周　浩，翟一凡，胡澤章，邵莒南，代曉彥，吳光安，于　毅，鄭　禮

（山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所天敵與授粉昆蟲研究中心，山東　濟南　250100）

地熊蜂對設(shè)施農(nóng)業(yè)6種常用殺菌劑的敏感性研究

周浩，翟一凡，胡澤章，邵莒南，代曉彥，吳光安，于毅，鄭禮*

（山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所天敵與授粉昆蟲研究中心，山東濟南250100）

為了在溫室內(nèi)熊蜂授粉條件下科學(xué)使用殺菌劑，以地熊蜂工蜂為試材，參照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準則》，測定了6種溫室設(shè)施常用殺菌劑對地熊蜂的毒力，并對其進行了風險性評價。結(jié)果表明：地熊蜂對四霉素較敏感，其LD50為5.255mg/L，表現(xiàn)為中等毒性；地熊蜂對氫氧化銅、代森錳鋅、中生菌素、戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑較不敏感，LD50≥74.992 mg/L，均表現(xiàn)為低毒，其中，中生菌素和戊唑醇的LD50分別為206.994mg/L和207.560mg/L，毒性最低。在設(shè)施作物上使用地熊蜂授粉時，建議禁用對地熊蜂中毒的農(nóng)藥。在使用對地熊蜂中毒或低毒的農(nóng)藥時，可將熊蜂分別搬出溫室3 d和1d，以減少農(nóng)藥對地熊蜂的為害。另外，我們不建議使用代森錳鋅。

地熊蜂；溫室設(shè)施；殺菌劑；室內(nèi)毒力；安全評價

近年來設(shè)施農(nóng)業(yè)發(fā)展迅猛，生產(chǎn)面積快速增加，作物種類日趨增多，管理水平也逐步提高［1，2］。然而溫室生產(chǎn)缺少自然授粉昆蟲，農(nóng)民多采用人工激素蘸花的方式進行授粉，不僅費工費時，而且容易感染花器病害，嚴重影響果實產(chǎn)量和品質(zhì)。因此，蜂類傳粉成為溫室作物增產(chǎn)提質(zhì)的關(guān)鍵技術(shù)［3～5］。

熊蜂屬于膜翅目（Hymenoptera）蜜蜂科（Apoidea）熊蜂族（Bombini）熊蜂屬（Bombus），具有吻長、工作時間長、可聲震傳粉、耐低溫弱光等優(yōu)點［6］，利用熊蜂為溫室作物授粉，不僅可以提高產(chǎn)量，還可以改善果實品質(zhì)，縮短果實成熟期，減少應(yīng)用化學(xué)激素帶來的污染等［7］。研究表明，利用熊蜂授粉較使用激素生產(chǎn)的果實硬度更大，種子數(shù)量更多［8］，果型更好，可取得很好的經(jīng)濟效益。

與開放的露地環(huán)境相比，溫室設(shè)施是一個較為封閉的小氣候環(huán)境，通常表現(xiàn)為高溫高濕、空氣流通性差、高水高肥等，造成溫室內(nèi)病蟲害發(fā)生較為嚴重，化學(xué)農(nóng)藥使用更加頻繁［9］，而大量使用化學(xué)農(nóng)藥會嚴重影響熊蜂的授粉活動和使用壽命［10，11］。因此，研究溫室常用農(nóng)藥對熊蜂的毒性有助于科學(xué)指導(dǎo)溫室農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。

以溫室生產(chǎn)中常用的6種殺菌劑為研究對象，測定其對熊蜂的室內(nèi)毒力并對其毒性進行評價，可以為溫室內(nèi)采用熊蜂授粉時正確使用這些農(nóng)藥提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗材料

供試蜂種為地熊蜂（Bombus terrestris）。熊蜂群采自山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所天敵與授粉昆蟲研究中心，在溫度（25±2）℃、相對濕度60%± 10%、黑暗條件下飼養(yǎng)，期間不接觸化學(xué)農(nóng)藥和試劑。選擇個體大小基本一致的健康成年工蜂進行試驗。

參試殺菌劑為80%代森錳鋅可濕性粉劑（印度聯(lián)合磷化物有限公司）、0.3%四霉素水劑（遼寧微科生物工程有限公司）、46.1%氫氧化銅水分散粒劑（上海杜邦農(nóng)化有限公司）、12%中生菌素母藥（福建凱立生物制品有限公司）、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑（瑞士先正達作物保護有限公司）和430 g/L戊唑醇懸浮劑（德國拜耳作物科學(xué)有限公司）。

1.2試驗方法

按照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準則》（GB/T 31270.10—2014）的蜜蜂急性經(jīng)口毒性試驗［12］進行。分別將6種藥劑與50%的糖水混合，配制成系列濃度的混合液（表1）；以加入等量糖水處理為對照。將挑選的工蜂引入試驗籠中，然后在飼喂器中加入100 μL含有不同濃度藥液的50%（質(zhì)量濃度）蔗糖水溶液，同時對每處理的含藥蔗糖水溶液消耗量進行測定。當含藥蔗糖水溶液消耗完時，將盛食物的容器取出，然后換成不含藥液的蔗糖水溶液繼續(xù)飼喂（不限量）。每處理工蜂至少10只，3次重復(fù)。處理48 h后，記錄工蜂的中毒癥狀和死亡數(shù)。

表1　試驗設(shè)計的參試藥劑系列濃度Table 1　Fungicides concentration in the test

利用Spss 19.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行分析和計算，求得相應(yīng)的半致死劑量（LD50）。按照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準則》（GB/T 31270.10—2014）附錄《農(nóng)藥對蜜蜂毒性等級劃分》［12］的劃分標準，依據(jù)熊蜂急性經(jīng)口毒性的LD50（48 h），將農(nóng)藥對熊蜂的毒性劃分為4個等級（劇毒：LD50≤0.001；高毒：0.001＜LD50≤2.0；中毒：2.0＜LD50≤11.0，低毒：LD50＞11.0）。

2　結(jié)果與分析

2.16種殺菌劑對地熊蜂的毒力及風險性評價

四霉素的LD50最低，為5.255 mg/L，對地熊蜂毒力最高，其毒性等級為中毒；其他5種藥劑的LD50為74.992～207.560 mg/L，對地熊蜂的毒性等級均為低毒，其中，戊唑醇和中生菌素的毒力更低（表2）。

3　結(jié)論與討論

參試藥劑氫氧化銅、代森錳鋅、中生菌素、戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑和四霉素均屬于殺菌劑。其中，氫氧化銅在黃瓜角斑病、柑橘潰瘍病、煙草野火病、番茄早疫病和葡萄霜霉病等上均有登記。代森錳鋅屬于保護性殺菌劑，主要是抑制菌體內(nèi)丙酮酸的氧化，廖秀麗等［13］報道代森錳鋅對小峰熊蜂和紅光熊蜂均為高毒，與本研究結(jié)果不一致，原因可能是試驗所用熊蜂的種類不同。還有報道代森錳鋅對意大利蜜蜂低毒［14］，本研究結(jié)果顯示代森錳鋅對地熊蜂工蜂毒性表現(xiàn)為低毒，另外，我們還觀察到了溫室設(shè)施內(nèi)使用代森錳鋅后熊蜂不死亡但是也不訪花的現(xiàn)象，我們認為這可能是由代森錳鋅自身的臭雞蛋氣味和分解產(chǎn)物乙撐硫脲（ethylenethiurea，ETU）造成的［15］，我們將進一步開展研究驗證代森錳鋅對不同種類熊蜂的毒性以及導(dǎo)致熊蜂不訪花的原因。中生菌素為N-糖甙類抗生素，在黃瓜細菌性角斑病、蘋果樹輪紋病和番茄青枯病等病害上均有登記。戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑為甾醇抑制劑，主要通過抑制病原菌細胞膜上麥角甾醇的生物合成起作用［16］，本研究結(jié)果顯示戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑均對熊蜂表現(xiàn)低毒，這可能與熊蜂體內(nèi)沒有相關(guān)的作用靶標有關(guān)。四霉素為不吸水鏈霉菌梧州亞種的發(fā)酵代謝產(chǎn)物，有研究報道多數(shù)殺菌劑對熊蜂毒性較低［17］，并且一般認為植物源農(nóng)藥在體內(nèi)易被氧化酶系統(tǒng)降解，無蓄積性，毒性較低，使用安全［18］，但是本研究中四霉素對地熊蜂工蜂表現(xiàn)為中毒，這可能與其自身獨特的氣味有關(guān)。另外，陳昂［19］研究了5種植物源農(nóng)藥的環(huán)境毒性，發(fā)現(xiàn)印楝素對蜜蜂為劇毒，除蟲菊素對蜜蜂為高毒?？梢姡参镌崔r(nóng)藥并非都是安全無害的。

表2　6種殺菌劑對地熊蜂工蜂的室內(nèi)毒力Table 2　The toxicities of six fungicides to B.terrestris

本研究結(jié)果顯示，地熊蜂對氫氧化銅、代森錳鋅、中生菌素、戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑較不敏感，均表現(xiàn)為低毒。因此認為，在設(shè)施蔬菜上合理使用這5種藥劑，對熊蜂影響較小。

我們根據(jù)以上試驗結(jié)果以及各藥劑的安全間隔期，提出溫室內(nèi)使用熊蜂授粉時的用藥建議：在使用四霉素時，將熊蜂授粉群搬出溫室3 d；在使用氫氧化銅、中生菌素、戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑等低毒農(nóng)藥時，將熊蜂授粉群搬出溫室1 d。另外，代森錳鋅雖然在本試驗中表現(xiàn)為低毒，但觀察發(fā)現(xiàn)其會影響熊蜂的授粉活動，所以不建議使用。

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Evaluation the Susceptibility of Bombus terrestris to Six Fungicides Uses in Greenhouse

ZHOU Hao，ZHAI Yi-fan，HU Ze-zhang，SHAO Ju-nan，DAI Xiao-yan，WU Guang-an，YU Yi，ZHENG Li*（Benficial Insects Research Center，Institute of Plant Protection，Shandong Academy of Agricultural Sciences，Ji’nan 250100，China）

For scientific use of fungicides in the greenhouse of bumblebee pollination，with works of Bombus terrestris as materials，the oral toxicity of six greenhouse commonly used fungicides on Bombus terrestris were determined reference to Test Guidelines on Environmental Safety Assessment for Chemical Fungicides，and the risk assessments were conducted.The results showed that the sensitivity of tomatrine（LD50=5.255 mg/L）was highest to Bombus terrestris of six fungicides，showed moderately toxic.Bombus terrestris were not sensitive to copper hydroxide，mancozeb，difenoconazole，tebuconazole and zhongshengmycin with LD50≥74.992 mg/L，they all showed low toxic.Tebuconazole and zhongshengmycin was the lowest toxic with the LD50was 206.994 mg/L and 207.560 mg/L，respectively.When using bumblebees to pollinate for plants，we suggest that bumblebees can be moved out of the greenhouse for 3 days and 1 day to reduce the harm of pesticides to bumblebees when using the moderate or low toxic pesticides to bumblebees，respectively.Mancozeb was not recommended used with Bombus terrestris.

Bombus terrestris；Greenhouse；Fungicides；Toxic；Safety evaluation

S433.5

A

1008-1631（2016）03-0035-03

2016-01-18

山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)科帶頭人科研啟動項目；山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新重點項目“高檔蔬菜生產(chǎn)病蟲害生態(tài)防控關(guān)鍵技術(shù)研究”；山東省農(nóng)業(yè)重大應(yīng)用技術(shù)創(chuàng)新項目“設(shè)施蔬菜生態(tài)高效安全生產(chǎn)技術(shù)模式建立與示范”；山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系蜂產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團隊項目

周浩（1988-），男，山東泰安人，碩士，主要從事熊蜂的工廠化繁育及授粉應(yīng)用研究。E-mail：zhouenhao@126.com。

鄭禮（1964-），男，河北深州人，研究員，主要從事天敵與授粉昆蟲工廠化繁育研究。E-mail：zhengli64@126.com。