柏永華，劉　圣（遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，貴州遵義563003）

高危型HPV-DNA檢測在宮頸病變篩查和隨訪中的應(yīng)用

柏永華，劉圣（遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，貴州遵義563003）

目的分析高危型人乳頭瘤病毒DNA（HPV-DNA）檢測在宮頸病變和宮頸癌篩查中的應(yīng)用效果。方法選取2014年7月至2015年7月在該院接受宮頸癌前病變篩查患者150例，采用液基薄層細(xì)胞學(xué)試驗（TCT）和高危型HPV-DNA第2代雜交捕獲技術(shù)進(jìn)行病變檢查，再行陰道鏡下病理活檢確診，分析TCT與HPV-DNA檢測結(jié)果與病理活檢結(jié)果的符合率。結(jié)果高危型HPV-DNA的檢出率［92.7%（139/150）］與病理活檢結(jié)果［98.0%（147/150）］的符合率較高，且均明顯高于TCT［82.7%（124/150）］檢測結(jié)果，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論高危型HPV-DNA檢測在宮頸癌前病變篩查中可作為細(xì)胞學(xué)檢查的輔助手段，提高診斷準(zhǔn)確性，并可指導(dǎo)HPV感染者的治療及用于患者的追蹤隨訪。

DNA，病毒；宮頸疾病；宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變；宮頸腫瘤；普查；乳頭狀瘤病毒科

宮頸癌是臨床上最常見的一種惡性腫瘤，在女性惡性腫瘤中排名第二，僅次于乳腺癌［1］。近幾年來，隨著人們生活水平的不斷提高，女性的生活方式也發(fā)生了巨大的變化，宮頸癌的發(fā)病年齡日趨年輕化，且發(fā)病率正以每年2%～3%的速度持續(xù)上升，對廣大女性的身體健康和生活質(zhì)量造成嚴(yán)重影響［2-3］。大量臨床研究顯示，引發(fā)宮頸病變的因素比較復(fù)雜，其中宮頸人乳頭瘤病毒（HPV）感染是引發(fā)宮頸癌的一個重要原因，也是當(dāng)前臨床公認(rèn)的因素［4-5］。1977年Zur Hausen［4］首次提出HPV可能是引發(fā)宮頸癌的高危因素，之后國內(nèi)學(xué)者對此進(jìn)行了深入研究，相關(guān)研究均證實HPV感染與宮頸癌關(guān)系密切，尤其是13種高危型HPV（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68）感染與宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)［6-7］。

相關(guān)研究顯示，宮頸癌患者越早接受治療，預(yù)后效果越顯著［5，8］，早期篩查并確認(rèn)病情后，針對病情采取科學(xué)、有效的治療措施，可有效提高患者的生存率，臨床效果十分顯著。因此，找到一種快速、有效的宮頸癌前病變篩查方法成為臨床工作者高度關(guān)注的問題。液基薄層細(xì)胞學(xué)試驗（TCT）是宮頸癌前病變篩查方法發(fā)展過程中的里程碑，其診斷敏感度較高，不易出現(xiàn)假陰性，但是對于一些典型的鱗狀上皮細(xì)胞的分辨效果并不顯著。近年來，高危型HPV-DNA檢測逐步應(yīng)用于宮頸癌前病變的檢測，而且取得良好效果，已成為當(dāng)前臨床研究的熱點［8-9］。本文主要就高危型HPV-DNA檢測在宮頸癌前病變篩查和隨訪中的應(yīng)用進(jìn)行分析。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2014年7月至2015年7月在本院接受宮頸病變篩查的患者150例，年齡25～59歲，平均（28.5±5.8）歲?；颊呔驮\原因為白帶異常、陰道不規(guī)則出血及性交出血等。所有患者已排除無性生活史，有宮頸病變史及已進(jìn)行宮頸癌前病變篩查。所有患者對本研究均知情同意，均采用TCT和高危型HPV-DNA檢查后，再行陰道鏡下病理活檢確診。

1.2方法

1.2.1高危型HPV-DNA檢測（1）應(yīng)用高危型HPVDNA第2代雜交捕獲技術(shù)（HC2），儀器由深圳凱杰生物有限公司提供，標(biāo)本采集使用HC2檢測專用采樣刷，放置于患者宮頸口內(nèi)，順時針或逆時針旋轉(zhuǎn)3圈后，停留10 s再取出，將采樣刷放入事先準(zhǔn)備的標(biāo)本儲存瓶中，標(biāo)記送檢。（2）使用酶切信號放大法檢測13種高危型HPV，包括HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68，使用試劑含有三組寡核苷酸混合物：①A5/A6，對HPV 51、56、68型進(jìn)行檢測；②A7，對HPV 18、39、45、59、58型進(jìn)行檢測；③A9，對HPV 16、31、33、35、52、58型進(jìn)行檢測。同時將與人2型組蛋白基因結(jié)合的寡核苷酸作為內(nèi)部質(zhì)控。高危型HPV-DNA檢測試劑與耗材由北京英碩力公司提供，DNA提取與Cervista檢測嚴(yán)格參照試劑說明書進(jìn)行。

1.2.2TCT檢測所有患者均使用一次性取樣器，將取樣器尖端放入患者宮頸管內(nèi)部，兩邊緊貼頸管外口，以順時針方向轉(zhuǎn)動5周，之后將采樣器直接吸入到裝有新柏氏（Thinprep）細(xì)胞保存液的小瓶中送檢，經(jīng)Thinprep系統(tǒng)程序化處理，制作成直徑為2 cm的超薄玻片，加入95%乙醇進(jìn)行固定，以巴氏染色，細(xì)胞學(xué)診斷采用TBS分類法。

1.2.3陰道鏡下病理活檢對所有患者行陰道鏡下病理活檢，主要觀察患者宮頸鱗狀上皮、柱狀上皮及轉(zhuǎn)化區(qū)的顏色、形狀及血管變化，對醋酸實驗顯示可疑病變區(qū)與碘陰性區(qū)實施多點活檢，如果陰道鏡下未發(fā)現(xiàn)可疑病變者，于轉(zhuǎn)化區(qū)的3、6、9、12點實施多點活檢，之后進(jìn)行病理學(xué)檢查，以病理檢查結(jié)果為最終標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.4判定標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞學(xué)與所有活檢標(biāo)本均交由專業(yè)病理科醫(yī)生通過TBS分類法進(jìn)行診斷，高危型HPVDNA檢測以高于50 copy/mL為陽性。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以±s表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)　果

高危型HPV-DNA檢測結(jié)果與陰道鏡下病理活檢結(jié)果的符合率較高，且明顯高于TCT檢測結(jié)果，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1　3種檢測方法的HPV感染情況比較［n（%）］

3　討　論

近年來，我國宮頸癌的發(fā)生率逐年上升，而且呈顯著年輕化趨勢，對我國婦女的健康造成了嚴(yán)重的威脅。國內(nèi)外對宮頸癌的病因進(jìn)行了深入研究，結(jié)果顯示，宮頸上皮內(nèi)瘤變是發(fā)生在癌癥前期的病變，因此，在宮頸癌患者的臨床治療中應(yīng)引起高度重視，對癥處理具有重要意義。TCT是一種比較先進(jìn)的宮頸癌細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)，與常規(guī)制片方法比較，其對樣本的收集率進(jìn)行了有效的改進(jìn)，并將細(xì)胞均勻地分布于載玻片上，大幅度提高了發(fā)現(xiàn)鱗狀上皮低度和高度病變的敏感度，在臨床宮頸癌前病變的篩查中已得到廣泛運(yùn)用［6-7］。

HPV是一種嗜上皮性病毒，目前已確定HPV的類別共有110種，而且國內(nèi)外已將HPV感染公認(rèn)為是引發(fā)宮頸癌的重要原因，患者感染高危型HPV后很容易引發(fā)宮頸癌。在目前發(fā)現(xiàn)的110種HPV類型中，大多數(shù)的亞型不會對人類的身體健康造成傷害，大部分機(jī)體感染這些無害的HPV亞型病毒后，可以通過自身免疫系統(tǒng)進(jìn)行自動清除。但是其中有13種HPV亞型病毒可能會導(dǎo)致癌癥，分別是HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68，這些亞型病毒被臨床統(tǒng)稱為高危險HPV，因此，高危型HPV-DNA檢測可作為宮頸癌及癌前病變的重要篩查指標(biāo)。以往研究表明，高危型HPV感染與宮頸病變有著密切關(guān)系，高危型HPV感染患者發(fā)生宮頸癌與癌前病變的比例明顯高于未受到感染者，有75%的女性一生中一定會受到一次HPV感染，其中性活躍期的女性受到HPV感染的概率最高［5］。正常情況下，機(jī)體可以自動識別并將感染到的HPV自動清除，但隨著HPV感染次數(shù)的增加，機(jī)體發(fā)生宮頸癌的風(fēng)險也會隨之增加。呂向華［10］收集22個國家的宮頸癌活檢標(biāo)本進(jìn)行檢測后發(fā)現(xiàn)，其中99.7%的宮頸病變患者的病變組織中都能檢測到HPV-DNA的存在，提示高危型HPV-DNA檢測在篩查宮頸癌及癌前病變中的靈敏度較高，而且陰性預(yù)測值也非常高。大量研究報道也證實，高危型HPV-DNA的陰性預(yù)測值可達(dá)99.0%［11］。

本研究結(jié)果顯示，TCT與高危型HPV-DNA檢測在宮頸癌前病變檢測中均能取得較好效果，但是高危型HPV-DNA檢測的陽性檢出率更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而且其檢測結(jié)果與病理活檢結(jié)果的符合率明顯高于TCT。由此可見，高危型HPV-DNA檢測可有效提高宮頸癌前病變篩查的敏感性及陽性檢出率，且不易出現(xiàn)漏診情況，值得在臨床推廣應(yīng)用。

［1］徐蘭云.HC2-HPV-DNA檢測聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)在及癌前病變篩查診斷中的應(yīng)用［J］.實用臨床醫(yī)藥雜志，2015，19（11）：107-109.

［2］劉鳳玲，張燕，李海玲.TCT結(jié)合高危型HPV-DNA檢測在早期篩查中的應(yīng)用［J］.中國婦幼保健，2012，27（25）：3996-3997.

［3］何秋玲，劉冬艷.TCT聯(lián)合高危型HPV-DNA檢測在宮頸病變篩查中的應(yīng)用［J］.中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2012，9（12）：86.

［4］Zur Hausen H.Human papillomaviruses and their possiblerole in squamous cell carcinomas［J］.Curr Top Microbiol Immunol，1977，78：1-30.

［5］楊雪，徐琴燕，趙敏.宮頸病變應(yīng)用高危型HPV-DNA檢測聯(lián)合TCT方法的效果研究［J］.中國婦幼保健，2014，29（24）：4012-4014.

［6］林靜，李廉.TCT與HC2-HPV-DNA檢測在病變篩查中的應(yīng)用價值［J］.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2013，30（3）：423-424.

［7］劉鵬，李清友.HPV-DNA分型檢測聯(lián)合TCT檢查在宮頸病變篩查中的應(yīng)用［J］.河北醫(yī)藥，2012，34（18）：2805-2806.

［8］郭梅，肖林，王士磊，等.HPV-DNA聯(lián)合TCT檢測在病變篩查中的應(yīng)用價值［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014，23（19）：2146-2148.

［9］于峰，陳金艷.高危型HPV-DNA檢測的分流作用在宮頸病變中的應(yīng)用［J］.中國社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專業(yè)，2012，14（4）：258.

［10］呂向華.TCT、HPV-DNA及陰道鏡聯(lián)合檢測在和癌前病變篩查中的應(yīng)用［J］.中國婦幼保健，2014，29（18）：3006-3008.

［11］楊雨卿，席彥東，王曉玲.高危型HPV-DNA測定聯(lián)合LPT在宮頸病變篩查中的應(yīng)用［J］.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2014，36（4）：372-373.

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.13.043

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1009-5519（2016）13-2069-02

（2016-03-10）