劉　幸，閆　靜，張立劍

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，哈爾濱 150040)

?

HPLC法測定清血脂I號膠囊中含姜黃素的量

劉幸，閆靜，張立劍

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，哈爾濱 150040)

為建立測定清血脂I號膠囊中姜黃素含量的方法，采用高效液相色譜法，以膠囊中主要有效成分姜黃素為控制指標(biāo)，進(jìn)行含量測定方法學(xué)考察.采用藥典推薦方法，可以快速地進(jìn)行質(zhì)量控制檢查，該方法重復(fù)好，簡便易行.可作為清血脂I號膠囊藥材的質(zhì)量控制方法.

清血脂I號膠囊；姜黃素；高效液相色譜法；含量測定

姜黃素(curcumin)是從姜科、天南星科中的一些植物的根莖中提取得到的一種多酚類植物成分，其中，姜黃約含3%～6%，為中藥姜黃中的主要有效成分.實驗研究證明，姜黃素具有抗氧化、抗炎、抗癌、神經(jīng)保護(hù)作用[1]清除自由基、抗微生物以及對心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等多方面藥理作用，其抗氧化能力強(qiáng)于維生素E，約為其抗氧化能力的10倍[2].可降低LPS所致小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥因子的釋放[3].減少氧化所致的細(xì)胞死亡[4]，也有文獻(xiàn)對其在血中代謝等進(jìn)行了報道[5].

姜黃素是清血脂I號膠囊中的主要成分，作為含量控制的主要指標(biāo)，本文利用HPLC對其含量進(jìn)行了研究.

1　材料與儀器

1.1實驗材料

清血脂I號膠囊為本室自制產(chǎn)品.

1.2儀器和試劑

1.2.1 儀 器

Agilent1100系列高效液相色譜儀，帶Agilent工作站，色譜柱：Waters ODS柱(4.6×150 mm，5 μm)，帶1 cm預(yù)保護(hù)柱.

1.2.2對照品

姜黃素(購自中國藥品生物制品檢定研究院，批號：110823-200603，試劑：乙腈為色譜純(天津四環(huán))、甲醇為色譜純(Fisher公司產(chǎn)品)、其他試劑為分析純.

2　方法和結(jié)果

2.1實驗條件的選擇

2.1.1流動相及實驗條件選擇

參照現(xiàn)版藥典方法[6]，選擇乙腈-水流動相系統(tǒng)的分離效果即可，在水相中加入少量磷酸，可以改善峰形拖尾.選擇水相中加入0.1% 時，pH呈酸性，分離效果較佳.

2.1.2實驗條件為

流動相：乙腈-水(含0.1%磷酸)(48∶52)，流速：1 mL/min，柱溫：25 ℃；檢測波長：430 nm.進(jìn)樣體積為10 μL.

圖1　清血脂I號膠囊測定HPLC

2.2樣品處理

2.2.1對照品溶液的配制

精密稱取姜黃素對照品約25 mg，置25 mL容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備溶液.

2.2.2供試品溶液的制備

取清血脂I號膠囊粉末(100目)約5 g，精密稱定，置具塞三角燒瓶中，精密加入70%的甲醇25 mL，精密稱定，超聲處理30 min，取出，振搖，靜置至室溫，補(bǔ)足質(zhì)量，取上清液用0.45 μm濾膜濾過，即得.

2.3方法學(xué)研究

2.3.1線性范圍考察

分別精密吸取上述對照品儲備溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL、分別置于25 mL量瓶中，分別加入70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，按照上述實驗條件進(jìn)樣，測定峰面積，以峰面積與進(jìn)樣量作線性回歸.線性方程為：

Y=781.28X+0.13，r=0.999 5(n=6)，

線性范圍為0.4～2.4 μg，從結(jié)果中可以看出濃度與峰面積呈良好的線性相關(guān).

2.3.2精密度試驗

取對照品儲備溶液2.0 mL，置于25 mL量瓶中，加入70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，按照上述實驗條件進(jìn)樣，測定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣6次，根據(jù)平均值計算RSD，結(jié)果為1.21%.

2.3.3重現(xiàn)性試驗

取同一份樣品多次取樣，稱量，按上述供試品溶液的制備方法及色譜條件，測定峰面積，計算RSD為1.89%.

2.3.4加樣回收率試驗

取已經(jīng)測定含量的同一種樣品各約2 g，共6份，精密稱定，各自加入一定量的對照品溶液，按含量測定方法項下方法制備供試品溶液，測定含量.根據(jù)測得含量減去加入對照品加入量計算回收率，結(jié)果見表1.

表1　加樣回收率測定結(jié)果

2.3.5含量測定

精密稱取不同批號的清血脂I號膠囊粉末各5 g，分別按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，再按上述色譜條件進(jìn)樣測定，計算含姜黃素的量，結(jié)果見表2.

表2　清血脂I號膠囊中含姜黃素量測定結(jié)果

3　結(jié)果與討論

1)在本實驗中，進(jìn)行了不同流動相條件的考察，以乙腈-水-冰醋酸(50∶50∶1)為流動相，流速0.8 mL/min時也可以分離，但本文參照藥典方法，采用0.1%的磷酸為流動相，避免了色譜基線的波動.

2)柱溫在25～30 ℃的色譜條件下，姜黃素色譜峰能與其他組分的色譜峰達(dá)到基線分離.與其鄰近色譜峰的分離度達(dá)到1.8，目標(biāo)峰與雜質(zhì)峰完全分開.姜黃素類含多個羥基，在原植物有相似的雙鍵、酚羥基等，在可見光條件很好地與本品中的其他雜質(zhì)分開.

[1]王涵東, 梁維邦. 姜黃素的研究進(jìn)展[J]. 江蘇醫(yī)藥, 2014, 40(10): 1193-1194.

[2]崔群力, 孫圣剛. 姜黃素通過抗氧化作用拮抗魚藤酮所致PC12細(xì)胞損傷的研究[J]. 華中科技大學(xué)學(xué)報, 2010, 39(1): 37-46.

[3]ZHANG L, WU C, ZHAO S,etal. Demethoxycurcumin, a natural derivative of curcumin attenuates LPS-induced pro-inflammatory responses through down-regulation of intracellular ROS-related MAPK/NF-kappaB signaling pathways in N9 microglia induced by lipopolysaccharide [J]. Int Immunopharmacol, 2010, 10(3): 331-338.

[4]SONG S X, GAO J L, WANG K J,etal. Attenuation of brain edema and spatial learning decits by the inhibition of NADPH oxidase activity using apocynin following diffuse traumatic brain injury in rats [J]. Mol Med Rep, 2013,7(1): 327-331

[5]張聰聰, 金若敏. HPLC法測定大鼠血漿中姜黃素的含量及其藥動學(xué)研究[J]. Chinese Journal of New Drugs, 2014, 23(15): 1829-1832.

[6]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(第一部)[M]. 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2010. 247.

Content determination of curcumin in Qingxuezhiyihao capsule by HPLC

LIU Xing, YAN Jing, ZHANG Li-jian

(School of Pharmacy, Heilongjiang University of Chinese Traditional Medicine, Harbin 150040, China)

A method for determining the content of curcumin in the capsule of Qingxuezhiyihao was established. HPLC method was used to determine the contents of curcumin as the main active ingredient in Qingxuezhiyihao capsule. According to the method of Pharmacopoeia, the quality control can be carried out quickly by HPLC. This method is repeatable and can be used for quality control of Qingxuezhiyihao capsule.

Qingxuezhiyihao capsule; curcumin; HPLC; content determination

2015-08-24.

劉幸(1992-)，女，碩士，研究方向：配合物藥物合成、中藥微量元素形態(tài)分析及藥物質(zhì)譜學(xué)研究.

張立劍(1975-)，男，碩士，副教授，研究方向：中草藥活性成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究.

R286

A

1672-0946(2016)04-0418-03