王衛(wèi)杰，李　惠，王　樂，徐　丹

（開封市醫(yī)學科學研究所，河南 開封　475000）

試驗研究Experimental Study

飼料添加劑的蓄積對幼犬睪丸功能相關酶活性的影響

王衛(wèi)杰，李惠，王樂，徐丹

（開封市醫(yī)學科學研究所，河南 開封475000）

探討飼料添加劑的蓄積對雄性幼犬的生長、生殖發(fā)育的影響。選用1月齡土犬12只，隨機分為試驗組和對照組，試驗組幼犬飼喂正常劑量日糧和高劑量組大鼠鼠肉，對照組幼犬飼喂正常劑量日糧和大鼠鼠肉，喂至幼犬成熟，檢測雄性幼犬食用飼料添加劑高劑量組大鼠鼠肉后對其生長、生殖發(fā)育產(chǎn)生影響。幼犬睪丸標志酶活性結果表明，試驗組幼犬睪丸組織中酸性磷酸酶（ACP）和乳酸脫氫酶（LDH）的酶活性下降，堿性磷酸酶（AKP）活性未發(fā)生變化；試驗組的ACP和LDH活性下降，差異極顯著（P＜0.01）。

飼料添加劑；犬；睪丸標志酶；蓄積

隨著人民生活水平的不斷提高，人們對于食品的安全問題愈加關注，尤其是動物性食品安全問題。動物飼料是食品有毒有害物質(zhì)殘留的一個重要來源，飼料添加劑通過畜禽產(chǎn)品帶給人類的隱患將是難以估量的［1］。

因此本試驗研究了食用飼料添加劑的大鼠鼠肉是否對雄性幼犬的生殖系統(tǒng)及發(fā)育產(chǎn)生影響，通過模擬人類食物鏈試驗，進一步為動物飼料添加劑的蓄積對人類生殖系統(tǒng)的影響提供初步試驗依據(jù)，從而推測動物飼料添加劑對生殖發(fā)育的影響。

1　材料與方法

1.1試驗動物

SD雄性大鼠：河南省試驗動物中心購買的26日齡SD雄性大鼠，體重為85.00±4.50 g。實驗室溫度控制在22～24℃，空氣相對濕度50%～65%，自然采光，自由飲水，環(huán)境安靜。試驗用犬的選擇是3只公犬，10只母犬，均通過農(nóng)村收購，體重為3.5～4.5 kg。3只公犬和10只母犬交配，對照組和試驗組均為6只，從交配所生的10窩中選取6窩，每窩選取2只體重相近、發(fā)育良好的幼犬。

1.2試驗飼糧

4%仔豬用復合預混料配方見表1。

表1　4%仔豬用復合預混料配方

1.3試驗設計

試驗動物均為體重相近，年齡相近的幼犬12只。隨機分為試驗組及對照組，每組6只，試驗組從2月齡開始喂養(yǎng)大鼠鼠肉。

幼犬每日肉類：0.262×57.3%=0.150 kg，試驗大鼠平均重量300.00 g，約需0.5只；以后每月增加0.5只；對照組飼喂正常犬日糧和正常大鼠鼠肉，試驗組飼喂高劑量組大鼠鼠肉和正常犬日糧，飼喂期為10個月。

1.4飼養(yǎng)管理

所有試驗犬全部飼養(yǎng)于同一動物舍，單籠飼養(yǎng)，定期沖洗及消毒。預試期對試驗犬進行驅(qū)蟲、注射疫苗。采用群飼方式，每天8:00和16:00各飼喂1次。觀察犬的生長發(fā)育、排便、采食等健康情況，并記錄各組投料量與剩料量，做好數(shù)據(jù)統(tǒng)計工作。

1.4測定指標

1.4.1生長性能指標

體重的稱量：在試驗2月齡開始每月第1周周一上午測量1次，連續(xù)測11個月。

1.4.2睪丸組織標志酶指標

試驗結束后取雙側(cè)睪丸，用冰冷的生理鹽水漂洗，制成1%的組織勻漿，酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）和乳酸脫氫酶（LDH）的活性測定操作按照試劑盒說明進行。

1.5統(tǒng)計學處理

試驗結果用SPSS 21.0軟件，采用One Way ANOVA進行統(tǒng)計，并進行Duncan's多重比較，結果以“平均值±標準誤”表示。

2　結果與分析

2.1犬體重測定結果

試驗組犬體重變化結果見表2。

表2　試驗組犬體重變化結果　kg

由表2可知，試驗組幼犬4月齡開始其體重明顯增加，差異極顯著（P＜0.01）；飼喂不同天數(shù)后，試驗組犬體重與對照組相比明顯升高，差異極顯著（P＜0.01）。

2.2犬的睪丸組織標志酶指標結果

各組犬的睪丸組織標志酶指標結果見表3。

由表3可知，增加食用實驗大鼠鼠肉的劑量，試驗組睪丸組織標志酶的變化如下：試驗組ACP、LDH活性下降，試驗組AKP活性未發(fā)生明顯變化。與對照組相比，試驗組的ACP、LDH活力明顯降低，差異極顯著（P＜0.01）。

表3　各組犬的睪丸組織標志酶指標結果　U·L-1

3　討論

3.1雄性幼犬食用試驗大鼠對其體重的影響

飼料添加劑引起機體和器官組織的改變，往往在動物體重和臟器重量上反映出來。因此動物體重和臟器重量是機體改變的重要而敏感的指標之一。本試驗結果表明，試驗初始幼犬體重沒有出現(xiàn)顯著差異，但試驗組雄性幼犬食用大鼠鼠肉后，試驗組幼犬體重從4月齡開始逐漸增加，試驗組體重增加速度相比對照組較快。試驗結果表明，飼料添加劑的二次蓄積能夠促進雄性幼犬的生長。

3.2雄性幼犬食用試驗大鼠對其睪丸標志酶指標的影響

雄性生殖細胞在睪丸組織中的發(fā)育依賴于其生存的穩(wěn)定內(nèi)環(huán)境、激素以及相關酶類的調(diào)節(jié)［2］。有研究表明，睪丸組織標志酶在精子發(fā)生與成熟過程中起重要作用，比如琥珀酸脫氫酶（SDH）、LDH、ACP等。主要分布于生精細胞的線粒體內(nèi)，是能量代謝的主要參與酶，精子的發(fā)生和成熟與SDH和LDH的活力大小密切相關［3-5］。睪丸AKP、ACP和LDH是睪丸中的幾種標志酶，其活性是睪丸機能正常與否的標志，也是維持精子發(fā)生不可缺少的重要條件［6］。試驗發(fā)現(xiàn)，10月齡幼犬睪丸組織中LDH活性下降，說明睪丸組織細胞能量代謝作用受到影響，進而影響到精子質(zhì)量；ACP由前列腺分泌，主要分布于睪丸支持細胞的溶酶體內(nèi)，是支持細胞標志酶，與精液參數(shù)密切相關。ACP參與精子代謝并有助于精子活力，其活性受雄激素調(diào)控，ACP在精液中的含量變化能反應前列腺的分泌功能并有助于前列腺疾病的診斷。ACP在性激素誘導下參與蛋白質(zhì)的合成，其活性改變與上皮細胞的變性有關，可作為是否有生精障礙的指標；試驗結果同樣顯示，試驗組酸性磷酸酶活性隨精子密度及活動率減低而下降［7］。

本試驗結果表明，雄性犬增加食用實驗大鼠鼠肉的劑量，實驗組睪丸組織中LDH、ACP活性隨之下降。睪丸LDH參與能量代謝，該酶受到抑制，將阻礙能量的供給，造成精子活動度降低，良好精子比例下降［8-10］。

4　結論

雄性幼犬食用實驗大鼠瘦肉11月齡睪丸組織中乳酸脫氫酶、酸性磷酸酶活性下降，堿性磷酸酶活性未見明顯變化。說明雄性幼犬食用實驗大鼠后可干擾其部分睪丸標志酶的正常反應，引起生殖系統(tǒng)的損傷。

［1］熊前，吳衍，徐明，等.補飼微量元素對種公犬精液質(zhì)量的影響［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2013（16）:104-105.

［2］樊友平.精液微量元素鋅、硒對精子質(zhì)量的影響［J］.生殖與避孕，2005，25（1）:63.

［3］李紅，何平，劉偉，等.不同濃度的谷氨酰胺對幼犬生長性能的影響［J］.中國飼料添加劑，2006（7）:33-35.

［4］張磊.微量元素對種公牛精液品質(zhì)的影響［D］.揚州:揚州大學，2006.

［5］于文會，張海霞，張春燕，等.中藥飼料添加劑對犬生長性能和生理生化指標的影響［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2008，27（4）:7-10.

［6］ Arriola K G，Kim S C，Staples C R，et al.Effect of fibrolytic en? zyme application to low-and high-concentrate diets on the perfor?mance of lactating dairy cattle［J］.Journal of Dairy Science，2011， 94（2）: 832-841.

［7］衛(wèi)海燕，王會貞，李春枝，等.兒童肥胖與性早熟關系的研究［J］.醫(yī)藥論壇雜志，2011（9）:41-43.

［8］徐丹，沈澎，盧大雷，等.肥胖對青春期公犬精子發(fā)育的影響［J］.河南畜牧獸醫(yī):綜合版，2014，35（7）:5-6.

［9］王衛(wèi)杰，沈澎，盧大雷，等.飼料添加劑的蓄積對人體健康及環(huán)境的影響［J］.飼料博覽，2014（7）:63-64.

［10］郭萍.飼料添加劑對人類健康及環(huán)境的影響［J］.微量元素與健康研究，2004，21（1）:29-31.

The Influence of Accumulation of Feed Additive on Puppies Testicular Function Marker Enzyme Activity

WANG Weijie，LI Hui，WANG Le，XU Dan
（Institute of Medical Sciences in Kaifeng，Kaifeng 475000，Henan China）

This experiment aimed to study and analysis the feed additives widely used on the effect of feed additives accumulation on growth and reproductive development of the second-feed male pups.Tweleve onemonth-old male pups were selected and randomly divided into experimental and control groups.The control group were fed with the normal diet and rat meat，the experimental group were fed with the normal diet and high-dose rat meat.After the dogs mature，and tested high-dose rat meat effect on male pups growth and reproductive development. Detected testicular function marker enzyme activity and the results showed that the experimental group testicular tissue lactate dehydrogenase，acid phosphatase activities were having a downward trend，the experimental group of alkaline phosphatase viability did not change.Compared with the control group，LDH viability experimental group was significantly lower，the difference was statistically significant；ACP vitality experimental group was significantly lower，the difference was statistically significant（P＜0.05）.

feed additives；puppies；testicular function marker enzyme；accumulation

S816.7；S829.2

A

1001-0084（2016）07-0001-03

2016-05-27

開封市科技攻關計劃項目（110309）

王衛(wèi)杰（1987-），女，河南開封人，碩士研究生，研究方向為生物學。