胡會(huì)娟，劉佳，劉金玉，田野，劉永剛，關(guān)錳，李莉，魏勝利，4*

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，北京 100102；2.中國醫(yī)藥保健品有限公司，北京 100061；3.北京市中藥研究所，北京 100035；4.中藥材規(guī)范化生產(chǎn)教育部工程研究中心，北京 100102)

不同干燥方法對大黃9種活性成分含量的影響研究△

胡會(huì)娟1，劉佳1，劉金玉1，田野1，劉永剛2，關(guān)錳2，李莉3，魏勝利1，4*

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，北京 100102；2.中國醫(yī)藥保健品有限公司，北京 100061；3.北京市中藥研究所，北京 100035；4.中藥材規(guī)范化生產(chǎn)教育部工程研究中心，北京 100102)

目的：比較切片陰干、切片曬干、個(gè)子陰干、個(gè)子熏干和4種溫度(50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃)烘干對大黃藥材質(zhì)量的影響，為大黃產(chǎn)地加工選用合理的干燥方式、提高藥材質(zhì)量和經(jīng)濟(jì)效益奠定理論和技術(shù)基礎(chǔ)。方法：采用HPLC分別測定酚酸類、二蒽酮苷類及游離蒽醌類成分的含量，并以方差分析比較評價(jià)。結(jié)果：總游離蒽醌含量，只有個(gè)子陰干、個(gè)子熏干、切片曬干、切片陰干和80 ℃烘干處理達(dá)到了《中華人民共和國藥典》2015版規(guī)定的0.20%；番瀉苷A含量，以個(gè)子陰干處理最高，切片陰干方式次之，60 ℃烘干最低，但均高于16版《日本藥局方》規(guī)定的0.25%。結(jié)論：個(gè)子陰干所需時(shí)間過長，切片曬干是目前適宜的加工方法。

唐古特大黃；干燥方式；產(chǎn)地加工；藥材質(zhì)量

1 前言

大黃來自于掌葉大黃RheumpalmatumL.、唐古特大黃RheumtanguticumMaxim.ex Balf.或藥用大黃RheumofficinaleBaill.的干燥根及根莖[1]，是一種常用的大宗中藥材，不僅國內(nèi)需求量大，還出口至日本等國家。大黃主要含有蒽醌類、鞣質(zhì)類、多糖類等活性成分，現(xiàn)代藥理研究表明其具有抗病毒、抗腫瘤、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗真菌和抗過敏、抑制血管增生、促智和瀉下等作用[2]。

大黃根及根莖粗壯，在生產(chǎn)中自然干燥困難，通常在產(chǎn)地按照傳統(tǒng)的熏干或者陰干方式需3～4個(gè)月的時(shí)間才能完全干燥。而在甘肅、四川等大黃栽培主產(chǎn)區(qū)，大黃采收期在秋季，由于采收后即刻進(jìn)入冬季，為了防止大黃受凍產(chǎn)生糠芯影響品質(zhì)，多采用柴草熏干和干燥設(shè)備烘干的方式干燥。有關(guān)大黃干燥方法對藥材質(zhì)量的影響已有報(bào)道，宋平順等[3]通過比較總蒽醌類成分發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)的熏法中蒽醌類成分含量最高，晾法次之；唐文文等[4]通過比較總蒽醌類和酚酸類成分發(fā)現(xiàn)大黃適宜的干燥方法是45℃恒溫烘干或曬干；代婉瑩等[5]通過比較總蒽醌類成分發(fā)現(xiàn)微波干燥方法可用于大黃產(chǎn)地加工規(guī)?；笊a(chǎn)。但是上述研究在干燥工藝參數(shù)和成分種類上尚缺乏系統(tǒng)性。

本研究通過系統(tǒng)比較切片陰干、切片曬干、個(gè)子陰干、個(gè)子熏干和4種溫度(50℃、60℃、70℃、80℃)烘干對大黃藥材9種活性成分含量影響，探索能提高大黃藥材質(zhì)量并且時(shí)間高效的干燥方法，為大黃產(chǎn)地加工中干燥方式和干燥參數(shù)的確定奠定理論和技術(shù)基礎(chǔ)。

2 材料與方法

2.1材料和試劑

實(shí)驗(yàn)用大黃采自四川省若爾蓋縣團(tuán)結(jié)村，原植物標(biāo)本經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)魏勝利副教授鑒定為唐古特大黃RheumtanguticumMaxim.ex Balf.，憑證標(biāo)本存放于北京中醫(yī)藥大學(xué)。本實(shí)驗(yàn)所用材料為6年生唐古特大黃的根及根莖。

兒茶素、沒食子酸、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品購自成都普非德生物技術(shù)有限公司，番瀉苷A、番瀉苷B購自中國藥品生物制品檢定所，純度均大于98%。

2.2大黃樣品干燥處理

為保證每個(gè)干燥處理下的樣品具有可比性，本實(shí)驗(yàn)共選取9株大黃，將每株大黃的根莖和最粗部位的根分別縱切為平均的6份，確保每份對應(yīng)一個(gè)干燥處理(分別為切片陰干、切片曬干和50℃、60℃、70℃、80℃4個(gè)溫度參數(shù)烘干處理)；在此9株大黃根和根莖中，每株選取兩段根(長9～12cm，直徑4～6cm)和兩塊根莖(直徑7～10cm，厚度3～4cm)，確保每份根段和根莖塊對應(yīng)一個(gè)干燥處理(個(gè)子陰干、個(gè)子熏干)共計(jì)72份樣品。

2.3大黃HPLC分析

2.3.1儀器及設(shè)備 Agilent1200高效液相色譜儀(包括四元泵、真空脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器)色譜柱：Agilent ZQRBA SB-C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；KQ5200D超聲清洗器(江蘇省昆山市超聲儀器有限公司)；RE52CS型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；FW100型高速萬能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)。

2.3.2色譜條件 流動(dòng)相為0.05%的磷酸水溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脫程序如下：0～10min，5% B～11% B；10～30min，11% B～15% B；30～45min，15% B～17% B；45～60min，17% B～22% B；60～75min，22% B～36% B；75～90min，36% B～60% B；90～105min，60% B；105～110min，60% B ～5% B；流速1.0mL·min-1；檢測波長254nm；柱溫40℃；進(jìn)樣量10μL。(圖1)[6]

注：(1)沒食子酸，(2)兒茶素，(3)番瀉苷B，(4)番瀉苷A，(5)蘆薈大黃素，(6)大黃酸，(7)大黃素，(8)大黃酚，(9)大黃素甲醚A.對照品；B.樣品圖1 9種活性成分色譜圖

2.3.3供試液樣品的制備 精密稱取大黃粉末(過60目篩)1g，置于具塞三角瓶中，精密加入60%甲醇50mL，稱定重量，超聲提取1h(200W，40kHZ)，放冷，稱重，用60%甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，過濾(0.22μm微孔濾膜)，取續(xù)濾液，即得酚酸類、二蒽酮苷類和游離蒽醌類供試品溶液[6]。

2.3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取沒食子酸對照品0.912mg、兒茶素對照品10.4mg共同置于10mL量瓶中，加60%甲醇溶解作為對照品貯備溶液；精密稱取番瀉苷A對照品8mg、番瀉苷B對照品5.3mg共同置于10mL量瓶中，加60%甲醇溶解作為對照品貯備溶液；精密稱取蘆薈大黃素對照品2.34mg、大黃酸對照品2.46mg、大黃素對照品0.42mg、大黃酚對照品1.65mg和大黃素甲醚對照品1.29mg共同置于10mL量瓶中加甲醇溶解作為對照品貯備溶液。將上述儲(chǔ)備液稀釋至6個(gè)不同濃度，得系列對照品溶液，每個(gè)濃度進(jìn)樣2次，取其峰面積平均值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析，所得各回歸方程見表1。

表1 9種化學(xué)成分的回歸方程

2.3.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、大黃素、大黃酸、番瀉苷A、番瀉苷B、沒食子酸、兒茶素的峰面積，計(jì)算RSD值。結(jié)果顯示，9個(gè)成分的RSD分別為1.2%、1.9%、1.8%、1.5%、2.5%、2.0%、1.3%、2.1%、1.4%，均小于3%，表明儀器精密度良好。

2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取大黃細(xì)粉5份，每份1 g，按照前面所述樣品溶液制備及分析方法進(jìn)行測定，結(jié)果沒食子酸、兒茶素、番瀉苷B、番瀉苷A，以及五種游離蒽醌含量的RSD分別為1.4%、0.6%、2.5%、1.7%、2.9%、2.1%、1.9%、2.6%、2.3%，表明重復(fù)性良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取大黃細(xì)粉1 g，按照前面所描述的樣品溶液制備方法制備，分別于0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)行測定，結(jié)果沒食子酸、兒茶素、番瀉苷B、番瀉苷A，以及五種游離蒽醌含量的RSD分別為1.7%、2.4%、1.7%、2.5%、2.4%、2.8%、3.1%、2.1%、2.9%。2.3.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取大黃樣品6份，每份0.5 g，分別精密加入沒食子酸、兒茶素、番瀉苷A、番瀉苷B、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品適量，按照供試品溶液制備方法處理，再按照上述色譜條件進(jìn)行測定，得沒食子酸、兒茶素、番瀉苷A、番瀉苷B、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的回收率分別為99.2%、97.6%、99.8%、97.7%、98.5%、96.1%、99.2%、101.4%、100.9%，RSD分別為2.0%、2.5%、1.3%、1.2%、2.6%、1.0%、2.7%、1.2%、1.6%。

3 結(jié)果與分析

3.1不同干燥處理對干燥時(shí)間的影響

不同干燥處理所需時(shí)間隨著溫度的升高而縮短，其中個(gè)子陰干、切片陰干、個(gè)子熏干所需時(shí)間較長，分別為50、30、30d。切片曬干方式所需時(shí)間稍短，只要15d；烘干方式所需時(shí)間最短，僅僅需要2～3d，能顯著的提高大黃的干燥效率。

3.2不同干燥處理對大黃游離蒽醌類成分含量的影響

不同干燥處理對大黃酸和大黃素甲醚和總游離蒽醌含量的影響達(dá)到了極顯著水平(P<0.01)，對大黃酚含量影響達(dá)到了顯著水平(P<0.05)。各類成分均以個(gè)子陰干含量最高，50℃烘干含量最低(表2)。以《中華人民共和國藥典》2015版新規(guī)定的總游離蒽醌含量為例，個(gè)子陰干樣品含量為0.380%，而50℃烘干樣品含量僅為0.115%，不同處理間含量相差可達(dá)3.32倍(表2)。此外，不同成分隨烘干溫度升高呈現(xiàn)不同趨勢，其中，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚和總游離蒽醌含量均隨著烘干溫度的上升含量逐漸升高。

3.3不同干燥處理對沒食子酸、番瀉苷A等4種成分含量的影響 不同干燥處理對2種酚酸類成分和2種二蒽酮苷類成分含量影響均達(dá)到了極顯著水平(P<0.01)(表3)。其中，沒食子酸以個(gè)子熏干處理含量最高，切片曬干含量最低；而兒茶素與番瀉苷A、番瀉苷B則均以個(gè)子陰干處理含量最高，50 ℃烘干處理的大黃兒茶素含量最低，60 ℃烘干處理的大黃番瀉苷A、番瀉苷B含量最低，不同干燥處理大黃番瀉苷A含量均能達(dá)到16版《日本藥局方》所要求的標(biāo)準(zhǔn)。

表2 不同干燥方法大黃游離蒽醌含量 (%)

注：*差異顯著(P<0.05)；**差異極顯著(P<0.05)。

表3 不同干燥方法大黃酚酸類和二蒽酮苷類成分含量 (%)

注：*差異顯著(P<0.05)；**差異極顯著(P<0.05)。

4 討論

4.1不同干燥方法對大黃活性成分含量影響的內(nèi)在機(jī)理

本研究結(jié)果表明，個(gè)子陰干處理下番瀉苷A、番瀉苷B百分含量最高，而50℃、60℃烘干處理方式的番瀉苷A、番瀉苷B百分含量最低，這可能是因?yàn)槎焱疹愒谑軣釛l件下不穩(wěn)定發(fā)生降解和互相轉(zhuǎn)化從而含量有所降低有關(guān)[7]。雖然不同干燥處理方式下番瀉苷A百分含量存在顯著性差異，但是均能達(dá)到16版《日本藥局方》所要求的0.25%的標(biāo)準(zhǔn)。

4.2產(chǎn)地加工中干燥方法和工藝對于大黃質(zhì)量再塑至關(guān)重要 有研究表明，中藥材采挖后的干燥過程是其質(zhì)量再塑的重要環(huán)節(jié)，以丹參為例，其所含丹酚酸B在新鮮丹參根中含量甚微，而在后續(xù)干燥過程中，隨著含水量變化才被不斷被合成出來[8]。本研究中也發(fā)現(xiàn)大黃所含各類成分也與不同干燥方法息息相關(guān)，歸納起來，獲得高含量的游離蒽醌、番瀉苷A、B宜采用個(gè)子陰干或個(gè)子熏干方法。

4.3大黃栽培中如何選擇經(jīng)濟(jì)高效干燥方法

綜合番瀉苷A、總游離蒽醌來看，以個(gè)子陰干處理方式較好，但是個(gè)子陰干處理所需時(shí)間較長(50d)，并且在實(shí)際生產(chǎn)過程中若僅僅采用此方式干燥可能會(huì)造成霉變而影響藥材外觀及質(zhì)量，相反，切片曬干處理僅僅需要15d，在實(shí)際生產(chǎn)過程中不僅能保證藥材外觀與質(zhì)量而且能大批量的生產(chǎn)，并且適用于各個(gè)大黃主產(chǎn)區(qū)。所以切片曬干處理是既能保證較高的番瀉苷A和總游離蒽醌百分含量又能提高生產(chǎn)效率產(chǎn)生較高的經(jīng)濟(jì)效益的方式。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：22-23.

[2] 傅興圣，陳菲，劉訓(xùn)紅，等.大黃化學(xué)成分與藥理作用研究新進(jìn)展[J].中國新藥雜志，2011(16)：1534-1538，1568.

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InfluenceonContentsofNineActiveCompoundsbyDifferentDryingMethodsinRhubarb

HUHuijuan1，LIUJia1，LIUJinyu1，TIANYe1，LIUYonggang2，GUANMeng2，LILi3，WEIShengli1,4*

(1.SchoolofChinesePharmacy，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100102，China；2.ChinaMehecoCorporation，Beijing100061，China；3.BeijingInstituteofChineseMedicine,Beijing100035，China；4.EngineeringResearchCenterofGoodAgriculturalPracticeforChineseCrudeDrugs，MinistryofEducation，Beijing100102，China)

Objective：To compare the influences on the quality of the rhubarb by the different drying methods，such as slices dried in the shade，slices dried in the sun，Gezi dried in the shade，Gezi fumigated-drying，baking temperature at 50 ℃，60 ℃，70 ℃ and 80 ℃.This research aims to prepare theory and technological knowledge to choose the appropriate drying method，improving the quality of medicines and economic benefit.Methods：HPLC was used to determinate the content of phenolic acids，dianthrone glycosides and free anthraquinones.Variance analysis was used to evaluate the quality of processed products.Results：In terms of total free anthraquinones，only Gezi dried in the shade，Gezi fumigated-drying，slices dried in the shade slices dried in the sun and，baking temperature at 80℃ were over 0.20% according to the ChP 2015.The sennoside A contents were the highest by Gezi dried in the shade，slices dried in the shade occupied the second range，baking temperature at 60℃ was the lowest.Yet，all samples from different groups were over 0.25% accroding to the JP 16.Conclusion：Compaire with the drying methods of drying by Gezi dried in the shade，the drying methods of slices dried in the sun was easier to promotion..

RheumtanguticumMaxim.ex Balf.；drying methods；habitat processing；medicinal material quality

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.7.021

2016-06-01)

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31170307;31570331)；國家工信部項(xiàng)目(YC12TY-1QT0007)

*

魏勝利，副教授，研究方向：中藥資源定向培育及中藥資源綜合開發(fā)；Tel：(010)84738334，E-mail:wsl7491@126.com