馬寶花，周學(xué)鋒，王帥，楊海,2

(1青島市中心醫(yī)院，山東青島266042；2中國(guó)海洋大學(xué)醫(yī)藥學(xué)院)

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解毒化瘀方灌胃對(duì)S180荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)及免疫系統(tǒng)的影響

馬寶花1，周學(xué)鋒1，王帥1，楊海1,2

(1青島市中心醫(yī)院，山東青島266042；2中國(guó)海洋大學(xué)醫(yī)藥學(xué)院)

目的研究解毒化瘀方對(duì)S180荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)及免疫系統(tǒng)的影響。方法 制備S180實(shí)體瘤動(dòng)物模型。將S180荷瘤小鼠分為陰性對(duì)照組、氟尿嘧啶組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組。腫瘤接種24 h后開(kāi)始給藥，氟尿嘧啶組給予氟尿嘧啶(無(wú)菌生理鹽水配制2 mg/mL溶液)，20 mg/kg，腹腔注射，隔天1次，共8 d。中藥低、中、高劑量組給予解毒化瘀藥(藥物濃度為0.48 g/mL)，其劑量分別為2.4、4.8、9.6 g/kg，灌胃給藥，1次/d，共12 d。陰性對(duì)照組灌胃同等體積的無(wú)菌生理鹽水。觀察小鼠行為表現(xiàn)、體質(zhì)量變化，測(cè)算腫瘤抑制率、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)等指標(biāo)。結(jié)果與陰性對(duì)照組比較，氟尿嘧啶組抑瘤率升高，小鼠體質(zhì)量和脾臟指數(shù)下降(P均<0.05)，中藥低、中、高劑量組與陰性對(duì)照組比較腫瘤質(zhì)量、腫瘤抑制率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與陰性對(duì)照組比較，中藥中劑量組胸腺指數(shù)升高，低、中劑量組脾臟指數(shù)升高(P均<0.05)，用藥期間小鼠行為無(wú)異常。結(jié)論 解毒化瘀方灌胃對(duì)S180荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)無(wú)直接抑制作用，能提高其免疫功能，且安全性好。

中藥；解毒化瘀方；S180小鼠；胸腺指數(shù)；脾臟指數(shù)

解毒化瘀方為山東省名老中醫(yī)臨床應(yīng)用多年驗(yàn)方。臨床觀察發(fā)現(xiàn)，該中藥方能明顯提高中晚期惡性腫瘤患者的生活質(zhì)量及機(jī)體免疫功能，減輕放化療不良反應(yīng)[1]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，該中藥方對(duì)免疫力低下小鼠T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞有促進(jìn)增殖作用，并能增加自然殺傷細(xì)胞的殺傷力[2]。為進(jìn)一步明確該中藥方體內(nèi)對(duì)腫瘤生長(zhǎng)及免疫器官的影響，2015年9月～2016年3月，本文進(jìn)行了相關(guān)探討?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1材料實(shí)驗(yàn)小鼠為昆明鼠(體質(zhì)量22～2 4 g、雄性，購(gòu)自于山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司質(zhì)檢中心，許可證號(hào)：SCXK魯20130001)；S180肉瘤細(xì)胞株(由首都醫(yī)科大學(xué)提供，本實(shí)驗(yàn)室小鼠體內(nèi)傳代保存)；陽(yáng)性藥：氟尿嘧啶(阿拉丁，批號(hào)J1330022)；受試藥：實(shí)驗(yàn)用解毒化瘀方(由黃芪、白術(shù)、茯苓等11味中藥組成，按照傳統(tǒng)水煎方法提取、濃縮至含原藥0.48 g/mL)。超凈臺(tái)(SW-CJ-2F)：蘇州凈化設(shè)備有限公司；倒置顯微鏡(BX53):日本奧林帕斯公司；十萬(wàn)分之一天平(MS105DU)：瑞士梅特勒公司；離心機(jī)Thermo 21R：美國(guó)Thermo公司；超低溫冰箱(DW-86L388A):中國(guó)海爾公司；高壓滅菌鍋(MLS-3781L)：日本三洋公司；超凈純水器(AdvantageA5):美國(guó)密理博公司。

1.2模型制備及分組S180肉瘤細(xì)胞株由小鼠腹水傳代后，取小鼠傳代腹水用無(wú)菌生理鹽水稀釋成1 000萬(wàn)/mL 細(xì)胞懸液。抽取細(xì)胞懸液，常規(guī)消毒后按每只0.2 mL接種于小鼠右前肢腋部皮下，每只小鼠接種200萬(wàn)細(xì)胞，制備S180實(shí)體瘤動(dòng)物模型[3]。將接種腫瘤后小鼠隨機(jī)分為五組，每組14只，分別為陰性對(duì)照組、氟尿嘧啶組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組。腫瘤接種24 h后開(kāi)始給藥，氟尿嘧啶組給予氟尿嘧啶(無(wú)菌生理鹽水配制2 mg/mL溶液)，20 mg/kg，腹腔注射，隔天1次，給藥8 d。中藥低、中、高劑量組給予解毒化瘀方(藥物濃度為0.48 g/mL)，其劑量分別為2.4、4.8、9.6 g/kg，灌胃給藥，1次/d，共給藥12 d。陰性對(duì)照組灌胃同等體積的無(wú)菌生理鹽水，1次/d，共給予12 d。

1.3 小鼠體質(zhì)量、腫瘤抑制率及胸腺、脾臟指數(shù)的測(cè)算 記錄小鼠的一般情況(飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、中毒表現(xiàn)和死亡情況等)，每日稱(chēng)體質(zhì)量，統(tǒng)計(jì)小鼠體質(zhì)量變化趨勢(shì)。最后1次給藥后24 h，處死小鼠，剝離其腫瘤組織，稱(chēng)腫瘤質(zhì)量，計(jì)算抑瘤率。抑瘤率計(jì)算公式為：腫瘤抑制率(%)=[1-(實(shí)驗(yàn)組平均瘤質(zhì)量/對(duì)照組平均瘤質(zhì)量)]×100%。同時(shí)摘取小鼠的胸腺及脾臟，剝離被膜，分別記錄小鼠的胸腺及脾臟的質(zhì)量，計(jì)算胸腺及脾臟指數(shù)。計(jì)算公式：胸腺指數(shù)=100×胸腺質(zhì)量/體質(zhì)量；脾臟指數(shù)=100×脾臟質(zhì)量/體質(zhì)量[4]。

2　結(jié)果

2.1各組不同時(shí)間S180荷瘤小鼠體質(zhì)量比較見(jiàn)表1。 中藥低、中、高劑量組小鼠的精神狀態(tài)和被毛的光澤度優(yōu)于氟尿嘧啶組及陰性對(duì)照組。各組不同時(shí)間體質(zhì)量比較，P均>0.05。

表1　各組不同時(shí)間小鼠體質(zhì)量比較

2.2各組腫瘤質(zhì)量及腫瘤抑制率比較 見(jiàn)表2。

表2　各組腫瘤質(zhì)量及腫瘤抑制率比較

注：與陰性對(duì)照組比較，*P<0.01 。

2.3各組胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)比較見(jiàn)表3。

表3　各組胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)比較±s)

注:與陰性對(duì)照組比較，*P<0.05,**P<0.01。

3　討論

解毒化瘀方是經(jīng)多年的臨床實(shí)踐不斷探索、總結(jié)的成果，其由黃芪、白術(shù)、茯苓等11味中藥組成，通過(guò)滋腎益肝、調(diào)補(bǔ)脾胃、清熱解毒達(dá)到治療目的。組方符合腫瘤患者機(jī)體免疫力低、久病體虛、病邪未盡的病理特點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)采用S180小鼠肉瘤細(xì)胞株制備小鼠實(shí)體瘤模型,通過(guò)灌胃治療的方式對(duì)解毒化瘀組方在體內(nèi)的抑瘤作用進(jìn)行了研究，以低、中、高三個(gè)劑量給藥，同時(shí)設(shè)生理鹽水作陰性對(duì)照。 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中未發(fā)現(xiàn)各組小鼠行為異常，給藥期間未見(jiàn)明顯的過(guò)敏等不良反應(yīng)，中藥各劑量組小鼠的體質(zhì)量有增加趨勢(shì)，但與陰性對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明該中藥方不影響小鼠的自然生長(zhǎng)。

本實(shí)驗(yàn)中，陰性對(duì)照組的腫瘤平均質(zhì)量為1.5 g以上，證明S180實(shí)體瘤動(dòng)物模型構(gòu)建成功[5]。 氟尿嘧啶是抗代謝的抗腫瘤藥物，在抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究中被廣泛應(yīng)用為陽(yáng)性對(duì)照藥物，因此本研究設(shè)定其為本實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照藥物。本研究顯示，氟尿嘧啶有明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)作用。氟尿嘧啶組小鼠體質(zhì)量和脾臟指數(shù)下降，表明氟尿嘧啶對(duì)S180腫瘤小鼠免疫系統(tǒng)有抑制作用。中藥低、中、高劑量組與陰性對(duì)照組比較腫瘤質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中藥中劑量組胸腺指數(shù)升高，中藥低、中劑量組脾臟指數(shù)升高，表明該解毒化瘀方具有一定的免疫保護(hù)作用或提高免疫力作用。結(jié)合小鼠精神狀態(tài)及皮毛光澤度較氟尿嘧啶組、陰性對(duì)照組好，提示該解毒化瘀方可能并非通過(guò)殺滅腫瘤細(xì)胞發(fā)揮作用，而是通過(guò)提高機(jī)體免疫發(fā)揮治療腫瘤作用。中藥高劑量組小鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)與陰性對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分析原因可能是高劑量組藥液濃度高、藥液黏稠，灌胃給藥后藥物在胃腸道吸收相對(duì)較差，反而不利于藥效發(fā)揮。

[1] 耿傳信，王曉璐，仇淑真，等.解毒化瘀方治療惡性腫瘤54例[J].中國(guó)藥業(yè)，2015，24(6):72-73.

[2] 楊海,耿傳信,趙峽,等.解毒化瘀中藥組方對(duì)免疫低下模型小鼠免疫功能的影響[J].國(guó)際藥學(xué)研究雜志,2016，43(1)：157-161.

[3] 遲淑萍,張?jiān)婟?陳紅鴿,等．S180瘤株對(duì)動(dòng)物模型體內(nèi)荷瘤的影響及致瘤機(jī)制[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2014,11(27):9-11.

[4] 劉繼平,許海,胡銳,等．梔子油對(duì)S180荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)及胸腺、脾指數(shù)的影響[J]．西北藥學(xué)雜志,2010(2):112-114.

[5] 徐力,侯麗,劉杰,等．茶多酚對(duì)移植性S180小鼠腫瘤模型抑瘤率的影響[J]．中華中醫(yī)藥雜志,2005,20(12):718-720.

青島市中醫(yī)科研計(jì)劃項(xiàng)目(2014-zyy022，2015-zyy026)。

楊海(E-mail：teaplate79@medmail.com.cn)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.17.012

R979.1

A

1002-266X(2016)17-0037-02

2015-10-09)