劉超祥，丁銳

(亳州職業(yè)技術學院藥學院，安徽 亳州 236800)

王珊

(亳州職業(yè)技術學院藥學院，安徽 亳州 236800;安徽中醫(yī)藥大學藥學院，安徽 合肥 230000)

丁連峰

(安徽濟人藥業(yè)有限責任公司，安徽 亳州 236800)

劉耀武

(亳州職業(yè)技術學院藥學院，安徽 亳州 236800)

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亳州疏毛羅勒揮發(fā)油化學成分及抗氧化與抑菌活性研究

劉超祥，丁銳

(亳州職業(yè)技術學院藥學院，安徽 亳州 236800)

王珊

(亳州職業(yè)技術學院藥學院，安徽 亳州 236800;安徽中醫(yī)藥大學藥學院，安徽 合肥 230000)

丁連峰

(安徽濟人藥業(yè)有限責任公司，安徽 亳州 236800)

劉耀武

(亳州職業(yè)技術學院藥學院，安徽 亳州 236800)

疏毛羅勒(OcimumbasilicumL)；揮發(fā)油(;抗氧化性;抑菌活性

疏毛羅勒(OcimumbasilicumL)為唇形科羅勒屬一年生全草植物，別名蘭香、九層塔等。其味辛甘、性溫，有疏風解表、行氣活血、解毒消腫之功效。主治感冒頭痛、發(fā)熱咳嗽、食積不化、中暑等癥[1,2]，還可用于蛇蟲咬傷和濕疹騷癢，且無毒副作用。近年來，羅勒的化學成分及生物活性研究引起國內外科研工作者關注，疏毛羅勒藥理學研究主要集中在降低血糖活性、抗應激活性、驅蟲活性、治療腹瀉、抗真菌活性和抗輻射引起的染色體損傷等領域[3,4]。

對亳州疏毛羅勒(羅勒變種，俗稱香花子)的實地調研和臨床觀察，發(fā)現(xiàn)亳州疏毛羅勒揮發(fā)油成分對蚊蟲叮咬引起的痛癢和炎癥具有特殊療效[5]?；诖?，本研究對亳州地區(qū)疏毛羅勒揮發(fā)油的化學成分分析、抗氧化及抑菌活性進行了研究，試圖找到疏毛羅勒揮發(fā)油成分對蚊蟲叮咬引起的痛癢與抑菌活性、抗氧化活性之間的聯(lián)系，為亳州地區(qū)疏毛羅勒的進一步開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

樣品：采自安徽省亳州職業(yè)技術學院藥用植物園，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學方成武教授鑒定。

主要儀器：RE-52A旋轉蒸發(fā)儀(亞榮生化儀器廠產品)，F(xiàn)A2004N電子天平(菁海儀器有限公司產品)，752紫外可見分光光度計(菁華科技儀器有限公司產品)，SHZ-(Ⅲ)循環(huán)水式多用真空泵(河南省予華儀器有限公司產品)，HH-1數(shù)顯恒溫水浴鍋(晶波實驗儀器廠產品)，456-GC型氣相色譜(Bruker公司生產),SCION單四級桿質譜儀(Bruker公司生產)，SPX-150B生化培養(yǎng)箱、MJX-160B霉菌培養(yǎng)箱、HPX -9082MBE電熱恒溫培養(yǎng)箱(均為上海博迅實業(yè)有限公司產品)，AR5120電子分析天平(美國奧豪斯國際貿易有限公司產品)。

試劑：羥甲基氨基甲烷、DPPH·、抗壞血酸(Vc)、鄰苯三酚、0.9%無菌氯化鈉溶液、丙酮等，所用試劑均為分析純。

菌株及培養(yǎng)基：大腸埃希菌(Escherichiacoli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、白色念珠菌(Candidaalbicans)、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、改良馬丁(瓊脂)培養(yǎng)基、氯化鈉蛋白胨緩沖液(pH 7.0)均由安徽濟人藥業(yè)有限責任公司檢測中心提供。

1.2方法

1.2.1揮發(fā)油的提取

取疏毛羅勒200g，剪碎，裝入500mL的圓底燒瓶中，水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油[6]，乙醚萃取，使用旋轉蒸發(fā)儀回收乙醚后，得到淡黃色透明油狀物0.9g，揮發(fā)油得率0.45%，具有特殊香味，低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2化學成分分析

采用氣-質聯(lián)用技術對疏毛羅勒揮發(fā)油成分進行分析。

氣相色譜條件：彈性毛細管色譜柱(BR-17型，奧嵩科學儀器有限公司產品，0.25μm×250μm×30m)，載氣：高純氦氣(南京上元工業(yè)氣體廠產品)，純度大于99.99%，柱流量1.0mL/min，采用分流進樣，分流比 10∶1，進樣量1.0μL，進樣口溫度為 220℃；程序升溫條件：初始溫度為40℃(2min)，以2℃/min的速度升溫至100℃(保持2min)，再以5℃/min的速度升溫至250℃。

質譜條件：EI離子源，電子能量70eV，離子源溫度為220℃，傳輸線溫度為260℃，四級桿溫度 為150℃；全掃描模式，掃描周期 1s，質譜檢索標準庫：NIST 11.L。

1.2.3抗氧化活性測定

抑制率 (I)={[(△D/△t)對照- (△D/△t)]/ (△D/△t)對照}× 100%

2)清除DPPH·自由基能力測定參考文獻[10,11]的方法測試目標化合物清除二苯代苦味?；杂苫?DPPH·)的能力。向1mL DPPH·乙醇溶液中加入不同濃度的疏毛羅勒揮發(fā)油使總體積達到2mL。振蕩器混勻后，室溫，避光放置30min后，在518nm波長處測定光密度D1，DPPH·乙醇溶液在518nm波長處測定光密度D0，平行測定3次，按下式計算清除率。用Vc進行空白對照。

清除率=[(D0-D1)/D0]×100%

1.2.4抑菌活性測定

采用杯碟法[12]，檢測疏毛羅勒揮發(fā)油對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌的抑制作用。樣品設5個濃度，分別為1050、525、262.5、131.25、65.625 μg/mL。

2　結果與分析

2.1疏毛羅勒揮發(fā)油化學成分

采用GC/MS分析對疏毛羅勒揮發(fā)油化學成分進行分析，共檢測出27個峰。對總離子流圖中的各峰經(jīng)質譜掃描后得到質譜圖，經(jīng)計算機質譜數(shù)據(jù)庫檢索按各色譜峰的質譜裂片圖并結合有關文獻對峰質荷比和相對豐度等進行直觀比較，同時還對一些主要成分采用標準物質對照，分別對各色譜峰加以確認，鑒定了疏毛羅勒揮發(fā)油組分中的化學成分，按面積歸一法確定各組分相對含量，分析結果見表1。

表1　疏毛羅勒揮發(fā)油化學成分的GC/MS的分析結果

由表1可知，疏毛羅勒揮發(fā)油成分鑒定出27種化合物，主要成分為萜類物質，占揮發(fā)油成分的60.61%。相對含量較高的是十六酸乙酸乙酯(44.16%)、酸松油酯(17.01%)、(s)-2,5,5,8-四甲基-1,2,3,6-四氫化薁-4-酮(9.92%)、香葉醇(3.05%)、3-(1,3-丁間二烯基)-2,4,4-三甲基-環(huán)己烯(2.42%)、肉桂酸甲酯(2.35%)、香樹烯(1.35%)、1,2,3,4,5,6,7,8,8a-八氫-1,4-二甲基-7-(1-異丙烯基)-甘菊環(huán)烴(1.52%)、莰烯(1.32%)及B-瑟林烯(1.09%)，其他成分含量較少。結合植物生源代謝途徑分析，認為疏毛羅勒揮發(fā)油成分主要通過甲戊二羥酸代謝合成途徑、莽草酸代謝合成途徑和乙酰-丙酮酸代謝合成途徑完成，沒有發(fā)現(xiàn)氨基酸代謝合成途徑產物。

2.2疏毛羅勒揮發(fā)油的抗氧化活性

表2　疏毛羅勒揮發(fā)油抗氧化活性

2.3 疏毛羅勒揮發(fā)油的抑菌活性

從表3結果可以看出，疏毛羅勒揮發(fā)油樣品有一定抑菌活性，對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌均有一定的抑菌作用并成濃度依賴，濃度越高，抑菌作用越明顯；但是對枯草芽孢桿菌的抑菌效果最差。

表3　疏毛羅勒揮發(fā)油抑菌活性的結果分析

3　結論

現(xiàn)代醫(yī)學研究證實諸多疾病的發(fā)生和發(fā)展與自由基導致的機體細胞氧化損傷密切相關，從天然產物中尋找安全有效的抗氧化劑成為近年來的研究熱點之一。本研究以抗DPPH·自由基能力為指標，評價疏毛羅勒揮發(fā)油成分的抗氧化能力；發(fā)現(xiàn)疏毛羅勒揮發(fā)油所含化學成分有較好的抗氧化性[13,14]；其揮發(fā)油對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌3株菌種隨濃度升高抑菌效果越明顯。試驗過程中還將其制成液體溶劑用于蚊蟲叮咬實驗，止癢效果也較明顯。此外，課題組從疏毛羅勒揮發(fā)油組分中分離純化到一個具有驅蚊活性的單體化合物和一個具有止癢效果的單體化合物，對2個化合物的藥理活性正在進一步研究和開發(fā)。

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2016-04-18

安徽省質量工程—藥學專業(yè)省級教學團隊項目(2013jxtd067);安徽省質量工程—藥品質量檢測技術特色專業(yè)項目(2014tszy055);安徽省高等學校自然科學研究項目重點課題(KJ2015A358);亳州市中藥科技創(chuàng)新團隊項目(BZ2014zzb21)。

劉超祥(1972-)，男, 博士, 副教授, 主要從事天然產物化學成分及生物活性研究,cxliu888@163.com。

Q949.777.6

A

1673-1409(2016)21-0034-04

[引著格式]劉超祥，丁銳,王珊,等.亳州疏毛羅勒揮發(fā)油化學成分及抗氧化與抑菌活性研究[J].長江大學學報(自科版) ，2016，13(21)：34～37.