朱志偉，張楷鴻，房獻(xiàn)忠，房俊雄（廣東省東莞市鳳崗鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523690）

東莞市鳳崗鎮(zhèn)外來豬O型口蹄疫抗體血清學(xué)調(diào)查

朱志偉，張楷鴻，房獻(xiàn)忠，房俊雄
（廣東省東莞市鳳崗鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523690）

用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和間接血凝試驗對采自東莞市鳳崗鎮(zhèn)的屠宰場的豬360份血清進(jìn)行O型口蹄疫抗體檢測，結(jié)果為O型口蹄疫抗體陽性數(shù)162份，總陽性檢出率為45%，其中2013年抗體陽性份數(shù)為62份，陽性率為51.67%；2014年抗體陽性份數(shù)為68份，陽性率為56.67%；2015年抗體陽性份數(shù)為32份，陽性率為26.67%，結(jié)果表明東莞市鳳崗鎮(zhèn)的外來豬O型口蹄疫抗體水平比較低不足抵抗野讀的侵襲。

O型口蹄疫；血清抗體；酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）；間接血凝試驗

口蹄疫（Foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的急性熱性高度接觸性傳染病，主要侵害偶蹄獸，偶見于人和其他動物。臨診上以口腔黏膜、蹄部及乳房皮膚發(fā)生水皰和潰爛為特征。具有明顯的季節(jié)性，多在秋季開始，冬季加劇，春季減緩，夏季平息。主要通過呼吸道、消化道、生殖道和損傷的皮膚和黏膜感染，其水皰液和水皰皮含毒量最高。由于輸入到東莞市鳳崗鎮(zhèn)的外來豬來源較多，為掌握生豬口蹄疫抗體水平，控制輸入生豬的質(zhì)量，保證餐桌上的肉食安全。采用了兩種檢測方法對鳳崗?fù)涝讏鲞M(jìn)行了血清學(xué)的季度監(jiān)測，取其中3年的結(jié)果分析，2013～2015年的監(jiān)測結(jié)果如下。

1　材料和方法

1.1被檢血清

2013年至2015年每個季度隨機(jī)抽取30份血清，檢測血清共360份。采自東莞市鳳崗鎮(zhèn)屠宰場。

1.2試劑

O型口蹄疫正向間接血凝診斷液、陰性對照、陽性對照，購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，批號：120104、130606。荷蘭Cedi口蹄疫病毒O型抗體ELISA檢測試劑盒，購自荷蘭Cedi公司，批號：20130205、2013032904。

1.3方法

1.3.1采用O型口蹄疫正向間接血凝抗試驗，依照NY/SY 150-2000《口蹄疫診斷技術(shù)規(guī)程》。

1.3.1.1待檢血清、陰陽性對照血清用FMD-O型專用稀釋液作1：16稀釋。

1.3.1.2在干凈血凝板上每孔加50μL稀釋液。取稀釋好的被檢樣品、陰陽性血清50μL倍比稀釋至第4孔后吸出50μL棄去，陽性血清稀釋到第8孔。

1.3.1.3加25μL血凝抗原到各孔，將血凝板置于微震蕩器上震蕩1～2min后蓋上玻板室溫下或37℃下靜置1.5～2h判定結(jié)果。

1.3.2口蹄疫抗體ELISA檢測方法（荷蘭Cedi公司ELISA方法），適用于檢測牛、豬、綿羊、山羊的血清中的口蹄疫O型（FMDV-type O）的抗體水平。

1.3.2.1待試劑回至室溫，使用前需輕搖混勻，避免產(chǎn)生氣泡。標(biāo)記被檢樣品與參考樣品在反應(yīng)板上的位置。

1.3.2.2吸取90μL ELISA緩沖液到各孔；吸取10μL參考血清和被檢樣品到對應(yīng)的孔中，蓋上孵育蓋，置20～25℃的室溫下孵育1h。

1.3.2.3倒掉酶標(biāo)板中的液體，用洗液洗板6次。最后一次沖洗時盡量拍干酶標(biāo)板。

1.3.2.4吸取100μL酶標(biāo)結(jié)合物溶液到各孔，蓋上孵育蓋，置20～25℃的室溫下孵育1h。

1.3.2.5倒掉酶標(biāo)板中的液體，用洗液洗板6次。最后一次沖洗時盡量拍干酶標(biāo)板。

1.3.2.6吸取100μL底物到所有孔，在20～25℃室溫下蓋上孵育蓋避光孵育15min，最后按照加底物同樣的順序和速度加終止液每孔100μL，混勻孔中液體。

1.3.2.7于酶標(biāo)儀450nm讀取并打印結(jié)果。

2　結(jié)　果

2013年和2014年的口蹄疫抗體檢測是用O型口蹄疫正向間接血凝抗試驗檢測，2015年用酶聯(lián)免疫吸附試驗即ELISA方法進(jìn)行抗體水平檢測。從3年的監(jiān)測數(shù)據(jù)來看，采集360份血清中，口蹄疫抗體陽性檢出率為45%。其中2013 年O型口蹄疫抗體陽性份數(shù)為62份，陽性率為51.67%；2014年O型口蹄疫抗體陽性份數(shù)為68份，陽性率為56.67%；2015年O型口蹄疫抗體陽性份數(shù)為32份，陽性率為26.67%。詳細(xì)結(jié)果見表1。

表1　2013～2015年O型口蹄疫抗體監(jiān)測結(jié)果

春季陽性份數(shù)為50份，陽性檢出率為55.56%。夏季陽性份數(shù)為38份，陽性檢出率為42.22%。秋季陽性份數(shù)為34份，陽性檢出率為37.78%；冬季陽性份數(shù)為40份，陽性檢出率為44.44%，詳細(xì)結(jié)果見表2：

表2　不同季節(jié)O型口蹄疫抗體檢測結(jié)果

3　小結(jié)與分析

3.1按照檢測結(jié)果來看，2013年與2014年的總體檢測結(jié)果差異不大，2015年的免疫水平明顯低于前兩年。只有2013年與2014年的第一季度抗體陽性檢出率在70%以上，其余的季度都不能達(dá)到免疫抗體合格率，有的甚至低于20%。據(jù)了解，2015年的免疫率下降是因為養(yǎng)殖戶的防疫意識薄弱，認(rèn)為即使沒有實施好國家規(guī)定的免疫計劃也沒有發(fā)生相關(guān)疫情，并且考慮到疫苗會影響豬只的生長速度延長出欄時間降低最大利潤，因此抱著僥幸的心理減少了部分豬只的免疫次數(shù)。

3.2因抽檢的地點是屠場，抽檢的生豬都是已經(jīng)出欄的商品豬，一般商品豬出欄時間是6～7個月，最后一次免疫是在90日齡，所以當(dāng)前檢測結(jié)果反映的是上一個季度的免疫情況。

3.3影響免疫抗體合格率的因素有疫苗的質(zhì)量、免疫對象的自身抵抗力、免疫程序等問題。就疫苗情況來說，生產(chǎn)疫苗的條件嚴(yán)格，國產(chǎn)疫苗的質(zhì)量未必能得到保證。而且疫苗的溫度波動是越小越好的，可如今物流公司泛濫，物流服務(wù)水平低下，運輸條件得不到保障，對疫苗的質(zhì)量也產(chǎn)生了一定的影響，甚至失效；就免疫程序來說，雖然國家已制定免疫計劃，但各地區(qū)未必能實施到位。強(qiáng)制免疫和計劃免疫的實施是要靠一支穩(wěn)定的、高素質(zhì)的獸醫(yī)隊伍的，對大多數(shù)基層動物防疫組來說，能做到、做好的只占少數(shù)。我國中小規(guī)模養(yǎng)殖場的動物防疫意識薄弱也是影響因素之一，因怕疫苗影響豬的生長速度只會造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

3.4強(qiáng)化防疫隊伍、加強(qiáng)養(yǎng)殖戶的防疫意識與對免疫程序的認(rèn)知、提高疫苗質(zhì)量也是保證肉食安全的有效方法。

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.08.022