盧敏萍，黃克建，周　哲，林翠梧,4*，楊　寧，劉曉鋒，高凡欽

(1.廣西大學(xué)　化學(xué)化工學(xué)院，廣西　南寧　530004；2.廣西壯族自治區(qū)公安廳物證鑒定中心，廣西　南寧530012；3.賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司，上海 　201206；4.廣西高校應(yīng)用化學(xué)技術(shù)與資源開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西　南寧　530004；5.西安力邦醫(yī)藥科技有限責(zé)任公司，陜西　西安　710065)

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在線固相萃取/液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)生物樣品中18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥

盧敏萍1，黃克建2，周哲3，林翠梧1,4*，楊寧2，劉曉鋒2，高凡欽5

(1.廣西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，廣西南寧530004；2.廣西壯族自治區(qū)公安廳物證鑒定中心，廣西南寧530012；3.賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司，上海 201206；4.廣西高校應(yīng)用化學(xué)技術(shù)與資源開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧530004；5.西安力邦醫(yī)藥科技有限責(zé)任公司，陜西西安710065)

建立了同時(shí)測(cè)定全血、尿液和肝組織等生物樣品中18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的在線固相萃取/液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜(On-line SPE/LC-LIT/MS)分析方法。樣品經(jīng)乙腈處理，稀釋和離心后直接進(jìn)樣。經(jīng)Waters Oasis?HLB在線SPE柱富集純化，以BETASIL C18柱為分析柱，甲醇-水(均含0.1%甲酸)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫；使用電噴霧電離(ESI)正離子模式測(cè)定，掃描方式為選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)和連續(xù)反應(yīng)監(jiān)測(cè)(CRM)。18種農(nóng)藥在考察的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(權(quán)重因子1/X)，相關(guān)系數(shù)為0.994 3～0.999 4；在全血和尿液中的檢出限為0.1～5 ng/mL，在肝組織中的檢出限為0.1～5 ng/g；3個(gè)加標(biāo)水平的回收率為90.2%～114.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=4)為0.5%～7.5%。該方法簡(jiǎn)單準(zhǔn)確，靈敏度高，能夠滿足生物樣品中18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速分析要求。

在線固相萃??；液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜法；連續(xù)反應(yīng)監(jiān)測(cè)(CRM)；氨基甲酸酯類農(nóng)藥；生物樣品

氨基甲酸酯類農(nóng)藥是繼有機(jī)氯、有機(jī)磷類農(nóng)藥后發(fā)展較為迅速的一類高效、廣譜殺蟲(chóng)劑，具有分解快、殘留期短、高效、選擇性強(qiáng)的特點(diǎn)[1]。該類農(nóng)藥的毒性機(jī)理與有機(jī)磷類農(nóng)藥相似，主要通過(guò)抑制體內(nèi)乙酰膽堿酯酶的活性，使酶失去對(duì)乙酰膽堿的水解能力，造成組織內(nèi)乙酰膽堿的蓄積而中毒。20世紀(jì)70年代以來(lái)，由于有機(jī)氯農(nóng)藥品種相繼被不同國(guó)家禁用或限制使用，以及抗有機(jī)磷農(nóng)藥的昆蟲(chóng)品種日益增多，氨基甲酸酯類農(nóng)藥的使用量逐年增加[2]，因不科學(xué)使用而造成的人畜中毒現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。近年來(lái)，該類農(nóng)藥的殘留分析備受關(guān)注[1]。

目前，氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測(cè)技術(shù)主要分為生物檢測(cè)(如酶抑制法、免疫分析法、生物傳感器法[3]等)和色譜檢測(cè)，涉及的樣品有糧谷、蔬菜、水果、茶葉、煙草、中藥材、水體等，而生物樣品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測(cè)方法鮮有報(bào)道。我國(guó)現(xiàn)行氨基甲酸酯類農(nóng)藥的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法包括酶抑制法[4]、氣相色譜法(GC)[5-6]、高效液相色譜法(HPLC)[7]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)[8-12]等。上述方法中，膽堿酯酶抑制法可快速判斷出樣品中是否含有對(duì)膽堿酯酶有抑制作用的高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥，但方法特異性差，無(wú)法定性確證；氨基甲酸類農(nóng)藥的極性較強(qiáng)、熱穩(wěn)定性差，部分化合物在氣相色譜分析的溫度下發(fā)生分解，采用GC或GC-MS并不理想[2]，同時(shí)也缺乏高靈敏度的選擇性檢測(cè)器[1]；HPLC的靈敏度較高，但在分析組分復(fù)雜的樣品時(shí)色譜分離難度較大，選擇性差，近年來(lái)多采用柱后衍生進(jìn)行熒光檢測(cè)[1]；LC-MS/MS適用于難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定化合物的分析，因具有靈敏度高、選擇性好、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，近年來(lái)已廣泛應(yīng)用于氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測(cè)[2,8-15,17,20]。

生物樣品因基質(zhì)成分復(fù)雜，既需要高靈敏度的檢測(cè)技術(shù)，也需要快速高效的前處理方法。目前，檢測(cè)氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及文獻(xiàn)研究最常用的前處理方法為離線固相萃取柱凈化法[2,8-14,17]，其他方法如液液萃取法(LLE)[15-16]、分散固相萃取法(dispersive SPE)[18-19]、基質(zhì)固相分散法(MSPD)[20]等也有報(bào)道。但上述前處理方法操作繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力，難以滿足生物樣品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速檢測(cè)要求。隨著色譜技術(shù)的迅速發(fā)展，儀器的自動(dòng)化程度越來(lái)越高，在線固相萃取(On-line SPE)技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。該技術(shù)可顯著簡(jiǎn)化樣品的前處理步驟，具有自動(dòng)化程度高、富集效果好、樣品損耗低、SPE柱可重復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)，近年來(lái)在法庭毒物分析[21-22]、藥物分析[23-24]、食品安全[25-26]、環(huán)境科學(xué)[27]等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。目前，尚未見(jiàn)采用在線固相萃取分析生物樣品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測(cè)方法報(bào)道。本研究建立了在線固相萃取技術(shù)結(jié)合液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜同時(shí)檢測(cè)生物樣品中18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的分析方法，該方法快速簡(jiǎn)便，采用選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)和連續(xù)反應(yīng)監(jiān)測(cè)(CRM)模式進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，CRM掃描模式在氨基甲酸酯類農(nóng)藥的分析方法中為首次報(bào)道，可進(jìn)一步降低基質(zhì)干擾，方法檢出限遠(yuǎn)低于相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，適用于生物樣品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的分析測(cè)定。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

DionexTMUltimate 3000TM雙三元液相色譜系統(tǒng)(美國(guó)賽默飛世爾科技有限公司)，配DGP-3600SD脫氣機(jī)、TCC-3000SD柱溫箱(帶六通閥)、WPS-3000TFC-ANALYTICAL自動(dòng)進(jìn)樣器。質(zhì)譜系統(tǒng)：LTQ XLTM型線性離子阱質(zhì)譜儀(美國(guó)賽默飛世爾科技有限公司)，配加熱電噴霧離子源(HESI-II)、XcaliburTM數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)、Mass Frontier 7.0TM軟件。3-18R高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)TOMOS公司)；SB 3200-DT超聲波清洗器(寧波新芝生物科技股份有限公司)；Master-s UV 超純水發(fā)生器(上海和泰儀器有限公司)。

18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥單一標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL)：涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜、滅多威、滅多威肟、抗蚜威、速滅威、殘殺威、呋喃丹、惡蟲(chóng)威、西維因、硫雙威、異丙威、仲丁威、甲硫威、乙霉威、猛殺威、茚蟲(chóng)威(農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所)；甲醇、乙腈、甲酸、乙酸銨(色譜純，美國(guó)Fisher公司)；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

將18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥單一標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇稀釋，配成5 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。使用時(shí)根據(jù)需要以甲醇稀釋單一標(biāo)準(zhǔn)溶液和混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，配成不同質(zhì)量濃度的單一標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。所有標(biāo)準(zhǔn)溶液于4 ℃下保存。

1.3在線固相萃取與色譜條件

在線SPE柱：Waters Oasis?HLB(20 mm×3.9 mm，15 μm)；左泵為在線固相萃取泵，流動(dòng)相：A為水，B為甲醇。分析柱：BETASIL C18(100 mm×2.1 mm，3 μm)；右泵為分析泵，流動(dòng)相：A為水(含0.1%甲酸)，B為甲醇(含0.1%甲酸)。柱溫40 ℃；進(jìn)樣量50 μL；梯度洗脫條件及六通閥切換程序見(jiàn)表1，On-line SPE/LC-LIT/MS的流路圖見(jiàn)圖1。

表1梯度洗脫條件及六通閥切換程序

Table 1Gradient elution and valve switching programs

圖1在線固相萃取/液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜的流路圖

Fig.1Diagram of on-line SPE/LC-LIT/MS a.Injection and enrichment of the sample;b.Transfer and elution process

1.4質(zhì)譜條件

電離方式為ESI正離子模式，掃描方式為選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)和連續(xù)反應(yīng)監(jiān)測(cè)(CRM)；噴霧電壓為4 000 V；棱鏡電壓為57 V；鞘氣(35 arb)和輔助氣(15 arb)為氮?dú)?碰撞氣為氦氣；離子源溫度為300 ℃；毛細(xì)管溫度為350 ℃；隔離寬度為2 amu。18種農(nóng)藥的主要質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2。

1.5樣品處理

全血和尿液處理：吸取0.2 mL全血或尿液置于10 mL試管中，加入0.6 mL乙腈，渦旋振蕩1 min，再加入2.2 mL水，超聲提取5 min后，以10 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，上清液供On-line SPE/LC-LIT/MS分析。

表2　18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的主要質(zhì)譜參數(shù)

*quantitative ion pair

肝組織處理：稱取0.5 g經(jīng)絞碎均勻的肝組織，加入1.5 mL乙腈，渦旋振蕩1 min，再加入5.5 mL水，其余操作同全血處理。

2　結(jié)果與討論

2.1質(zhì)譜條件的優(yōu)化

通過(guò)蠕動(dòng)泵向質(zhì)譜儀注入1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，確定氨基甲酸酯類農(nóng)藥的最佳質(zhì)譜條件。在優(yōu)化過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)棱鏡電壓對(duì)該類藥物的質(zhì)譜行為影響很大。當(dāng)棱鏡電壓達(dá)到60 V以上時(shí)，大部分藥物開(kāi)始發(fā)生源內(nèi)裂解，其一級(jí)質(zhì)譜圖除準(zhǔn)分子離子峰外還同時(shí)出現(xiàn)二級(jí)甚至三級(jí)子離子峰，且隨著棱鏡電壓的繼續(xù)升高，子離子的豐度逐漸增強(qiáng)。通過(guò)自動(dòng)優(yōu)化，得到最佳棱鏡電壓為57 V，此時(shí)母離子的豐度及穩(wěn)定性最佳。

取濃度為200 ng/mL的18種氨基甲酸酯單一標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)行MS3數(shù)據(jù)依賴掃描，確定各化合物的母離子、二級(jí)子離子和三級(jí)子離子信息。結(jié)果顯示，滅多威肟的MS2離子為m/z58.0和m/z88.0，無(wú)法進(jìn)行下一級(jí)裂解，而其余農(nóng)藥均可裂解得到MS3子離子。除滅多威肟外，對(duì)其余17種農(nóng)藥的MS2和MS3子離子強(qiáng)度進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜、速滅威和硫雙威的MS3子離子強(qiáng)度相比MS2子離子明顯降低，不能滿足靈敏度要求，而其他12種農(nóng)藥的MS3子離子能獲得較高的靈敏度。目前，氨基甲酸酯類農(nóng)藥的分析主要采用LC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式進(jìn)行檢測(cè)[2,8-12,14-15,17,20]。本研究分別采用SRM和CRM掃描模式，對(duì)空白血添加低濃度藥物的樣品進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)上述12種農(nóng)藥的測(cè)定結(jié)果確定最優(yōu)的掃描模式。結(jié)果顯示，與SRM模式相比，采用CRM模式時(shí)上述12種農(nóng)藥的響應(yīng)信號(hào)下降，但基質(zhì)干擾明顯降低，且仍能獲得較低的檢出限，因此這12種農(nóng)藥選擇采用CRM模式進(jìn)行檢測(cè)，而前述滅多威肟不能裂解MS3子離子，涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜、速滅威和硫雙威的MS3子離子靈敏度較低，因此，這6種農(nóng)藥采用SRM模式檢測(cè)。兩種掃描模式下獲得部分農(nóng)藥的色譜對(duì)比圖見(jiàn)圖2。18種農(nóng)藥定量離子對(duì)的可能裂解途徑見(jiàn)圖3。

2.2流動(dòng)相的優(yōu)化

選擇BETASIL C18作為分析柱，考察了甲醇-20 mmol/L乙酸銨溶液(均含0.1%甲酸)和甲醇-水(均含0.1%甲酸)兩種流動(dòng)相體系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)采用前者作為流動(dòng)相時(shí)，18種農(nóng)藥的一級(jí)質(zhì)譜圖幾乎均出現(xiàn)[M+NH4]+離子峰，且大部分為最強(qiáng)峰，而相應(yīng)的[M+H]+離子峰卻很弱，將乙酸銨溶液的濃度由20 mmol/L降至4 mmol/L時(shí)，此現(xiàn)象未得到改善；將[M+NH4]+作為母離子進(jìn)行二級(jí)裂解，發(fā)現(xiàn)相應(yīng)的子離子響應(yīng)較低，表明[M+NH4]+離子并不穩(wěn)定，用其子離子來(lái)定量缺乏準(zhǔn)確性。當(dāng)采用甲醇-水(均含0.1%甲酸)作為流動(dòng)相時(shí)，上述[M+NH4]+離子峰消失，其中涕滅威、涕滅威砜和涕滅威亞砜的最強(qiáng)峰為[M+Na]+離子峰，其余15種農(nóng)藥的最強(qiáng)峰為[M+H]+離子峰，兩者作為母離子進(jìn)行二級(jí)或三級(jí)裂解，其子離子的響應(yīng)穩(wěn)定、靈敏度較高，因此選擇甲醇-水(均含0.1%甲酸)作為流動(dòng)相。

2.3在線SPE閥切換時(shí)間的優(yōu)化

采用Waters Oasis?HLB柱作為在線SPE柱，該柱為反相保留機(jī)理，對(duì)酸性、中性和堿性化合物均具有吸附作用[21]。合適的閥切換時(shí)間可以保證在上樣過(guò)程中有效除去基質(zhì)干擾，是在線SPE的一個(gè)顯著影響因素。本實(shí)驗(yàn)采用在線SPE柱代替分析柱直接與質(zhì)譜檢測(cè)器連接，以水為流動(dòng)相對(duì)空白基質(zhì)樣品進(jìn)行測(cè)試，通過(guò)觀察色譜圖確定合適的閥切換時(shí)間。結(jié)果表明，空白樣品中的強(qiáng)極性基質(zhì)流出SPE柱所需時(shí)間為3 min，為有效除去基質(zhì)干擾，閥切換時(shí)間應(yīng)設(shè)置晚于該時(shí)間，因此選擇在4 min時(shí)將六通閥由1_2切換至6_1狀態(tài)。

2.4乙腈含量對(duì)在線SPE的影響

因生物樣品的基質(zhì)成分復(fù)雜，本研究選取乙腈對(duì)樣品進(jìn)行簡(jiǎn)單處理，以避免堵塞SPE柱、污染離子源，同時(shí)減少基質(zhì)干擾，提高檢測(cè)靈敏度。配制乙腈含量分別為10%，20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%，90%和100%的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，考察溶液中乙腈含量對(duì)在線SPE萃取效率的影響。結(jié)果顯示，當(dāng)溶液中乙腈含量為10%～30%時(shí)，18種農(nóng)藥的SPE萃取效果較好，其中乙腈含量為20%時(shí)的萃取效率最優(yōu)，均在85%以上。隨著乙腈含量的繼續(xù)升高，各目標(biāo)物的萃取效率發(fā)生不同程度的下降，其中涕滅威亞砜和滅多威最為明顯。因此，確定將樣品稀釋至乙腈含量為20%。

2.5樣品稀釋液對(duì)在線SPE的影響

考察了0.1%甲酸水溶液(pH 4.0)、中性水和三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液(Tris-HCl溶液，pH 9.2) 3種不同pH值的稀釋液對(duì)在線SPE的影響。結(jié)果表明，采用不同稀釋液的萃取效果各有差異，其中涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜和滅多威使用堿性稀釋液的萃取效果最好，使用酸性稀釋液的萃取效果最差，其余14種農(nóng)藥均為使用中性或酸性稀釋液的萃取效果較好，且中性或酸性稀釋液的萃取效果無(wú)明顯差異。綜合考察結(jié)果，選擇中性水作為樣品的稀釋液。

2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

分別在空白全血、尿液和肝組織基質(zhì)中添加18種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，配制濃度分別為0.1，0.2，0.5，1，2，5，10，20，50，100，200，500，1 000 ng/mL(肝組織為ng/g)的加標(biāo)樣品，按“1.5”方法進(jìn)行處理，在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行測(cè)定。以目標(biāo)物的質(zhì)量濃度(X，ng/mL或ng/g)為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，用加權(quán)(權(quán)重因子為1/X)最小二乘法回歸運(yùn)算，建立線性標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。采用逐步稀釋法進(jìn)行測(cè)試，以信噪比S/N≥3確定檢出限(LOD)，以S/N≥10確定定量下限(LOQ)，結(jié)果見(jiàn)表3。18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在考察的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r2)為0.994 3～0.999 4。18種農(nóng)藥在全血和尿液中的LOD為0.1～5 ng/mL，肝組織中的LOD為0.1～5 ng/g。

表3　18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的線性范圍、檢出限和定量下限

*:ng/mL for whole blood and urine samples;ng/g for liver tissue samples

2.7回收率與精密度

分別在空白全血、尿液和肝組織基質(zhì)中添加18種農(nóng)藥不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，配制低、中、高3個(gè)濃度水平的加標(biāo)樣品，按“1.5”方法進(jìn)行處理，在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行測(cè)定，方法的精密度和回收率結(jié)果見(jiàn)表4。全血中18種農(nóng)藥的回收率為90.2%～114.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.5%～7.5%；尿液中的回收率為90.9%～114.5%，RSD為0.5%～7.2%；肝組織中的回收率為90.6%～114.2%，RSD為0.8%～6.5%。

表4　回收率與精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=4)

*:ng/mL for whole blood and urine samples;ng/g for liver tissue samples

2.8實(shí)際樣品分析

應(yīng)用本方法對(duì)廣西壯族自治區(qū)公安廳物證鑒定中心受理的3起中毒案件的樣品進(jìn)行檢測(cè)，分別取1例血樣、2例尿樣。其中，在血樣中檢出呋喃丹，濃度為11.8 ng/mL，2例尿樣中未檢出上述18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥。

3　結(jié)　論

本研究運(yùn)用在線SPE技術(shù)建立了同時(shí)測(cè)定生物樣品中18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜檢測(cè)方法。樣品經(jīng)乙腈處理，稀釋和離心后即可直接進(jìn)樣，通過(guò)在線SPE自動(dòng)進(jìn)行富集純化。本方法快速簡(jiǎn)便，避免了繁瑣的前處理過(guò)程，大大縮短了分析時(shí)間。液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜采用SRM和CRM掃描模式，其中CRM模式首次用于氨基甲酸酯類農(nóng)藥檢測(cè)，其具有基質(zhì)干擾小、選擇性強(qiáng)、檢出限低等優(yōu)點(diǎn)，非常適用于生物樣品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的分析。

[1]Zhang F,Li Z H,Wang L B,Huang Z Q,Zhang Y,Wang M L.FoodNutr.China(張帆,李忠海,王利兵,黃志強(qiáng),張瑩,王美玲.中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)),2010,(2):64-67.

[2]Chen X M,Hu B Z,Liu H S,Guo W Q,Ding H Y,Cen J J.Chin.J.Anal.Chem.(陳笑梅,胡貝貞,劉海山,郭偉強(qiáng),丁慧瑛,岑俊靜.分析化學(xué)),2007,35(1):106-110.

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[4]GB/T 5009.199-2003.Rapid Determination for Organophosphate and Carbamate Pesticide Residues in Vegetables.National Standards of the People's Republic of China(蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè).中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)).

[5]GB/T 5009.104-2003.Determination of Carbamate Pesticide Residues in Vegetable Foods.National Standards of the People's Republic of China(植物性食品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的測(cè)定.中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)).

[6]SN/T 1747-2006.Inspection of Carbamate Insecticide Multi-residues in Tea for Export——Gas Chromatography Method.Industry Standards of Entry-Exit Inspection and Quarantine of the People's Republic of China(出口茶葉中多種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的檢驗(yàn)方法 氣相色譜法.中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)).

[7]GB/T 5009.163-2003.Determination of Carbamate Pesticides Multiresidues in Animal Foods(HPLC).National Standards of the People's Republic of China(動(dòng)物性食品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥多組分殘留高效液相色譜測(cè)定.中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)).

[8]SN/T 3156-2012.Determination of Carbamate Pesticide Residues in Milk and Dairy Products——LC-MS-MS Method.Industry Standards of Entry-Exit Inspection and Quarantine of the People's Republic of China(乳及乳制品中多種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量測(cè)定方法 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法.中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)).

[9]NY/T 1679-2009.Determination of Carbamate Pesticide Residues in Vegetable Foods by LC-MS/MS.Agriculture Industry Standards of the People's Republic of China(植物性食品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法.中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)).

[10]SN/T 2085-2008.Determination of Carbamate Pesticide Multiresidues in Grains for Import and Export——HPLC-MS/MS Method.Industry Standards of Entry-Exit Inspection and Quarantine of the People's Republic of China(進(jìn)出口糧谷中多種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量檢測(cè)方法 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法.中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)).

[11]SN/T 0134-2010.Determination for Pesticide Residues of 12 Kinds of Carbamates Including Oxamyl in Goods for Import and Export——LC-MS/MS Method.Industry Standards of Entry-Exit Inspection and Quarantine of the People's Republic of China(進(jìn)出口食品中殺線威等12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法.中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)).

[12]SN/T 2560-2010.Determination of Carbamate Pesticides Residues in Foodstuffs for Import and Export——LC-MS/MS Method.Industry Standards of Entry-Exit Inspection and Quarantine of the People's Republic of China(進(jìn)出口食品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法.中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)).

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Simultaneous Determination of Eighteen Carbamate Pesticides in Biological Samples by On-line Solid Phase Extraction Coupled with Liquid Chromatography-Linear Ion Trap Mass Spectrometry

LU Min-ping1,HUANG Ke-jian2,ZHOU Zhe3,LIN Cui-wu1,4*,YANG Ning2,LIU Xiao-feng2,GAO Fan-qin5

(1.School of Chemistry and Chemical Engineering,Guangxi University,Nanning530004,China;2.Institute of Forensic Science,Public Security Department of Guangxi Zhuang Autonomous Region,Nanning530012,China;3.Thermo Fisher Scientific(China) Co.,Ltd.,Shanghai201206,China;4.Guangxi Colleges and Universities Key Laboratory of Applied Chemistry Technology and Resource Development,Nanning 530004,China;5.Xi'an Libang Pharmaceutical Technology Company,Xi'an710065,China)

A new and sensitive analytical method was developed for the simultaneous determination of eighteen carbamate pesticides in biological samples by on-line solid phase extraction(on-line SPE) coupled with liquid chromatography-linear ion trap mass spectrometry(LC-LIT/MS).The samples were treated with acetonitrile,followed by dilution and centrifugation.The resulting solution was injected into LC system directly and processed with an Waters Oasis?HLB On-line SPE column for enrichment and purification.Separation was performed on a BETASIL C18column with mixed mobile phases of methanol and water(both containing 0.1% formic acid) by gradient elution.The analytes were detected in selected reaction monitoring(SRM) or consecutive reaction monitoring(CRM) mode through positive electrospray ionization(ESI+).The calibration curves were linear within the investigated mass concentration ranges of the analytes(weighted 1/X),with correlation coefficients(r2) of 0.994 3-0.999 4.The LODs were in the ranges of 0.1-5 ng/mL for whole blood and urine,and 0.1-5 ng/g for liver tissue.The recoveries at three spiked levels ranged from 90.2% to 114.5%,with RSDs(n=4) of 0.5%-7.5%.The developed method is simple and accurate,and is sensitive for the rapid determination of eighteen carbamate pesticides in biological samples.

on-line solid phase extraction(on-line SPE);liquid chromatography-linear ion trap mass spectrometry(LC-LIT/MS);consecutive reaction monitoring(CRM);carbamate pesticides;biological samples

2015-12-08；

2016-01-26

林翠梧，博士，教授，研究方向：天然有機(jī)化學(xué)，Tel：0771-3275878，E-mail:lincuiwu@gxu.edu.cn

doi:10.3969/j.issn.1004-4957.2016.07.001

O657.63；F767.2

A

1004-4957(2016)07-0777-08

研究報(bào)告