姚菊霞，祁廣儀，任寶璽，朱 瑗，劉芳農(nóng)（.定西市動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅定西743000；.通渭縣畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心）

羊四苗分點同時免疫與單苗免疫對比試驗

姚菊霞1，祁廣儀2，任寶璽2，朱 瑗1，劉芳農(nóng)1
（1.定西市動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅定西743000；2.通渭縣畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心）

為探索不同組合的免疫方法對其抗體產(chǎn)生的影響，確立合理有效的免疫程序。試驗將口蹄疫、羊三聯(lián)四防、小反芻獸疫和羊痘4種疫苗進行不同組合，即分別進行單苗單獨、兩兩組合、三三組合、4種疫苗同時分點注射，共分為15組，每組20只，對各組免疫后副反應(yīng)觀察和抗體水平檢測。結(jié)果表明：口蹄疫、三聯(lián)四防、小反芻獸疫和羊痘4種疫苗分點同時注射組產(chǎn)生的抗體水平，與單苗注射組相比，差異不顯著（P﹥0.05），疫苗注射后產(chǎn)生的抗體效價相對較高且穩(wěn)定，不同疫苗產(chǎn)生的抗體之間相互干擾、拮抗作用不明顯，抗體合格率分別在70%以上，均能達到國家規(guī)定的免疫要求，因此該免疫接種方法在實際工作中可推廣應(yīng)用。

羊疫苗；不同組合；分點注射；免疫抗體；合格率

近年來，國家對動物疫病防控工作高度重視，實施強制免疫的動物疫苗種類較多且逐年增加，目前正在使用的羊疫苗主要有口蹄疫、三聯(lián)四防、小反芻獸疫、羊痘4種疫苗。每年春秋兩季按照“一畜一針，分次注射”傳統(tǒng)免疫方法程序復(fù)雜，基層動物防疫工作量大，重復(fù)注射次數(shù)多，耗費時間長，工作效率低，免疫效果差，人力、物力、財力資源浪費嚴(yán)重，直接影響動物防疫水平和防疫質(zhì)量。為了探索和創(chuàng)新動物免疫新方法，改進和提高動物防疫水平，2013 ～2015年在通渭縣開展了羊口蹄疫苗、三聯(lián)四防苗、小反芻獸疫苗、羊痘苗分組分點同時免疫試驗以及擴大群體試驗研究，從而確定羊4種疫苗分點同時免疫的新型免疫操作程序。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

在通渭縣轄區(qū)隨機選擇5個存欄量100只左右的養(yǎng)羊場，選取2～3月齡未經(jīng)任何疫苗免疫的健康綿羊300只作為試驗羊，免疫前對試驗羊進行基礎(chǔ)抗體滴度測定，所選試驗羊布魯氏菌病抗體陰性，口蹄疫感染抗體陰性，免疫抗體滴度低于1∶16的選擇為試驗對象。

1.2 試驗疫苗

口蹄疫O型－亞洲I型二價滅活疫苗（OS＋JS株），中牧實業(yè)股份有限公司蘭州生物制藥廠生產(chǎn)，批號1412003；羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、腸毒血癥三聯(lián)四防滅活疫苗，山東綠都生物科技有限公司生產(chǎn)，批號1407009；小反芻獸疫活疫苗，新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，批號2014046－2；山羊痘活菌苗，哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)，批號2014008。

1.3 檢測試劑

口蹄疫O型抗體檢測試劑盒，購自蘭州獸醫(yī)研究所，批號2015550511201；小反芻獸疫競爭ELISA抗體檢測試劑盒，購自蘭州獸醫(yī)研究所，批號20150529118；山羊痘間接ELISA抗體檢測試劑盒，購自蘭州獸醫(yī)研究所，批號20150603119；暫無羊三聯(lián)抗體檢測試劑盒。

1.4 試驗分組

將選取5個養(yǎng)羊場的300只試驗羊，分別編號1～300號，隨機分成15組，每組20只，依次為第1 組1～20號、第二組2～40號……第15組281～300號。

1.5 免疫方法

按照表1所示進行1～4種疫苗注射。單組疫苗免疫，注射部位為左右頸部；3種疫苗和4種疫苗同時分點免疫，注射部位為頸部左右和臀部左右各注射一針。注射時嚴(yán)格消毒，規(guī)范操作。免疫劑量：口蹄疫疫苗1mL／只，羊三聯(lián)滅活苗5mL／只，小反芻獸疫活疫苗1mL／只，山羊痘活菌苗1mL／只。

表1 試驗羊疫苗注射分組表

1.6 臨床不良反應(yīng)觀察

所有試驗羊在免疫注射后進行臨床觀察7～10 d，主要觀察羊只的精神狀況、采食、體溫是否正常和是否有其他嚴(yán)重不良反應(yīng)等。

1.7 免疫抗體檢測

分別于免疫后15、30、45d和60d經(jīng)前腔靜脈采血，分離血清，用于抗體檢測。（1）O型口蹄疫抗體檢測：采用正向間接血凝試驗，具體操作參照試劑盒說明書進行。判定標(biāo)準(zhǔn)：抗體效價≥1∶32，抗體陽性；抗體效價＜1∶32，抗體陰性。（2）羊痘抗體檢測：采用間接ELISA方法檢測，具體操作參照試劑盒說明書進行。判定標(biāo)準(zhǔn)：OD450≥0.25，抗體陽性；OD450≤0.2，抗體陰性。（3）小反芻獸疫抗體檢測：采用競爭ELISA方法，具體操作參照試劑盒說明書進行。判定標(biāo)準(zhǔn)：PI≥45%，抗體陽性，PI＜45%，抗體陰性。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

檢測數(shù)據(jù)按接種疫苗的種類進行分類統(tǒng)計，口蹄疫、羊痘和小反芻獸疫均以抗體陽性率表示，并應(yīng)用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)中單因素隨機分組方法進行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床觀察

4種疫苗分組試驗注射后，在24h內(nèi)個別羊只陸續(xù)出現(xiàn)精神沉郁、體溫升高、慢草不食、飲水少量、跛行等副反應(yīng)現(xiàn)象；有副反應(yīng)癥狀的主要是口蹄疫疫苗注射組，羊三聯(lián)苗注射組個別羊只有跛行癥狀，其它組未見明顯臨床癥狀。多種疫苗注射組與單苗注射組出現(xiàn)臨床癥狀的副反應(yīng)率沒有明顯差異，平均副反應(yīng)率15%以下。有臨床癥狀的羊只48h內(nèi)全部恢復(fù)正常，未出現(xiàn)過敏死亡情況。

2.2 不同免疫組口蹄疫抗體產(chǎn)生情況

從表2可以看出，每組試驗于15d時抗體水平基本都達到最高值，且維持時間較長，第60d時仍維持較高水平，抗體陽性率均在70%以上。與其他組相比，第1組抗體水平較低，下降較快，且第1組與第15組之間差異顯著（P＜0.05），除第1組外其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

表2 口蹄疫抗體檢測結(jié)果

2.3 不同免疫組羊痘抗體產(chǎn)生情況

從表3中可以看出，第10組抗體產(chǎn)生時間早，15d達到最高值，第9組、12組、14組在30d時抗體達到最高值，第4組、7組、13組、15組在45d時抗體達到最高值，除第4組和第7組外其余試驗組抗體合格率于15d均已達到了國家規(guī)定70%的免疫要求，且維持時間較長。方差分析顯示，第15組與其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 不同免疫組小反芻獸疫抗體產(chǎn)生情況

從表4中可以看出，每組試驗動物在15d時已產(chǎn)生較高水平的抗體，30～45d抗體達到最高值，60d時抗體水平仍保持較高水平穩(wěn)定態(tài)勢。方差分析顯示，第15組與其他各組之間差異不顯著（P ＞0.05）。

表3 山羊痘抗體檢測結(jié)果

表4 小反芻獸疫抗體檢測結(jié)果

3 結(jié)論

口蹄疫、羊三聯(lián)、小反芻獸疫、羊痘4種疫苗兩兩組合、三三組合、或4種疫苗同時分點注射，副反應(yīng)率15%以下，與單苗注射組相比，臨床癥狀差異不顯著，未見不良反應(yīng)加重現(xiàn)象。

第15組口蹄疫免疫抗體水平高于第1組，維持時間較長且穩(wěn)定，表明口蹄疫、羊三聯(lián)、小反芻獸疫、羊痘同時分點免疫的抗體水平要優(yōu)于單苗免疫組。羊痘苗、小反芻獸疫苗產(chǎn)生的抗體效價均較高，在抗體產(chǎn)生的整個時期，單苗注射組和4種疫苗同時注射組在抗體達到最高值時抗體合格率都在75%以上，均能達到或超過國家規(guī)定的免疫標(biāo)準(zhǔn)70%以上，且維持時間也較長。從本次試驗結(jié)果來看，一畜2苗、3苗、4苗分點同時注射后抗體產(chǎn)生過程中不會產(chǎn)生拮抗作用，反而在一定程度上還有促進協(xié)同作用。

通過對通渭縣轄區(qū)30萬只羊?qū)嵤耙恍蠖嗝缍帱c同時聯(lián)合注射效果研究”擴群試驗，疫苗注射副反應(yīng)率在15%以下，疫苗反應(yīng)死亡率在1／10 000以下，血清抽樣檢測抗體合格率達70%以上。

口蹄疫、羊三聯(lián)、小反芻獸疫和羊痘分點同時免疫對4種抗體的產(chǎn)生沒有顯著影響，沒有增加免疫副反應(yīng)，通過綜合分析，可在實際工作中大規(guī)模推廣“羊一畜多苗多點同時聯(lián)合注射”免疫操作程序。

本次試驗不足之處在于缺少羊三聯(lián)抗體診斷試劑，項目實施中對羊三聯(lián)的免疫效果未進行評價，影響試驗的完整性；由于試驗規(guī)模較大，對抗體監(jiān)測時間較短，對分點免疫注射后抗體消長規(guī)律未能進行深入跟蹤檢測，有待在今后的工作中進一步完善。

［1］ 唐啟義，馮明光.實用統(tǒng)計分析及其DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)［M］.北京：科學(xué)出版社，2002：488－491.

［2］ 楊慧，封林，黎強，等.口蹄疫和豬瘟疫苗同時免疫注射豬的試驗效果［J］.四川畜牧獸醫(yī)，2008，35（10）：29－31.

［3］ 華樹明.豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病分點免疫注射效果觀察［J］.獸醫(yī)導(dǎo)刊，2008，（4）：23－24.

［4］ 沈艷麗，蔡金山，趙志剛，等.豬多種疫苗分點同時注射的免疫抗體檢測試驗［J］.山東畜牧獸醫(yī)，2011，32（1）：9－10.

［5］ 馬睿麟，蔡金山，沈艷麗，等.豬瘟、口蹄疫、豬繁殖與呼吸綜合征等多種疫苗免疫試驗［J］.畜牧與獸醫(yī)，2010，42（10）：79－82.

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Contrast Test of Four Vaccine Immune Simultaneously at Different Points and Single Vaccine Immune in Sheep

YAO Ju－xia1，QI Guang－yi2，REN Bao－xi2，ZHU Yuan1，LIU Fang－nong1
（1.Dingxi Animal Disease Prevention and Control Center，Dingxi Gansu 743000 China；2.Tongwei Animal Disease Prevention and Control Center）

In order to determine the reasonable and effective immunization program，the different unities of vaccines impacting on the antibody production were explored.Four kinds of vaccines，including FMD vaccine，Combined Ovine／Caprine Clostridial Diseases Vaccine，Peste Des Petits Ruminants and Capripox，were immunized sheep through the procedures with respective single injection，every two or every three combinations and four vaccines immunized at the same time.The experiments were divided into 15groups，each group with 20sheep.The negetive effects and antibody levels in each group after immunization were observed.The results showed that antibody levels produced by four vaccines immunized at the same time had no significant differences in the antibody titers compared to that in single vaccine injection group.The mutual interference and antagonistic effects were not revealed between different vaccinations.The effective immune rate could reach more than 70%，which was coincided with the country standards.Therefore，the vaccination procedure can be popularized and applied in practical work.

Vaccines for sheep；different combinations of vaccines；injection at different points；antibody；qualified rate

S 852.4＋3

B

1004－6704（2016）03－0044－04

2015－09－17

姚菊霞1（1986－），女，甘肅通渭人，碩士，獸醫(yī)師，主要從事動物疫病防治技術(shù)研究推廣工作。