唐玉鳳　劉思佳　陳吉祥　董美襯　郭慧娟　尚曉泓▲.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京　0009；.河北省深州市醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北深州　053800

北京地區(qū)健康成人紅細(xì)胞及網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)新參數(shù)參考區(qū)間的建立及驗(yàn)證

唐玉鳳1劉思佳2陳吉祥1董美襯1郭慧娟1尚曉泓1▲
1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京100091；2.河北省深州市醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北深州053800

目的 確立北京地區(qū)健康成人紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)新參數(shù)的生物參考區(qū)間，為臨床診療貧血性疾病和判定標(biāo)本是否溶血提供依據(jù)。方法 收集2014年9月～2015年3月中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院體檢中心健康體檢者的靜脈血448例，采用Sysmex XE-5000全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量（Ret-He）、紅細(xì)胞血紅蛋白含量（RBC-He）、Ret-He與RBC-He之差（D-He）、低色素紅細(xì)胞百分比（Hypo-He%）、高色素紅細(xì)胞百分比（Hyper-He%）、紅細(xì)胞碎片百分率（FRC%）、小紅細(xì)胞百分比（MicroR%）、大紅細(xì)胞百分比（MacroR%），用于建立上述參數(shù)的生物參考區(qū)間。Ret-He、RBC-He采用均數(shù)±1.96標(biāo)準(zhǔn)差（±1.96s）作為95%生物參考區(qū)間，D-He、FRC%、Hypo-He%、Hyper-He%、MicroR%、MacroR%以第2.5至第97.5百分位數(shù) （P2.5～P97.5）作為95%的參考區(qū)間。結(jié)果 北京地區(qū)健康成人紅細(xì)胞及網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)新參數(shù)生物參考區(qū)間如下:Ret-He:29.25～33.83 pg；RBC-He:26.52～30.04 pg；D-He:男1.51～4.89 pg、女1.73～4.24 pg；FRC%:男0～0.29%、女0～0.57%；Hyper-He%:男0.40%～0.60%、女 0.26%～0.60%；MicroR%:男 0.60%～1.70%、女 0.60%～1.60%；Hypo-He%:0.20%～0.78%；MacroR%:8.45%～17.40%。結(jié)論 不同地區(qū)人群的紅細(xì)胞及網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)新參數(shù)生物參考區(qū)間存在差異，有必要建立不同地區(qū)的生物參考區(qū)間，相關(guān)參數(shù)對(duì)貧血性疾病的診斷及鑒別診斷具有輔助作用，F(xiàn)RC%對(duì)判定標(biāo)本是否合格具有參考價(jià)值。

貧血性疾??；紅細(xì)胞；網(wǎng)織紅細(xì)胞；參數(shù)；參考區(qū)間

［Abstract］Objective Toestablishreferenceintervalsofsome new parameters for red blood cells and reticulocytes in Beijing area and provide evidence of diagnosis for anemia disease and identify whether specimen hemolysis.Methods Venous blood of 448 cases healthy control from September 2014 to March 2015 in Physical Examination Center of Xiyuan Hospital，China Academy of Chinese Medical Sciences was collected.Reticulocyte hemoglobin content（Ret-He），red blood cell hemoglobin（RBC-He），difference of Ret-He and RBC-He（D-He），percentage of hypochromia RBC（Hypo-He%），percentage of hyperchromia RBC（Hyper-He%），fragments of red blood cell（FRC%），percentage of microcyte （MicroR%），percentage of macrocyte（MacroR%）using Sysmex XE-5000 automatic blood analyzer.The reference intervals for Ret-He and RBC-He expressed as Mean±1.96 standard deviations（±1.96s）and for D-He，F(xiàn)RC%，Hypo-He%，Hyper-He%，MicroR%and MacroR%described as percentile from 2.5 to 97.5（P2.5-P97.5）.Results Reference intervals（±1.96s）of Ret-He，RBC-He were 29.25-33.83 pg and 26.52-30.04 pg in Beijing area.Reference intervals （P2.5-P97.5）were 1.51-4.89 pg in male and 1.73-4.24 pg in female for D-He，0-0.29%in male and 0-0.57%in female for FRC%，0.40%-0.60%in male and 0.26%-0.60%in female for Hyper-He%，0.60%-1.70%in male and 0.60%-1.60%in female for MicroR%，0.20%-0.78%for Hypo-He%and 8.45%-17.40%for MacroR%respectively.Conclusion It is necessary to establish the reference interval of Ret-He，RBC-He，D-He，MacroR%，MicroR%，F(xiàn)RC%，Hyper-He%，Hypo-He%.It will benefit diagnosis and differential diagnosis to anemia disease and contribute to identify whether specimen hemolysis.

［Key words］Anemia disease；Erythrocyte；Reticulocyte；Parameters；Reference interval

隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，新型、高端的血液分析儀提供的參數(shù)越來越多，Sysmex XE-5000全自動(dòng)血液分析儀除能夠檢測(cè)紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板和網(wǎng)織紅細(xì)胞等常規(guī)的29項(xiàng)參數(shù)外，還能夠檢測(cè)紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)新參數(shù)8項(xiàng)，包括網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量（Ret-He）、紅細(xì)胞血紅蛋白含量（RBC-He）、Ret-He與 RBC-He之差 （D-He）、大紅細(xì)胞百分比（MacroR%）、小紅細(xì)胞百分比（MicroR%）、紅細(xì)胞碎片百分率 （FRC%）、高色素紅細(xì)胞百分比 （Hyper-He%）、低色素紅細(xì)胞百分比（Hypo-He%），這些參數(shù)是在儀器檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的同時(shí)給出的研究參數(shù)，尚未應(yīng)用于臨床，這些參數(shù)對(duì)疾病的診斷、治療、預(yù)后評(píng)價(jià)是否有價(jià)值，還需要進(jìn)一步研究，本研究旨在建立北京地區(qū)紅細(xì)胞及網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)新參數(shù)的生物參考區(qū)間，為這些參數(shù)用于臨床貧血性疾病的診斷和鑒別診斷奠定基礎(chǔ)。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集2014年9月～2015年3月在中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）體檢中心健康體檢者標(biāo)本462例，均來自北京地區(qū)、漢族，年齡18～80歲，肝、腎功能正常，血、尿、便常規(guī)正常，糞便潛血陰性；查體無(wú)肝、脾腫大，無(wú)痔瘡，B超檢查未見異常，女性月經(jīng)正常（絕經(jīng)者除外），無(wú)陰道出血；無(wú)慢性疾病史和家族史。按照衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)［1］剔除離群值后，符合要求的血液樣本448例，其中男240例，年齡18～80歲，平均（47±18）歲；女208例，年齡19～79歲，平均（44± 16）歲。另收集2015年4月1～3日我院體檢中心健康體檢者男女血液樣本各20例對(duì)建立的參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。

1.2儀器與試劑

日本東亞SYSMEX株式會(huì)社生產(chǎn)的Sysmex XE-5000全自動(dòng)血液分析儀及其配套試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品。Sysmex XE-5000全自動(dòng)血液分析儀在進(jìn)行試驗(yàn)前按照實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可應(yīng)用說明要求［2］進(jìn)行性能驗(yàn)證，驗(yàn)證結(jié)果均滿足廠家說明書中的要求。

1.3實(shí)驗(yàn)操作

采集研究對(duì)象空腹靜脈血液2.0 mL，用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝。收集樣本后，首先排除凝固、溶血、脂血、黃疸樣本，以免對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響。在保證儀器性能狀況良好、室內(nèi)質(zhì)控在控的情況下，樣本采集后2 h內(nèi)采用Sysmex XE-5000全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)完畢，檢測(cè)指標(biāo)除血常規(guī)+網(wǎng)織紅細(xì)胞的常規(guī)29項(xiàng)參數(shù)外，還包括紅細(xì)胞及網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)新參數(shù)Ret-He、RBC-He、D-He、FRC%、Hypo-He%、Hyper-He%、MicroR%、MacroR%。儀器操作嚴(yán)格按照我院實(shí)驗(yàn)室制訂的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行，首先將樣本編號(hào)后放入待檢軌道，選擇儀器CBC+DIFF+RET檢測(cè)模式進(jìn)行自動(dòng)檢測(cè)，然后將檢測(cè)樣本所對(duì)應(yīng)的患者姓名、性別、年齡及相關(guān)檢測(cè)參數(shù)做詳細(xì)記錄。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，首先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn) （One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test），正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）描述，參考范圍取95%置信區(qū)間（1.96s），組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布的改用中位數(shù)（M）或四分位數(shù)間距（P25，P75）表示，組間比較采用Kruskal-Wallis H秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1正態(tài)性檢驗(yàn)及分層分析

分別對(duì)Ret-He、RBC-He、D-He、FRC%、Hypo-He%、Hyper-He%、MicroR%、MacroR%8項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，Ret-He、RBC-He為正態(tài)分布 （P＞0.05），D-He、FRC%、Hypo-He%、Hyper-He%、MicroR%、MacroR%6項(xiàng)參數(shù)均為偏態(tài)分布（P＜0.05）。

對(duì)Ret-He、RBC-He、D-He、FRC%、Hypo-He%、Hyper-He%、MicroR%、MacroR%8項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行性別間比較，Ret-He、RBC-He比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；其余6項(xiàng)參數(shù)比較采用秩和檢驗(yàn)，Hypo-He%和MacroR%組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05），D-He、FRC%、Hyper-He%、MicroR%組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05或P＜0.01）。見表1。

表1　不同性別網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)參數(shù)比較

2.2網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)新參數(shù)參考區(qū)間的建立

Ret-He、RBC-He采用均數(shù)±1.96標(biāo)準(zhǔn)差（±1.96s）作為95%參考區(qū)間，D-He、Hypo-He%、Hyper-He%、 MicroR%、MacroR%以第2.5百分位數(shù)至第97.5百分位數(shù)（P2.5～P97.5）作為 95%的參考區(qū)間，F(xiàn)RC%以0至第95.0百分位數(shù)（0～P95.0）作為95%的參考區(qū)間。見表2。

表2　不同性別網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)新參數(shù)的95%參考（P25～P97.5）

2.3參考區(qū)間驗(yàn)證

另收集2015年4月1～3日體檢中心健康體檢者男女樣本各20例，按照衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)［1］要求對(duì)所建立的紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)項(xiàng)目參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，所得結(jié)果均處于所建立參考區(qū)間范圍內(nèi)。

3　討論

Sysmex XE-5000全自動(dòng)血液分析儀能提供的紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)新參數(shù)有Ret-He、RBC-He、D-He、MacroR%、MicroR%、FRC%、Hyper-He%、Hypo-He%。Ret-He是反映網(wǎng)織紅細(xì)胞的平均血紅蛋白含量，RBC-He是反映成熟紅細(xì)胞的平均血紅蛋白含量。從原始幼稚紅細(xì)胞發(fā)育至網(wǎng)織紅細(xì)胞后，紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白合成就會(huì)停止，其含量在之后整個(gè)紅細(xì)胞生命周期中都會(huì)比較穩(wěn)定［3］，但由于成熟紅細(xì)胞壽命為120 d，鐵缺乏早期，RBC-He變化不明顯，而網(wǎng)織紅細(xì)胞半衰期僅為1～2 d，因此Ret-He可間接反映前2～3 d的鐵缺乏及紅細(xì)胞的生成情況［4-5］，Ret-He是反映體內(nèi)鐵儲(chǔ)備的新指標(biāo)［6］，主要用于診斷兒童、孕婦、成年人鐵缺乏與缺鐵性貧血（IDA）、監(jiān)測(cè)鐵劑治療及慢性病貧血（ACD）時(shí)功能性鐵缺乏的診斷。此指標(biāo)具有生物變異度小、不受炎性反應(yīng)影響、檢測(cè)所需標(biāo)本量少等優(yōu)點(diǎn)。在國(guó)外應(yīng)用較多，但國(guó)內(nèi)應(yīng)用尚不成熟［7-10］。有研究表明，Ret-He對(duì)診斷缺鐵性貧血有較高的診斷效率［11］。D-He為Ret-He和RBC-He的差值，反映體內(nèi)血紅蛋白的狀態(tài)，D-He接近于0，說明近期體內(nèi)血紅蛋白的合成處于平衡穩(wěn)定狀態(tài)。負(fù)值說明機(jī)體內(nèi)血紅蛋白的合成在減少，正值則提示血紅蛋白有上升趨勢(shì)，見于貧血性疾病治療有效后，能及時(shí)反映骨髓生成紅細(xì)胞的狀態(tài)，不僅可用于貧血的診斷和鑒別診斷，也有助于臨床對(duì)骨髓造血功能和造血系統(tǒng)重建進(jìn)行早期評(píng)價(jià)。Hypo-He%是低色素紅細(xì)胞百分比，與Ret-He共同使用可用于缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血的診斷、鑒別診斷及應(yīng)用促紅細(xì)胞生成素治療腎臟疾病的療效觀察，且對(duì)兒童貧血性疾?。?2］及血液透析患者鐵缺乏的診斷亦有臨床價(jià)值［13］。Hyper-He%是高色素紅細(xì)胞百分比，結(jié)合網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比、中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（MFR%）、高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（HFR%）、未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞比率（IRF）對(duì)診斷或鑒別診斷溶血性貧血有重要價(jià)值，特別是對(duì)遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥和自身免疫性溶血性貧血有重要的診斷意義。FRC%是紅細(xì)胞碎片百分率，該參數(shù)可用于與血管內(nèi)皮細(xì)胞破壞相關(guān)的疾病的監(jiān)測(cè)，如血栓性血小板減少性紫癜 （TTP）和微血管病性溶血性貧血（MAPA）等。MicroR%、MacroR%分別指小紅細(xì)胞百分比和大紅細(xì)胞百分比，二者可輔助用于各種類型貧血的鑒別診斷和療效觀察。因此，紅細(xì)胞及網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)新參數(shù)參考區(qū)間的建立，對(duì)貧血性疾病的診斷、鑒別診斷和療效觀察能提供輔助作用。

本研究結(jié)果顯示，Ret-He的生物參考區(qū)間與吳衛(wèi)等［14］報(bào)道的接近，而比劉小敏［15］的研究結(jié)果低，這是因?yàn)楸敬窝芯康膮⒖既巳号c前者同屬于北京地區(qū)，而后者的研究對(duì)象為深圳地區(qū)，這充分說明了不同人群由于地理環(huán)境、生活方式以及生理結(jié)構(gòu)等因素的差異而導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)鐵含量的不同，從而會(huì)導(dǎo)致不同人群Ret-He含量有所差異［16］，因此建立不同地區(qū)實(shí)驗(yàn)室的生物參考區(qū)間尤為重要。

紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)的8項(xiàng)參數(shù)中，F(xiàn)RC%只有參考上限有臨床意義，所以將0至第95.0百分位數(shù)（0～P95.0）作為95%的參考區(qū)間值，其他7項(xiàng)參數(shù)參考上下限均有臨床意義，以第2.5百分位數(shù)至第97.5百分位數(shù)（P2.5～P97.5）作為95%的參考區(qū)間值。結(jié)果顯示D-He、FRC%、Hyper-He%、MicroR%的參考區(qū)間表現(xiàn)出性別差異，這可能與女性月經(jīng)、懷孕、哺乳、內(nèi)分泌等生理因素有關(guān)。李薇等［17］的研究結(jié)果卻有所不同，僅表現(xiàn)為Hypo-He%、FRC%有性別差異，而DHe、Hyper-He%、MicroR%無(wú)性別差異，這可能與所選擇的的人群、檢測(cè)系統(tǒng)不同有關(guān)。

全血細(xì)胞分析所用標(biāo)本為全血，分析前檢測(cè)人員很難識(shí)別標(biāo)本是否溶血，但根據(jù)血液分析儀檢測(cè)原理，紅細(xì)胞和血小板為同一通道檢測(cè)，儀器會(huì)將FRC當(dāng)做血小板計(jì)數(shù)從而使血小板計(jì)數(shù)假性升高，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤，可能給臨床診療造成困擾，國(guó)內(nèi)已有學(xué)者做過相關(guān)方面的研究和報(bào)道［18-20］。因此，F(xiàn)RC%可作為判斷標(biāo)本溶血導(dǎo)致血小板假性增高的篩查手段，F(xiàn)RC%能否作為確定標(biāo)本溶血的唯一指標(biāo)及判定臨界值是我們今后研究的方向。

Ret-He在診斷缺鐵性疾病的作用已明確，但RBC-He、D-He、MacroR%、MicroR%、FRC%、Hyper-He%、Hypo-He%這七項(xiàng)參數(shù)對(duì)血液系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別診斷的意義還需大樣本研究，北京地區(qū)上述參數(shù)參考區(qū)間的建立和驗(yàn)證，為研究這些新參數(shù)在貧血性疾病診療中的作用奠定了基礎(chǔ)。但由于不同地區(qū)人群的紅細(xì)胞及網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)參數(shù)生物參考區(qū)間存在差異，有必要建立不同地區(qū)的生物參考區(qū)間。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.WS/T 402-2012臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間的制定［S］.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2013.

［2］中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).CNAS-CL43醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床血液學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說明，2015.

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Establishment and verification of the reference range of the new parameters related to red blood cells and reticulocytes of healthy adults in Beijing

TANG Yufeng1LIU Sijia2CHEN Jixiang1DONG Meichen1GUO Huijuan1SHANG Xiaohong1▲
1.Department of Clinical Laboratory，Xiyuan Hospital，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing100091，China；2.Department of Clinical Laboratory，Shenzhou County Hospital，Hebei Province，Shenzhou053800，China

R446.11

A

1674-4721（2016）08（a）-0125-04

2016-04-24本文編輯:任念）

唐玉鳳（1971-），女，副主任技師，碩士研究生；研究方向:臨床檢驗(yàn)及血液學(xué)檢驗(yàn)。