取0.1 mL孢子懸液分別涂布在含0、0.1、1、5、10、50、100 mg·L-1藥劑的WA平板上(直徑9 cm)，25 ℃恒溫培養(yǎng)，待對照平板孢子開始萌發(fā)后，每隔2 h每皿隨機(jī)觀察100個(gè)孢子，統(tǒng)計(jì)不同濃度下的孢子萌發(fā)率，以芽管長度超過孢子最大直徑長度的一半作為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)，直到對照的萌發(fā)率達(dá)到95%以上，每個(gè)處理重復(fù)3次。

1.2.3 不同藥劑對病菌芽管伸長和形態(tài)的影響 參考梁彩萍等[12]的方法。按照1.2.2的方法制備孢子懸液。取0.1 mL孢子懸液分別涂布在含0、0.1、1、5、10、50、100 mg·L-1藥劑的WA平板上，25 ℃黑暗培養(yǎng)18 h后在Olympus CX41光學(xué)顯微鏡下利用MD-50軟件中的標(biāo)尺功能測量孢子萌發(fā)后從孢子到芽管頂端的直線長度，每處理隨機(jī)測50根芽管，求出芽管長度的平均值，并進(jìn)行方差分析。采用同樣的步驟，25 ℃黑暗培養(yǎng)18 h后，切取含有孢子的WA培養(yǎng)基塊，在XSP-8C型光學(xué)顯微鏡下觀察藥劑處理后分生孢子及芽管形態(tài)，同不含藥劑培養(yǎng)基上的做比較，并進(jìn)行觀察拍照。

1.2.4 不同藥劑對病菌產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)及數(shù)量的影響 參考侯穎等[10]的方法。按照1.2.2的方法制備孢子懸液。參照多菌靈、苯醚甲環(huán)唑、嘧菌酯抑制病菌菌絲生長的有效抑制中濃度EC50，制備相應(yīng)濃度的含藥KDA平板，對照平板不加藥。取0.1 mL孢子懸液均勻涂布在KDA平板上，置25 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，24 h后每天定時(shí)用手術(shù)刀切取正方形的培養(yǎng)基塊置載玻片上，在顯微鏡下觀察病菌分生孢子器的分化形成情況，直至分生孢子出現(xiàn)。以第一次觀察到分生孢子為分生孢子器的形成時(shí)間，每處理3個(gè)重復(fù)。

用血球計(jì)數(shù)板測產(chǎn)孢量。制備3種藥劑EC50濃度的含藥PSA平板，對照不加藥。將病菌在PSA平板上培養(yǎng)5 d后，用直徑5 mm的打孔器在菌落邊緣打菌餅，分別接種在含藥平板上，每皿接一個(gè)菌餅，25 ℃黑暗培養(yǎng)10 d后，用無菌水充分洗下孢子，收集孢子懸浮液，用血球計(jì)數(shù)板測量孢子液濃度并計(jì)算產(chǎn)孢數(shù)，按照公式求出產(chǎn)孢量。

產(chǎn)孢量=孢子液濃度×稀釋倍數(shù)×收集的孢子液總體積

產(chǎn)孢抑制率=(對照孢子液濃度-處理孢子液濃度)/對照孢子液濃度×100%

1.2.5 數(shù)據(jù)分析 利用Excel 2003進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，利用DPS V6.5軟件中的“數(shù)量型數(shù)據(jù)機(jī)值分析”計(jì)算藥劑抑制菌絲生長的有效中濃度EC50，并采用LSD法進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1不同藥劑對病菌菌絲生長的抑制作用

由表1可以看出，2種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑對病菌菌絲生長均表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑制作用，而以嘧菌酯的抑制作用最強(qiáng)，醚菌酯稍弱。4種三唑類殺菌劑對病菌菌絲生長的毒力有所差異。其中，苯醚甲環(huán)唑?qū)z生長的抑制作用最強(qiáng)，最弱的為丙環(huán)唑。多菌靈對病菌的毒力居于中等水平。說明甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑可以作為牡丹黃斑病化學(xué)防治的備選藥劑，而三唑類及苯并咪唑類，應(yīng)根據(jù)其對病菌的毒力差異，選擇合適的殺菌劑品種。依據(jù)7種殺菌劑對病菌菌絲生長的毒力，后續(xù)試驗(yàn)選取每類藥劑中毒力最大的藥劑(EC50最小)即多菌靈、苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯，進(jìn)行對孢子萌發(fā)、芽管伸長及形態(tài)和產(chǎn)孢量影響的研究，進(jìn)一步評估3類藥劑對病菌生長發(fā)育的全面效應(yīng)。

表1 7種藥劑對牡丹黃斑病菌菌絲生長的毒力Table 1 Toxicity of seven fungicides to mycelial growth of P.commonsii

2.2不同藥劑對病菌分生孢子萌發(fā)速率的影響

在不含藥劑的WA平板上，病菌分生孢子在25 ℃培養(yǎng)14 h后，萌發(fā)率達(dá)到95%左右。在含有多菌靈0.1～5 mg·L-1的平板上，培養(yǎng)6 h后，藥劑處理平板上孢子萌發(fā)率比對照高，表現(xiàn)出輕微的促進(jìn)作用，當(dāng)濃度高于10 mg·L-1時(shí)，孢子萌發(fā)受到顯著抑制，且推遲了孢子萌發(fā)的時(shí)間，6 h后孢子才開始萌發(fā)；苯醚甲環(huán)唑在供試濃度下對分生孢子萌發(fā)的抑制作用較弱，14 h后，在100 mg·L-1的含藥平板上萌發(fā)率依然達(dá)到60%左右；嘧菌酯對孢子萌發(fā)的抑制作用隨藥劑濃度的升高而增強(qiáng)，當(dāng)濃度高于5 mg·L-1時(shí)，分生孢子的萌發(fā)率顯著下降，此外，嘧菌酯還導(dǎo)致孢子萌發(fā)時(shí)間推遲，在5 mg·L-1以上濃度時(shí)，6 h后才開始有少量孢子萌發(fā)(圖1)。由表2可知，嘧菌酯對病菌分生孢子萌發(fā)的毒力最強(qiáng)，其次為多菌靈，苯醚甲環(huán)唑較差。

圖1 藥劑對牡丹黃斑病病菌分生孢子萌發(fā)速率的影響Fig.1 Effects of fungicides on the conidia germination rate of P.commonsii

表2 孢子萌發(fā)14 h后藥劑對牡丹黃斑病菌分生孢子萌發(fā)的毒力Table 2 Toxicity to conidia germination of P.commonsii treated with fungicides for 14 h

2.3不同藥劑對病菌芽管伸長和形態(tài)的影響

由表3可以看出，在不含藥劑的WA上，孢子萌發(fā)18 h后芽管長度達(dá)到10 μm左右。3種藥劑均對芽管伸長有強(qiáng)烈的抑制作用，0.1 mg·L-1時(shí)的芽管長度同對照相比已差異顯著；隨著藥劑濃度升高，盡管分生孢子能夠萌發(fā)，但芽管伸長生長受到的抑制作用越加明顯。嘧菌酯對芽管伸長的抑制作用最為強(qiáng)烈，在0.1 mg·L-1時(shí)芽管長度已不到對照芽管長度的二分之一；苯醚甲環(huán)唑次之，1 mg·L-1時(shí)的芽管長度為3.129 μm，同對照相比差異顯著；而多菌靈抑制作用最弱，1 mg·L-1時(shí)的芽管長度仍較對照芽管長度的二分之一長。3種藥劑在5 mg·L-1以上時(shí)，分生孢子盡管能夠萌發(fā)，但芽管長度僅在0.829～1.576 μm，已不再伸長，說明芽管已失去了正常的生物學(xué)功能。3種藥劑不但對孢子萌發(fā)有影響，對已萌發(fā)的芽管伸長也有抑制作用。

分生孢子萌發(fā)18 h后觀察發(fā)現(xiàn)，在不含藥劑的WA平板上，分生孢子可從一端或兩端萌發(fā)長出芽管，芽管基部細(xì)胞膨大，能正常生長，很快產(chǎn)生隔膜并發(fā)生分枝形成菌絲(圖2-a)。3種藥劑在質(zhì)量濃度分別為0.1、1 mg·L-1時(shí)，孢子萌發(fā)的芽管形態(tài)正常，同對照相比，芽管長度較短，盡管有隔膜，但基本不發(fā)生分枝(圖2-b、c、h、i、n、o)；隨著質(zhì)量濃度升高，藥劑對分生孢子的致畸作用不太明顯，但對芽管卻表現(xiàn)出明顯的致畸效應(yīng)。多菌靈的致畸作用最為明顯，5 mg·L-1時(shí)產(chǎn)生的芽管膨大呈念珠狀(圖2-d)；質(zhì)量濃度越高，孢子及芽管膨大越明顯，且芽管不再形成隔膜(圖2-e、f)；100 mg·L-1時(shí)，盡管分生孢子仍能夠萌發(fā)，但其芽管已不再生長(圖2-g)。苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在5、10 mg·L-1時(shí)，萌發(fā)的芽管細(xì)胞發(fā)生不規(guī)則膨大，不產(chǎn)生隔膜也不發(fā)生分枝，類似于蝌蚪狀(圖2-j、k、p、q)；而在50和100 mg·L-1時(shí)，孢子萌發(fā)產(chǎn)生的單細(xì)胞芽管已不再伸長，類似于出芽繁殖的酵母(圖2-l、m、r、s)。

表3 不同質(zhì)量濃度藥劑處理牡丹黃斑病病菌分生孢子18 h后的芽管長度Table 3 Germ tube length of P.commonsii treated with fungicides at different concentrations for 18 h μm

注：表中數(shù)據(jù)為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。同列數(shù)據(jù)后不同字母表示經(jīng)LSD方法檢驗(yàn)在P<0.05水平差異顯著。

Notes: Data are mean±SD. Different letters in the same column indicate significant difference atP<0.05 level by LSD method test.

a (×200): CK; b～g (×400): 0.1、1、5、10、50、100 mg·L-1多菌靈; h～m (×400): 0.1、1、5、10、50、100 mg·L-1苯醚甲環(huán)唑; n～s(×400): 0.1、1、5、10、50、100 mg·L-1嘧菌酯。

a(×200):CK. b～g (×400): 0.1，1，5，10，50，100 mg·L-1carbendazim respectively. h～m (×400): 0.1，1，5，10，50，100 mg·L-1difenoconazole respectively. n～s (×400): 0.1，1，5，10，50，100 mg·L-1azoxystrobin respectively.

圖2不同濃度藥劑處理18h后牡丹黃斑病病菌分生孢子及芽管形態(tài)
Fig.2AbnormalityofconidiaandtheirgermtubesofP.commonsiitreatedwithdifferentconcentrationsofcarbendazim,difenoconazoleandazoxystrobinfor18h

2.4不同藥劑對病菌產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和數(shù)量的影響

在不含藥劑的KDA平板上，25 ℃恒溫培養(yǎng)48 h后已出現(xiàn)分生孢子器，體積較小，顏色較淺，黃褐色，圓形、橢圓形或不規(guī)則形，質(zhì)地較稀疏；而含藥平板均未形成產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)。繼續(xù)培養(yǎng)至60 h，對照平板上的分生孢子器較大，深褐色，較密；含嘧菌酯的KDA平板上，出現(xiàn)分生孢子器，但體積小，顏色尚淺，稀疏。含多菌靈和苯醚甲環(huán)唑的KDA平板上，24～60 h的芽管長度及形態(tài)幾乎不發(fā)生變化，芽管較短，不能形成產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)。說明多菌靈和苯醚甲環(huán)唑?qū)Ξa(chǎn)孢結(jié)構(gòu)形成有強(qiáng)烈的抑制作用，而嘧菌酯的抑制作用則相對較弱。

由圖3可知，在不含藥劑的PSA平板上，25 ℃恒溫培養(yǎng)10 d后，牡丹黃斑病菌能大量產(chǎn)孢。在含藥平板上，苯醚甲環(huán)唑能強(qiáng)烈抑制牡丹黃斑病菌產(chǎn)孢，在EC50濃度時(shí)，病菌已不能產(chǎn)孢，抑制率達(dá)到100%；在含多菌靈和嘧菌酯的含藥平板上，產(chǎn)孢抑制率分別為81.29%和52.32%，說明嘧菌酯對產(chǎn)孢的抑制作用較苯醚甲環(huán)唑和多菌靈弱。

C：多菌靈；D：苯醚甲環(huán)唑；A：嘧菌酯。 C：Carbendazim；D：Difenoconazole；A： Azoxystrobin.

3 結(jié)論與討論

本研究結(jié)果顯示，多菌靈、苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯3種殺菌劑在供試質(zhì)量濃度下對牡丹黃斑病菌主要表現(xiàn)為抑菌作用，抑制菌絲生長，降低分生孢子萌發(fā)速率，并使分生孢子及芽管畸形，進(jìn)而降低病菌侵染寄主及在寄主上產(chǎn)孢的能力，有望應(yīng)用到牡丹黃斑病的化學(xué)防治上。但根據(jù)其不同的形態(tài)毒理學(xué)效應(yīng)，需采用不同的施用方法。嘧菌酯可作為保護(hù)劑在病害發(fā)生前期噴施，抑制孢子萌發(fā)和芽管伸長以降低病菌的侵染率，預(yù)防病害發(fā)生；由于其對產(chǎn)孢抑制作用較弱，在病害發(fā)生期使用時(shí)應(yīng)盡可能提前。苯醚甲環(huán)唑可作為治療劑在病害發(fā)生期使用，通過抑制病菌菌絲生長和產(chǎn)孢來抑制病菌的再侵染；但由于其對孢子萌發(fā)影響較弱，不建議病害發(fā)生前期使用。多菌靈對菌絲生長、孢子萌發(fā)及產(chǎn)孢的抑制作用均居于前兩者之間，可在病害發(fā)生前同嘧菌酯或病害發(fā)生期同苯醚甲環(huán)唑混用或復(fù)配，以防止抗藥性的產(chǎn)生。

為了排除制劑中助劑成分對病原菌生長的影響，在進(jìn)行殺菌劑的室內(nèi)毒力測定時(shí)應(yīng)盡量使用原藥。本研究中多菌靈和苯醚甲環(huán)唑?qū)Σ【亩玖Ψ謩e為1.034、0.446 mg·L-1，毒力明顯比張格杰等[7]和賀春玲等[8]的研究結(jié)果小。張格杰等[7]的研究表明，10%的苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑對病菌的室內(nèi)毒力為2.018 5 mg·L-1；賀春玲等[8]的研究表明，50%多菌靈可濕性粉劑對病菌的室內(nèi)毒力為3.597 3 mg·L-1。上述2個(gè)研究所用藥劑均為制劑，分別含有相當(dāng)量(50%以上)的助劑成分，由于助劑對病菌生長的影響未知，故無法排除助劑對試驗(yàn)結(jié)果的影響；本研究使用的是98%多菌靈和97%苯醚甲環(huán)唑原藥，更能精確反映藥劑對病菌的室內(nèi)毒力。另外，來源于不同地域的菌株對藥劑的敏感性也可能存在差異。

在生長季節(jié)后期(秋季)的牡丹園中，除了多發(fā)性的黑斑病、紅斑病和黃斑病外，其它葉部病害如腔孢葉斑病菌、柱枝孢葉斑病等也時(shí)有發(fā)生[13-14]。故對牡丹葉斑病的防治應(yīng)通過藥劑復(fù)配來達(dá)到兼治多種病害的目的。同時(shí)，由于牡丹是園林植物，栽培管理較為精細(xì)，在進(jìn)行病害治理時(shí)應(yīng)注意多種方法的綜合運(yùn)用，如通過遮光來提高牡丹生長勢；秋末徹底清除病殘?bào)w，集中燒毀，減少來年侵染源[15]。但在病害暴發(fā)流行時(shí)，仍然需要依靠化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行快速及時(shí)的控制。

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(責(zé)任編輯：蔣國良)

EffectsofsevenfungicidesongrowthanddevelopmentofPhyllostictacommonsiicausingyellowleafspotofPaeoniasuffruticosa

XU Jianqiang, YANG Gaifeng, TIAN Juan, HU Jiangong, LI Huikai, LIN Xiaomin

(College of Forestry, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003, China)

In order to screen fungicides to control the peony yellow leaf spot infected byPhyllostictacommonsii, the inhibitory activity of seven fungicdies against mycelial growth was determined through a discriminatory dose test; the efficacy of carbendazim, difenoconazole and azoxystrobin on conidial germination and sporulation was measured on the petri dish containing culture medium amended with a test fungicide at various concentrations. The rusults showed that strobilurin fungicides, including azoxystrobin and kresoxim-Methyl, could strongly inhibit the mycelial growth with the EC50value of 0.247 and 0.865 mg·L-1respectively. Azoxystrobin had the strongest inhibitory activity on germination rate, but it had less effect on conidia yields. Triazoles fungicides, including tebuconazole, epoxiconazole, propiconazole, difenoconazole, had different inhibitory activity on mycelia growth, with the EC50value of 2.808, 1.268, 4.078 and 0.446 mg·L-1respectively. Though difenoconazole could not strongly decrease conidial germination rate, it had powerful inhibitory activity on sporulation. Benzimidazoles fungicide, carbendazim, had the EC50value of 1.034 mg·L-1on the mycelia growth; it could also inhibit the conidia germination and sporulation to some extent. All the three kinds of fungicides could be used to control peony yellow leaf spot, however, the use method was different based on their morphological and toxicological effects. Azoxystrobin could be used as a protective fungicide before the appearance of the disease; difenoconazole could be used as a curative fungicide when the disease had become apparent and alternate and mixed use of carbendazim with the two fungicides might delay the onset of resistance.

peony yellow leaf spot; fungicides; mycelial growth; conidial germination; sporulation

S436

：A

2015-11-15

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31401774)；公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201303023)；河南科技大學(xué)大學(xué)生研究訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(2015148)

徐建強(qiáng)(1979-)，男，河南商丘人，副教授，博士，從事殺菌劑毒理與應(yīng)用方面的研究。

1000-2340(2016)02-0229-06