李 軍 李昱憬 宋虎平 閆瓏文

（延安市技術(shù)轉(zhuǎn)移中心 陜西延安 716000）

分析菌草栽培銀耳培養(yǎng)基配方篩選

李 軍 李昱憬 宋虎平 閆瓏文

（延安市技術(shù)轉(zhuǎn)移中心 陜西延安 716000）

近些年，國(guó)內(nèi)外很多學(xué)者對(duì)銀耳的細(xì)胞學(xué)以及生長(zhǎng)歷程進(jìn)行研究工作。從醫(yī)學(xué)的角度分析，與普通食藥用菌相比較，銀耳的特殊性可以從以下兩個(gè)方面進(jìn)行闡述：①其自體有芽孢生存；②有半生菌（羽毛狀菌絲）寄生。與棉籽殼銀耳、椴木銀耳相比較，菌草栽培技術(shù)栽培出的銀耳不存在棉酚等問(wèn)題，且其粗質(zhì)蛋白以及粗多糖的含量相對(duì)較高。

菌草；銀耳；配方篩選

作者對(duì)銀耳栽培的專(zhuān)業(yè)理論進(jìn)行分析，并借助試管法對(duì)其配方進(jìn)行篩選[1]，希望銀耳栽培者能夠選對(duì)配方，從而提高銀耳生產(chǎn)產(chǎn)量以及質(zhì)量。長(zhǎng)期的實(shí)踐結(jié)果證明，當(dāng)栽培銀耳培養(yǎng)基中的各種成分含量滿(mǎn)足（類(lèi)蘆70%、高粱5%、麩皮24%、石灰粉1%），優(yōu)質(zhì)的菌草再配環(huán)境就被創(chuàng)造出來(lái)，此時(shí)銀耳菌絲也會(huì)實(shí)現(xiàn)快速繁殖的目標(biāo)?？傊?，本文作者認(rèn)為菌草栽培銀耳過(guò)程中其配方的選擇時(shí)至關(guān)重要的，所以本文在探究銀耳對(duì)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)需求的基礎(chǔ)上，對(duì)栽培方案進(jìn)行科學(xué)的策劃，使最佳的配方得以構(gòu)建。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 地點(diǎn)的選取

試驗(yàn)地點(diǎn)一般選擇在某一菌草研究院，這樣試驗(yàn)環(huán)境的清潔、規(guī)整使試驗(yàn)的順利開(kāi)展有了基礎(chǔ)的保證。

1.2 試驗(yàn)原材料的供應(yīng)

為本次試驗(yàn)提供的原材料主要包括以下材料：巨菌草、象草、五節(jié)芒以及菌草栽培培養(yǎng)基的四大必備物質(zhì)（蘆類(lèi)、高粱、麩皮、石灰粉），這里作者想要做的說(shuō)明是，麩皮這一原材料可以被棉籽殼代替，此外小米的假如使菌草銀耳培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)更加的豐盛。當(dāng)然銀耳菌株的采用是必不可少的，產(chǎn)自福建省古田縣Tr.083型號(hào)的銀耳菌株具有極高的利用價(jià)值。

1.3 試驗(yàn)儀器

作者認(rèn)為利用菌草栽培技術(shù)對(duì)銀耳進(jìn)行栽培培養(yǎng)工作中，試驗(yàn)儀器的選擇對(duì)試驗(yàn)的成敗起著決定性的作用，因?yàn)閮x器的材質(zhì)在某種環(huán)境下很有可能與試驗(yàn)的各種原材料發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，最終使培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分發(fā)生改變，此外儀器容積大小的設(shè)置能夠?yàn)殂y耳菌絲的生長(zhǎng)提供最適宜的生長(zhǎng)空間。通過(guò)長(zhǎng)期的栽培實(shí)踐，作者向廣大銀耳栽培者推薦以下幾種試驗(yàn)儀器：江南儀器廠(chǎng)生產(chǎn)的XSP-18A型電子顯微鏡；SW-CJ-1F型超凈工作臺(tái)以及產(chǎn)自山東習(xí)得分析天平以及立式滅菌器等都是上好的試驗(yàn)儀器。

1.4 銀耳栽培配方的確立

試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)用試管法以完成對(duì)菌草栽培銀耳培養(yǎng)基優(yōu)質(zhì)配方的篩選工作。依據(jù)上述試驗(yàn)原材料供應(yīng)的種類(lèi)，在試驗(yàn)過(guò)程中菌草的選擇范圍就被確定了，即五節(jié)芒、巨菌草、象草以及類(lèi)蘆四類(lèi)，為了使菌草培養(yǎng)基個(gè)物質(zhì)的比例闡述得更加明確，作者以表格（表1）的形式去表明每一類(lèi)菌草在培養(yǎng)基中添加的比例。

在培養(yǎng)基中，輔助銀耳菌絲生產(chǎn)的材料是多種多樣的，例如我們?nèi)粘Ｉ钪谐Ｒ?jiàn)的小米顆粒、小米粉、高粱顆粒或者是高粱粉碎面等，如果培養(yǎng)基中不添加任何輔助原料，那么就必須對(duì)小米或者高粱米的顆粒實(shí)施粉碎工作。對(duì)表1的配方表進(jìn)行分析，通過(guò)計(jì)算可以形成169個(gè)不同類(lèi)型的配方。那么這一配方數(shù)怎樣計(jì)算出來(lái)的呢？菌草種類(lèi)為4，“輔料”共有6種表現(xiàn)形式，任何一個(gè)菌草都有與之相匹配的7種比例添加梯度，那么此時(shí)我們可以得出的運(yùn)算式為：7×4×6+1=169種，這169即為組合配方數(shù)目。為了使上述的論述更加具有說(shuō)服力，作者對(duì)某一配方進(jìn)行舉例分析，例如配方21b中，“2”代表的是培養(yǎng)基中菌草的種類(lèi)巨菌草，“1”這一數(shù)字代表的是菌草添加的百分比例為55%，字母“b”是高粱顆粒這一輔佐材料。

表1 菌草栽培銀耳培養(yǎng)基配方表

1.5 試驗(yàn)方法的應(yīng)用

為使銀耳菌絲以及羽毛狀菌絲的外部結(jié)構(gòu)以及形狀更加便于觀察，那么就應(yīng)該在PDA這一平板型培養(yǎng)基中使銀耳菌絲以及羽毛狀菌絲得以完全的植入，蓋玻片經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的殺毒滅菌程序以后，以45°的角度置于培養(yǎng)基中，當(dāng)然蓋玻片的數(shù)量不能低于2個(gè)，接下來(lái)進(jìn)行的工作環(huán)節(jié)是對(duì)平板培養(yǎng)基的開(kāi)口處進(jìn)行密封工作，在此基礎(chǔ)上將培養(yǎng)基整體放入清潔的培養(yǎng)箱里，當(dāng)然該培養(yǎng)箱的溫度時(shí)刻應(yīng)該保持25℃的狀態(tài)中。對(duì)菌絲或者是羽毛狀菌絲進(jìn)行觀察室時(shí)，在鑷子的配合下將其輕置于載玻片上，在其表皮輕輕滴上微量的無(wú)水乙醇，此時(shí)的環(huán)境應(yīng)該那是溫度適宜、通風(fēng)良好的，接下來(lái)無(wú)菌水完成對(duì)其的沖洗工作以后將載玻片整體置于通風(fēng)口處，使其自行完成干燥工作；最后進(jìn)行的步驟是將2滴棉蘭染色劑完成對(duì)其的染色工作，講干燥的蓋玻片置于載玻片的上面，這樣菌絲的形態(tài)在40倍的熒光顯微鏡下就能清晰的顯現(xiàn)出來(lái)。

本文作者認(rèn)為，菌草栽培銀耳銀耳培養(yǎng)基配方的篩選是一門(mén)學(xué)問(wèn)。對(duì)表1中169種配方的培養(yǎng)基進(jìn)行參照，作者通過(guò)相關(guān)計(jì)算認(rèn)為培養(yǎng)基的水分含量應(yīng)該管控在55%范圍之內(nèi)，對(duì)試驗(yàn)原料進(jìn)行充分的攪拌以后，將其全部裝進(jìn)18cm×1.5cm的試管儀器中，每種配方的制作至重復(fù)5次，最后將試管儀器置于121℃的高壓鍋內(nèi)進(jìn)行1h的消毒處理，繼而使其自行冷卻到25℃的室溫。對(duì)進(jìn)行接種時(shí)，上述兩種菌絲的混合必須充分均勻，每2d在儀器上劃線(xiàn)1次，以此確定銀耳菌絲的生產(chǎn)速度，那么子實(shí)體的出耳情況就顯露出來(lái)了。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析工作的開(kāi)展

對(duì)銀耳菌絲以及羽毛狀菌絲外部形狀的觀察：

試驗(yàn)結(jié)果表明，在PDA栽培培養(yǎng)基上，羽毛狀菌絲色澤為乳白色、呈羽毛片狀，在試驗(yàn)的后期階段該菌絲的色彩漸漸演化為淺黃色，最后發(fā)展為淺棕色，在此過(guò)程中銀耳培養(yǎng)基的顏色也發(fā)生相應(yīng)的變化，試驗(yàn)者看到的是黑色會(huì)這是黑綠色（圖1）。

圖1 羽毛狀菌絲在明場(chǎng)和熒光顯微鏡下[200μg/（mL·CFW）]的對(duì)比照片（×40）

銀耳菌絲在PDA培養(yǎng)環(huán)境中的色彩并不是單一化的，大體上呈現(xiàn)在我們眼前的是乳白色、淺黃色以及黃色之間的中間色澤。此外在培養(yǎng)基容器的表皮上，氣生菌絲生長(zhǎng)的形態(tài)千變?nèi)f化，或直立或平立或附著生長(zhǎng)。同時(shí)部分節(jié)段上有橫隔膜出現(xiàn)，甚至是鎖狀聯(lián)合結(jié)構(gòu)的形成?？傊?，試驗(yàn)結(jié)果表明銀耳菌絲的生長(zhǎng)速率較為遲緩，原基具有膠質(zhì)化的屬性，分生孢子與瓜子的形狀相似（如圖2）。

在試驗(yàn)結(jié)束以后運(yùn)用DPS軟件的特效功能完成對(duì)優(yōu)質(zhì)菌草栽培銀耳培養(yǎng)基配方的篩選工作。可以將不同原料培養(yǎng)基的菌絲生長(zhǎng)速率大小列出來(lái)，類(lèi)蘆最快，象草居于尾端，五節(jié)芒大于巨菌草；但是從菌絲的生長(zhǎng)態(tài)勢(shì)上看，巨菌草為最佳的優(yōu)質(zhì)原料；子實(shí)體的出耳情況與輔料添加的種類(lèi)與原料的選取之間有直接的聯(lián)系。

圖2

3 對(duì)菌草栽培銀耳試驗(yàn)結(jié)果的探討與總結(jié)

對(duì)試驗(yàn)的全程現(xiàn)象進(jìn)行細(xì)致、深入的觀察，同時(shí)在生物學(xué)理論的依托下，菌草栽培技術(shù)原理在銀耳產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中的應(yīng)用是對(duì)傳統(tǒng)銀耳栽培技術(shù)的有效改良，同時(shí)它在銀耳生產(chǎn)過(guò)程中的應(yīng)用豐富了銀耳栽培體系的內(nèi)容?？傊?，本文作者主觀的認(rèn)為，菌草栽培技術(shù)可以被視為一種新型的、創(chuàng)新型的高科技生產(chǎn)手段，在培養(yǎng)基中，類(lèi)蘆與高粱粉末的均勻混合是最優(yōu)質(zhì)的配方組合。作者強(qiáng)烈建議廣大銀耳栽培者可以選擇類(lèi)蘆70%、高粱5%、麩皮24%、石灰粉1%的配方進(jìn)行銀耳的生產(chǎn)活動(dòng)。此外作者也提出這樣的意見(jiàn)，如果只是利用菌草進(jìn)行銀耳栽培試驗(yàn)，那么高粱這一試驗(yàn)輔助材料必須進(jìn)行改良工作，這樣其特質(zhì)的性能才會(huì)發(fā)揮出來(lái)。

4 結(jié)束語(yǔ)

對(duì)試驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行具體的分析工作，相關(guān)數(shù)據(jù)表明，菌草銀耳的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值略高于棉籽殼銀耳與椴木銀耳，且具有養(yǎng)生保健的功效[2]。所以我們可以肯定的是，菌草栽培技術(shù)在銀耳產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中的應(yīng)用是具有極高的現(xiàn)實(shí)價(jià)值的，它一方面使生產(chǎn)成本得以壓縮，另一方面對(duì)“菌林矛盾”起到了緩解的作用，使銀耳栽培者獲得經(jīng)濟(jì)利潤(rùn)的同時(shí)，提高其市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，此時(shí)我國(guó)的銀耳生產(chǎn)事業(yè)實(shí)現(xiàn)了健康平穩(wěn)發(fā)展的目標(biāo)。

[1]黃玉琴，項(xiàng)麗娟，林占熺，等．菌草栽培銀耳培養(yǎng)基配方篩選[J]．中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2014．

[2]暴悅梅，陳仁紹．銀耳多糖的保健作用及應(yīng)用前景[J]．營(yíng)養(yǎng)健康學(xué)報(bào)，2009．

S646

A

1004-7344（2016）24-0196-02

2016-8-14

李軍（1962-），男，高級(jí)工程師，本科，主要從事微生物工作。

李昱憬（1992-），女，本科，主要從事技術(shù)服務(wù)工作。

宋虎平（1985-），男，大專(zhuān)，主要從事技術(shù)服務(wù)工作。

閆瓏文（1981-），男，大專(zhuān)，主要從事技術(shù)服務(wù)工作。