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降鈣素基因相關(guān)肽對(duì)心肌肥厚影響機(jī)制的研究

張欣,范曉梅,納仁高娃,薛明明

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室, 內(nèi)蒙古 呼和浩特010110)

Study on influence mechanism of calcitonin gene related protein on cardiac hypertrophy

ZHANG Xin, FAN Xiao-mei, NA REN Gao-wa, XUE Ming-ming

(PhysiologyTeachingandResearchSectionofBasicMedicalSciences,InnerMongoliaMedicalUniversity,Hohhot010110,China)

中國(guó)圖書分類號(hào)：R-332；R322.11；R331.31；R341.6；R542.202.2

關(guān)鍵詞：降鈣素基因相關(guān)肽；壓力超負(fù)荷；心肌肥厚； 內(nèi)皮素； 腫瘤壞死因子;左心系數(shù)

Key words:calcitonin gene related protein; pressur overload; cardiac hypertrophy; endothelin; tumor necrosis factor; left ventricular mess index

降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene related protein, CGRP)是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的一種內(nèi)源性舒血管物質(zhì)[1], 對(duì)心血管系統(tǒng)具有重要的生理調(diào)節(jié)作用, 但對(duì)肥厚心肌有無(wú)逆轉(zhuǎn)作用目前尚未闡明。本研究采用外源性CGRP干預(yù)心肌肥厚大鼠，觀察干預(yù)后心肌肥厚程度的變化和心肌組織中腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、內(nèi)皮素(endothelin, ET) 含量的變化，進(jìn)一步探討CGRP對(duì)心肌肥厚的影響及可能機(jī)制。

1材料

1.1動(dòng)物與分組60只♂健康Wistar大鼠,3月齡，體質(zhì)量200~250 g，由內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為3組：對(duì)照組、縮窄組、CGRP干預(yù)組。

1.2藥物和試劑戊巴比妥鈉(華北制藥廠)；CGRP(批號(hào)：RP11095，金思特科技有限公司)；TNF-α、ET放射免疫分析試劑盒(北京東雅生物技術(shù)研究所)。

1.3儀器BP-6動(dòng)物無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)試儀(成都泰盟)；GC-911-γ全自動(dòng)放免分析儀(中國(guó)科技大學(xué)開發(fā)研究中心)；Olympus光學(xué)顯微鏡(日本)。

2方法

2.1模型制備采用Anderson方法制作壓力超負(fù)荷心肌肥厚大鼠模型[2]。術(shù)前禁食禁水12 h，稱重后，用戊巴比妥鈉(0.06 mg·g-1)腹腔注射麻醉[3]，左肋緣沿腰大肌外緣做長(zhǎng)約2 cm的一斜行切口，于腎動(dòng)脈上方分離一小段腹主動(dòng)脈，用4號(hào)手術(shù)線連同8號(hào)針頭共同結(jié)扎，然后抽去針頭，往腹腔滴約1 mL的青、鏈霉素溶液，關(guān)腹。對(duì)照組實(shí)行假手術(shù)，只穿線不結(jié)扎。

2.2給藥方法術(shù)后1周給藥，CGRP干預(yù)組腹壁皮下注射CGRP 8 μg·kg-1·d-1[4]，對(duì)照組與縮窄組腹壁皮下注射與體重相匹配的生理鹽水，每天1次。

2.3動(dòng)脈收縮壓(SBP)的測(cè)定術(shù)后1周開始，每天同一時(shí)間用BP-6動(dòng)物無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)試儀檢測(cè)大鼠尾動(dòng)脈動(dòng)脈血壓，重復(fù)測(cè)量3次, 取平均值,以kPa(1 mm Hg=0.133 kPa)為單位。

2.4心肌組織標(biāo)本處理給藥4周后，處死大鼠，取出心臟，去除心房及右心室組織，保留左心室及室間隔，去除左室壁脂肪和結(jié)締組織，生理鹽水清洗，濾紙吸干，稱重，計(jì)算左心系數(shù)(左室重/體重比,LVW/ BW, mg·g-1) 。由左心室游離壁中部，分別縱行切取部分心肌組織，制作常規(guī)HE染色切片，Olympus光學(xué)顯微鏡下觀察左心室肌組織結(jié)構(gòu)的變化，并進(jìn)行顯微照相。其余的左心室組織用于檢測(cè)心肌中TNF-α、ET的含量，操作步驟嚴(yán)格按放免試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

3結(jié)果

與對(duì)照組相比, 縮窄組大鼠 SBP、LVW/BW 及心肌中 TNF-α與 ET水平明顯升高(P<0.05), 心肌中 TNF-α、ET水平與左心系數(shù)呈正相關(guān)。CGRP干預(yù)組與縮窄組相比, SBP、LVW/BW 及心肌中TNF-α、 ET 水平均明顯降低(P<0.05)。左心室心肌組織病理學(xué)改變也發(fā)現(xiàn)CGRP組心肌纖維橫徑及細(xì)胞核較縮窄組縮小，間質(zhì)增生程度較縮窄組明顯減輕。

4討論

CGRP是迄今發(fā)現(xiàn)的舒血管作用最強(qiáng)的內(nèi)源性物質(zhì),我們的實(shí)驗(yàn)通過(guò)外源性補(bǔ)充CGRP，來(lái)觀察CGRP對(duì)高血壓心肌肥厚形成過(guò)程的影響。結(jié)果表明，用CGRP干預(yù)后，心肌肥厚大鼠SBP、左心系數(shù)、心肌中TNF-α、ET的含量明顯降低，提示CGRP通過(guò)其降低血壓、拮抗心肌中TNF-α、ET的生成，從而逆轉(zhuǎn)心肌肥厚，這就表明通過(guò)外源性及時(shí)補(bǔ)充因壓力超負(fù)荷引起的CGRP不足，可以預(yù)防和逆轉(zhuǎn)高血壓心肌肥厚。其機(jī)制可能一方面通過(guò)減輕心臟后負(fù)荷, 從而改善血流動(dòng)力學(xué)因素對(duì)心肌重構(gòu)的影響；另一方面可能通過(guò)降低心肌組織 ET、TNF-α合成和分泌，從而阻止TNF-α、 ET、CGRP、調(diào)節(jié)紊亂的發(fā)生，而起到抑制心肌肥厚的作用。CGRP又是機(jī)體內(nèi)源性的舒血管物質(zhì), 作為抗高血壓心肌肥厚的輔助用藥安全,無(wú)副作用，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。

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文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-1978(2016)02-0294-02

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.02.029

作者簡(jiǎn)介：張欣(1980-)，女，博士生，講師，研究方向：心血管藥理學(xué)，E-mail：zxcc.aa@163.com;薛明明(1973-),女，碩士，教授,研究方向：心血管藥理學(xué)，通訊作者，Tel:0471-6657031,E-mail：happybird-nmg@163.com

基金項(xiàng)目：內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 2012MS1125)

收稿日期:2015-09-25,修回日期:2015-10-22

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160125.1557.058.html

網(wǎng)絡(luò)出版地址：2016-1-25 15:57