赫欣睿,武中庸,葉永麗,高旭東,陳士恩，馬忠仁

(西北民族大學(xué)　生命科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅　蘭州　730124)

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高效液相色譜法測定氨基酸的研究進(jìn)展

赫欣睿,武中庸,葉永麗,高旭東,陳士恩*，馬忠仁

(西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅蘭州730124)

氨基酸是構(gòu)成生物體的基礎(chǔ)物質(zhì)，氨基酸分析是生命科學(xué)研究中最重要的領(lǐng)域之一。高效液相色譜法因分析速度快、操作簡便、檢測靈敏、適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)而廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)、制藥工業(yè)、生命科學(xué)研究等領(lǐng)域。該文綜述了高效液相色譜分析氨基酸的方法，包括柱后衍生法、柱前衍生法、高效陰離子交換色譜-積分脈沖安培檢測法和高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法。并對(duì)上述方法進(jìn)行了比較，為日常的氨基酸分析提供了參考。

氨基酸；高效液相色譜法(HPLC)；柱前衍生；柱后衍生；綜述；研究進(jìn)展

氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)大分子的基礎(chǔ)物質(zhì)，與生命活動(dòng)息息相關(guān)。目前，自然界中發(fā)現(xiàn)的氨基酸約有300種，而組成生物體蛋白質(zhì)的氨基酸約有20種。氨基酸分析在生物化學(xué)、食品科學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、飼料科學(xué)、化工等領(lǐng)域具有重要作用，因此改進(jìn)和發(fā)展氨基酸的分析方法對(duì)于人類具有重要意義。高效液相色譜法(Highperformanceliquidchromatography，HPLC)是在經(jīng)典液相色譜和氣相色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展的新型分離分析技術(shù)，具有分離效能高、速度快、操作簡便、檢測靈敏度好、對(duì)樣品適用范圍廣等特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于各領(lǐng)域。高旭東等[1]建立了黃芩苷、鹽酸小檗堿和大黃素的高效液相色譜檢測方法。徐磊等[2]建立了高效液相色譜測定水樣中 4 種痕量鄰苯二甲酸酯的方法。高效液相色譜法也成為分析氨基酸的一種重要方法。目前，氨基酸的高效液相色譜分析方法主要分為間接分析和直接分析兩種。間接分析可分為柱前衍生法和柱后衍生法；直接分析法包括高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法和高效陰離子交換色譜-積分脈沖安培檢測法。本文簡要概述了氨基酸的高效液相色譜分析方法，以期為日常的氨基酸分析提供參考。

1　柱后衍生高效液相色譜法

目前氨基酸柱后衍生常用的方法主要為茚三酮和鄰苯二甲醛(o-Phthaldiadehyde，OPA)法。其原理是用衍生劑將在一定色譜條件下經(jīng)陽離子交換柱分離出的氨基酸衍生成具有熒光或紫外吸收的物質(zhì),再檢測其光強(qiáng)度[3]。衍生反應(yīng)發(fā)生在氨基酸與其他物質(zhì)分離之后，不改變被分離組分的色譜行為，有效避免了其他物質(zhì)的干擾，適合于復(fù)雜樣品中氨基酸的分析檢測。

1.1茚三酮柱后衍生法

1958年，Spackman等[4]首次使用茚三酮衍生離子交換色譜法分析蛋白質(zhì)水解生成的氨基酸。茚三酮法是一種經(jīng)典的氨基酸分析方法，可同時(shí)與一級(jí)和二級(jí)氨基酸發(fā)生衍生反應(yīng)。其與一級(jí)氨基酸產(chǎn)生深藍(lán)色或藍(lán)紫色衍生物，與二級(jí)氨基酸反應(yīng)產(chǎn)生一種黃色衍生物[5]。茚三酮法具有衍生反應(yīng)迅速、產(chǎn)物穩(wěn)定、重現(xiàn)性好、能檢測多數(shù)氨基酸等優(yōu)點(diǎn)，但靈敏度不高、儀器價(jià)格較高且需雙波長檢測等缺點(diǎn)也較明顯。金明等[6]以茚三酮為衍生劑，采用高效液相柱后衍生法測定了雞肉中的18種氨基酸。該方法穩(wěn)定，具有較高的回收率。

1.2OPA柱后衍生法

OPA只能與伯胺發(fā)生衍生化反應(yīng)，生成具有熒光的異吲哚衍生物[7]。OPA能直接與一級(jí)氨基酸反應(yīng)生成熒光產(chǎn)物，但不能與二級(jí)氨基酸直接反應(yīng)。二級(jí)氨基酸需經(jīng)次氯酸鈉等氧化劑氧化開環(huán)后才能與OPA衍生。OPA法具有較高的分辨率和靈敏度，檢出限可達(dá)5～10pmol[8]，但分析時(shí)間長、專一性強(qiáng)等缺點(diǎn)限制了其應(yīng)用。師君麗等[9]采用OPA柱后衍生測定了煙草中的游離氨基酸，在樣品含量范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r2)均大于0.999；在烤煙中的加標(biāo)回收率為87.73%～100.02%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.7%～6.0%，檢出限為0.13～2.00μmol/L。該方法結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度較高。OPA法和茚三酮法特點(diǎn)比較見表1。

表1　OPA法和茚三酮法的特點(diǎn)比較[10-14]

2　柱前衍生反相高效液相色譜法

柱前衍生反相高效液相色譜法因操作簡單、分析速度快、靈敏度高及衍生試劑種類多,近年來在許多領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。目前，柱前衍生反相高效液相色譜法分析氨基酸使用的衍生劑主要有OPA，異硫氰酸苯酯(Phenylisothiocyanate，PITC)、二硝基氟苯(2,4-Dinitrobenzene，DNFB)、9-氯甲酸芴甲酯(9-Fluorenylmethylchloroformate，F(xiàn)MOC-Cl)、6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞胺基甲酸酯(6-Aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidylcarbamate，AQC)和丹磺酰氯(1-Dimethylaminonaphthalene-5-sulphonylchloride，Dansyl-Cl)等。

2.1OPA衍生法

OPA用于柱前衍生分析氨基酸由Cooper等[15]于1971年首次提出。圖1為OPA與一級(jí)氨基酸的反應(yīng)方程式。室溫下，OPA在巰基乙醇環(huán)境中與一級(jí)氨基酸于1min內(nèi)即可生成具有強(qiáng)熒光的異吲哚衍生產(chǎn)物[16]。OPA本身不發(fā)熒光的特性使其在色譜分離時(shí)不形成干擾峰。OPA只能與經(jīng)次氯酸鈉等氧化劑氧化開環(huán)后的二級(jí)氨基酸反應(yīng)，也可與FMOC-Cl聯(lián)用衍生二級(jí)氨基酸。該方法在分離時(shí)部分衍生物會(huì)發(fā)生裂解,造成衍生物不穩(wěn)定，因此衍生后需立即進(jìn)樣分析[17]。OPA衍生法因樣品制備簡單、衍生反應(yīng)迅速、靈敏度高及易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作等優(yōu)點(diǎn)而成為柱前衍生反相高效液相色譜法中使用最廣泛的方法之一。

楊衛(wèi)等[18]采用OPA柱前衍生法測定了茶葉中的17種游離氨基酸。結(jié)果表明，17種氨基酸的保留時(shí)間和峰面積RSD分別為0.02%～0.70%和0.11%～1.15%，加標(biāo)回收率為71.33%～114.75%，方法的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較好。易雪靜等[19]以O(shè)PA為衍生試劑，采用反相高效液相色譜法測定了東洞庭湖區(qū)野生水芹莖及葉中的氨基酸成分。結(jié)果表明：水芹的莖和葉所含15種氨基酸的總量分別為1.882g/100g和6.939g/100g，相關(guān)數(shù)據(jù)為評(píng)價(jià)野生水芹的營養(yǎng)價(jià)值提供了依據(jù)。該法分析速度快、結(jié)果準(zhǔn)確，適用于水芹中氨基酸的檢測。

2.2PITC衍生法

PITC能夠與一級(jí)和二級(jí)氨基酸同時(shí)反應(yīng)生成苯氨基硫甲酰衍生物(PTC),衍生反應(yīng)速度快[20-21]，靈敏度較高，以紫外檢測器檢測時(shí)其檢出限約1pmol。該方法的衍生產(chǎn)物單一、穩(wěn)定，凍干衍生產(chǎn)物在-20 ℃條件下可貯存30d，在4 ℃水溶液條件下可貯存3d，且色譜響應(yīng)值無明顯變化[22]。PITC具有揮發(fā)性，反應(yīng)時(shí)需過量加入；但PITC具有較大毒性，衍生反應(yīng)時(shí)需真空干燥裝置以除去過量衍生劑[23]。即使樣品中混有微量的PITC試劑也會(huì)縮短分析柱的使用時(shí)間。PITC與氨基酸的反應(yīng)方程式見圖2。

高向陽等[24]以PITC為衍生劑測定了賊小豆中的氨基酸種類及含量。結(jié)果表明：賊小豆中含17種氨基酸，其在1.2～250μmol/L范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系；加標(biāo)回收率為97.03%～101.3%，RSD(n=3)為0.63%～1.9%。該方法操作簡便、準(zhǔn)確性較高、穩(wěn)定性良好。張怡等[25]以PITC為柱前衍生劑，建立了反相高效液相色譜定量分析依替巴肽注射液中氨基酸組分的方法。結(jié)果表明，氨基酸在1.23～3.68mmol/L濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 1～0.999 6。該方法的準(zhǔn)確性、重復(fù)性和穩(wěn)定性良好，適合依替巴肽注射液中氨基酸的定量分析。

2.3DNFB衍生法

1953年，Pringle[26]采用DNFB作為衍生試劑分析了花粉蛋白中的氨基酸成分，其中DNFB能夠與一、二級(jí)氨基酸同時(shí)反應(yīng)生成一種穩(wěn)定的衍生產(chǎn)物，其反應(yīng)條件為避光、60 ℃[27]。該衍生產(chǎn)物由于含有硝基苯環(huán)而具有較強(qiáng)的紫外吸收，因此紫外檢測時(shí)靈敏度較高，且4 ℃避光環(huán)境下可保存1個(gè)月。DNFB柱前衍生法具有分析結(jié)果較準(zhǔn)確、重復(fù)性好、操作簡便、成本低等優(yōu)點(diǎn)。但過量衍生試劑對(duì)分析結(jié)果有一定影響，且在衍生過程中能夠產(chǎn)生對(duì)測定結(jié)果有干擾的副產(chǎn)物，這限制了DNFB在氨基酸分析中的應(yīng)用[28]。DNFB與氨基酸的反應(yīng)方程式見圖3。

趙英蓮等[29]以DNFB為衍生試劑，建立了樹莓中22種游離氨基酸的反相高效液相色譜檢測方法。結(jié)果表明：22種氨基酸的線性系數(shù)為0.993 1～1.000 0，RSD為0.95%～4.98%，加標(biāo)回收率為97.10%～103.39%，其最低檢出限為0.39～2.87μg/mL，定量下限為1.29～9.47μg/mL。該方法操作簡便、重復(fù)性較好。李戈等[30]以DNFB為衍生試劑,建立了柱前衍生高效液相色譜測定海巴戟中18種氨基酸的方法，平均回收率為94.2%～118.4%，RSD小于3%。該方法結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性較好。

2.4FMOC-Cl衍生法

FMOC-Cl是一種常用的柱前衍生劑。中性溶液中，F(xiàn)MOC-Cl在30s內(nèi)即可同時(shí)與一級(jí)和二級(jí)氨基酸反應(yīng)生成具有高靈敏度的強(qiáng)熒光衍生物,其熒光檢測靈敏度可達(dá)fmol水平[31]。以FMOC-Cl作為衍生劑衍生氨基酸時(shí),衍生產(chǎn)物需迅速用戊烷萃取，萃取所得化合物穩(wěn)定，室溫條件下可穩(wěn)定保存13d。衍生產(chǎn)物進(jìn)行色譜分離時(shí)有良好的分辨率和分離速度,不被樣品基質(zhì)干擾[32]。但剩余的衍生試劑需被萃取后才能中止衍生反應(yīng)[33]。試劑本身及其水解產(chǎn)物有熒光,檢測時(shí)易產(chǎn)生干擾。該法現(xiàn)常與OPA聯(lián)用。FMOC-Cl與氨基酸的反應(yīng)方程式見圖4。

鄧櫻花等[34]以FMOC-Cl為衍生劑，建立了5種常見氨基酸的反相高效液相色譜分離方法。最優(yōu)化條件下完全分離了5種衍生產(chǎn)物，且在0.012 5～0.2mmol/L范圍內(nèi)，峰面積與氨基酸濃度之間的線性系數(shù)為0.992 0～0.9979。山廣志等[35]以FMOC-Cl為衍生劑測定脾氨肽口服液中的17種氨基酸，其平均回收率為93.52%～112.12%，RSD(n=6)為1.0%。該方法的準(zhǔn)確性和靈敏性較好，適用于脾氨肽口服液中游離氨基酸含量的測定。

2.5Dansyl-Cl衍生法

Dansyl-Cl于1952年由Weber首先合成，該方法是目前定量測定胱氨酸的首選方法[36]。Dansyl-Cl與氨基酸反應(yīng)形成具有強(qiáng)熒光性的單酞化衍生物，它是測定一級(jí)、二級(jí)胺的熒光試劑，可同時(shí)檢測包括亞氨基酸在內(nèi)的所有氨基酸。但與組氨酸反應(yīng)時(shí)能夠形成多種衍生產(chǎn)物,與賴氨酸、酪氨酸和胱氨酸反應(yīng)時(shí)能夠形成雙丹酰衍生產(chǎn)物,與其他氨基酸反應(yīng)時(shí)能夠形成單丹酰衍生物[37]。Dansyl-Cl與氨基酸的最適反應(yīng)條件為:室溫下暗反應(yīng)35～50min。也有學(xué)者認(rèn)為反應(yīng)時(shí)間的長短主要由氨基酸的結(jié)構(gòu)所決定[38]。Dansyl-Cl與組氨酸反應(yīng)時(shí)會(huì)生成雙峰,但次峰介于天冬氨酸和谷氨酸之間被洗脫,這種行為不干擾其余氨基酸的定量分析。Dansyl-Cl與氨基酸的衍生反應(yīng)活性較差、速度較慢、重復(fù)性較差、衍生產(chǎn)物不穩(wěn)定，需在密閉和避光的條件下反應(yīng),并且衍生完成后需立即進(jìn)樣分析[39]。當(dāng)衍生產(chǎn)物的熒光被緩沖液猝滅時(shí),需用紫外檢測,但紫外檢測靈敏度較低。Dansyl-Cl與氨基酸的反應(yīng)方程式見圖5。

閆淑蓮等[40]以丹磺酰氯柱前衍生測定氨基酸,相關(guān)系數(shù)為0.998 4～0.999 4；最低檢測濃度為0.206μg/L；回收率為75.1%～96.6%。該方法操作簡便、靈敏度較高。

2.6AQC衍生法

1993年Cohen等[41]合成了一種全新的柱前衍生試劑AQC。AQC是近年來廣泛應(yīng)用的氨基酸柱前衍生試劑之一，能同時(shí)與一級(jí)和二級(jí)氨基酸發(fā)生快速、定量反應(yīng)，并且過量的AQC可在1min內(nèi)水解為不干擾樣品測定的6-氨基喹啉(AMQ)，圖6為AQC與氨基酸的反應(yīng)方程式。該方法具有靈敏度高、衍生物穩(wěn)定、檢出限低、試劑水解物干擾小、分析時(shí)間短、重現(xiàn)性好、適于復(fù)雜樣品分析等優(yōu)點(diǎn)[42]。當(dāng)樣品中含有羥基脯氨酸和羥基賴氨酸時(shí)會(huì)產(chǎn)生干擾定量的副產(chǎn)物。流動(dòng)相介質(zhì)中熒光量子含量差距較大時(shí)(低濃度僅為高濃度的10%)，會(huì)造成洗脫時(shí)前餾分的檢測靈敏度高于后餾分的靈敏度[43]。

陳蓉等[44]以AQC為衍生劑，采用柱前衍生高效液相色譜法測定了正常人血漿中17種氨基酸的含量。結(jié)果表明，其峰面積和氨基酸濃度之間具有良好的線性關(guān)系，正常人血漿中17種氨基酸的測定結(jié)果均在正常參考值范圍內(nèi)。該方法操作簡便，具有較高的靈敏度，適用于人血漿中氨基酸濃度的檢測。顧偉鋼等[45]以AQC為衍生劑，建立了反相高效液相色譜測定不同方法煮制的豬肉及其湯汁中 17 種游離氨基酸的方法，結(jié)果顯示，17種氨基酸衍生物在47min內(nèi)得到良好分離，各氨基酸的線性范圍為1～100μmol/L(胱氨酸為0.5～50μmol/L)，其線性系數(shù)均大于0.99，檢出限為0.29～0.96μmol/L，在湯汁中的加標(biāo)回收率為86.5%～101.0%。該方法的靈敏度較高，分離效果較好，能夠有效檢測肉和湯汁中的氨基酸。柱前衍生法主要的衍生試劑及特點(diǎn)比較見表2。

表2　柱前衍生法主要衍生試劑的特點(diǎn)比較

3　直接檢測法

由于柱后衍生離子交換色譜法和柱前衍生高效液相色譜法均需對(duì)樣品中的氨基酸進(jìn)行衍生后才能檢測，且衍生法操作繁雜，衍生試劑昂貴，分析成本高。因此需開發(fā)低成本、高效率的檢測方法。目前使用較廣泛的直接檢測方法有高效陰離子交換色譜-積分脈沖安培檢測法(HPAEC-IPAD)和高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法(HPLC-ELSD)。

3.1HPAEC-IPAD法

1989年Welch等[46]首先提出一種新形式的脈沖安培檢測法——積分脈沖安培檢測法,并基于此技術(shù)采用金電極實(shí)現(xiàn)了對(duì)氨基酸的檢測。其原理是強(qiáng)堿性條件下氨基酸中的羧基能夠形成陰離子,而氨基酸中的氨基被施加一定電位時(shí)能在金電極表面發(fā)生氧化反應(yīng),從而實(shí)現(xiàn)氨基酸的分離檢測。Cheng等[47]研制出“可拋棄”金電極,其對(duì)氨基酸的分析結(jié)果與普通金電極一致，且解決了普通金電極的污染問題。積分脈沖安培檢測法無需衍生處理，只需將樣品稀釋至適當(dāng)濃度即可直接進(jìn)行分離檢測,且靈敏度較高，檢出限可達(dá)pmol～fmol級(jí)[48]，操作方便，實(shí)驗(yàn)過程中不使用有毒物質(zhì)，是一種環(huán)境友好的分析方法。

鐘添華等[49]應(yīng)用HPAEC-IPAD法檢測珍稀藥材金線蓮中17種游離氨基酸，其檢出限為0.23～3.37pmol，回收率為88.9%～108.0%。該方法能夠有效檢測金線蓮中氨基酸的含量。付志紅等[50]將HPAEC-IPAD法應(yīng)用于壽胎丸煎煮液中18種游離氨基酸的檢測，檢出限為0.07～5.00μg/L，回收率為71.2%～120.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%～10.4%。該方法操作簡便、靈敏度高，能滿足壽胎丸煎煮液中氨基酸的檢測要求。

3.2HPLC-ELSD法

ELSD是20世紀(jì)90年代開始廣泛應(yīng)用的新型通用型高效液相色譜檢測器，由霧化系統(tǒng)、退溶系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)三部分組成[51]。ELSD通用性很高，樣品光學(xué)性質(zhì)和物質(zhì)本身結(jié)構(gòu)不影響其響應(yīng)，可直接檢測無紫外吸收或熒光官能團(tuán)的物質(zhì)，故十分適合未衍生氨基酸的直接檢測。但該方法的缺點(diǎn)是靈敏度較低，不能很好地解決痕量氨基酸的檢測難題，且在檢測時(shí)，響應(yīng)值常與被測物濃度不呈線性關(guān)系或線性響應(yīng)范圍較窄，不利于定量分析。

王雅玲等[52]以HPLC-ELSD法直接測定了蛹蟲草中6種未衍生游離氨基酸的含量。優(yōu)化條件下，氨基酸峰面積的對(duì)數(shù)值與其質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)值具有很好的線性關(guān)系,檢出限為10.0～15.0mg/L。該法具有很好的精密度和穩(wěn)定性。王玉紅等[53]應(yīng)用國產(chǎn)蒸發(fā)光散射檢測器直接測定了20種未衍生基本氨基酸，其峰面積對(duì)數(shù)值和質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)值在30～300mg/L范圍內(nèi)呈很好的線性關(guān)系，檢出限為24～100ng，樣品加標(biāo)回收率為90.6%～106.0%。該方法無需衍生可直接用于檢測，且準(zhǔn)確性高。

4　柱后衍生法、柱前衍生法 、HPAEC-IPAD以及HPLC-ELSD方法的比較

柱后衍生法具有反應(yīng)重復(fù)性好、衍生產(chǎn)物穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，但檢測靈敏度較低、反應(yīng)時(shí)間較長、儀器價(jià)格高等不足也限制了其使用。柱前衍生法具有衍生試劑種類多、衍生時(shí)間短、操作簡單、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但衍生副產(chǎn)物以及衍生物水解會(huì)造成干擾。HPAEC-IPAD和HPLC-ELSD具有操作簡單、能夠直接檢測以及無需衍生等特點(diǎn)，將在氨基酸分析檢測中占據(jù)越來越重要的地位。表3對(duì)柱后衍生法、柱前衍生法和直接檢測法的分析特性進(jìn)行了對(duì)比。

表3　柱后衍生法、柱前衍生法 、HPAEC-IPAD及HPLC-ELSD方法的比較

5　結(jié)　論

氨基酸分析在眾多領(lǐng)域具有重要作用，隨著科技的發(fā)展，氨基酸分析技術(shù)的應(yīng)用將愈加廣泛。高效液相色譜法作為氨基酸分析技術(shù)中的重要一員，其應(yīng)用也將得到人們的更加重視。本文綜述了高效液相色譜法分析氨基酸的方法(柱后衍生法、柱前衍生法、高效陰離子交換色譜-積分脈沖安培檢測法和高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法)，并對(duì)各方法進(jìn)行了比較，為日常的氨基酸分析提供了參考。

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Research Progress on Detection of Amino Acids by High Performance Liquid Chromatography

HE Xin-rui,WU Zhong-yong,YE Yong-li,GAO Xu-dong,CHEN Shi-en*,MA Zhong-ren

(CollegeofLifeScienceandEngineering,NorthwestUniversityforNationalities,Lanzhou730124，China)

Aminoacidisafundamentalmaterialthatorganismsneed,anditsanalysisisoneofthemostimportanttechnologiesinlifesciences.Owningtheadvantagesofrapidness,easyoperation,highdetectionsensitivityandwideapplication,thehighperformanceliquidchromatography(HPLC)iswidelyusedinmanyfields,suchasfoodindustry,pharmaceuticalindustryandlifescienceresearch.Inthisarticle,theHPLCanalyticalmethodsofaminoacids,includingpost-columnderivatization,pre-columnderivatization,highperformanceanionexchangechromatographywithintegratedpulsedamperometricdetectionandHPLCwithevaporativelightscatteringdetection,arereviewed.Thecharacteristicsofthesemethodsarecompared,whichcouldprovideareferencefortherelatedresearchanalysis.

aminoacids;highperformanceliquidchromatography(HPLC);pre-columnderivatization;post-columnderivatization；review;researchprogress

2015-11-24；

2015-12-18

教育部動(dòng)物醫(yī)學(xué)生物工程創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)(IRT13091)；國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2015BAD29B05)

陳士恩，教授，研究方向：食品安全與品質(zhì)控制，Tel:0931-4512986，E-mail:chshien@163.com

doi:10.3969/j.issn.1004-4957.2016.07.026

O657.72；O629.7

A

1004-4957(2016)07-0922-07