（吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院生物工程學(xué)院，吉林吉林 132101）摘要：對(duì)長(zhǎng)白山野生香薷中揮發(fā)油的抗氧化活性進(jìn)行研究。以水蒸氣蒸餾法提取香薷中的揮發(fā)油，通過(guò)分光光度法測(cè)定揮發(fā)油對(duì)DPPH自由基、羥基自由基（·OH）、超氧陰離子自由基（O-2 · ）的清除能力，從而判定揮發(fā)油的抗氧化活性。結(jié)果表明，不同濃度的揮發(fā)油清除自由基的能力不同，相同濃度下的揮發(fā)油對(duì)不同自由基的清除能力也各有差異。結(jié)果表明，野生香薷揮發(fā)油具有較強(qiáng)的抗氧化性，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化學(xué)工業(yè)等領(lǐng)域。研究為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)香薷揮發(fā)油的藥用價(jià)值提供了良好的數(shù)據(jù)支持。

關(guān)鍵詞：長(zhǎng)白山野生香薷；水蒸氣蒸餾；抗氧化性；揮發(fā)油

中圖分類(lèi)號(hào)： R284.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2016）06-0399-02

收稿日期：2015-05-15

基金項(xiàng)目：吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院微生物重點(diǎn)學(xué)科培育項(xiàng)目（編號(hào)：吉農(nóng)院合字[2013]第X005號(hào)）。

作者簡(jiǎn)介：于加平（1973—），男，吉林大安人，副教授，從事分析化學(xué)和天然產(chǎn)物的教學(xué)與科研。E-mail：542646746@qq.com。香薷[Elsholtzia ciliata（Thunb.）Hyland]是唇形科芳香草本植物，別稱(chēng)小葉蘇子、香草、臭粥芥等，其香味極濃，是東北地區(qū)傳統(tǒng)的調(diào)料。香薷主要分布于江西、陜西、山東、甘肅、吉林等地，在中國(guó)資源豐富，其中以江西省產(chǎn)量大、品質(zhì)佳，又稱(chēng)“江香薷”[1]。根據(jù)藥典記載，香薷是一種常見(jiàn)的中草藥，具有發(fā)汗解表、和中化濕、利尿消腫的功效，可治療風(fēng)寒、感冒、胸悶氣喘、嘔吐腹瀉等[2-3]。據(jù)相關(guān)報(bào)道，目前主要是對(duì)“江香薷”中的黃酮、多糖、揮發(fā)油等方面進(jìn)行的研究，而對(duì)長(zhǎng)白山區(qū)野生香薷揮發(fā)油的研究卻鮮見(jiàn)報(bào)道。揮發(fā)油具有鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒、解熱、緩解腸痙攣等功效[4-5]。為了更好地研究、利用香薷，本研究以長(zhǎng)白山野生香薷為原料，采用水蒸氣蒸餾法對(duì)其中的揮發(fā)油進(jìn)行提取，并利用其對(duì)DPPH自由基、羥基自由基以及對(duì)超氧陰離子的清除能力來(lái)研究揮發(fā)油的抗氧化性能，研究結(jié)果可為長(zhǎng)白山野生香薷食藥用價(jià)值的開(kāi)發(fā)和利用奠定理論基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1材料長(zhǎng)白山野生香薷，采自吉林省長(zhǎng)白山區(qū)內(nèi)，經(jīng)專(zhuān)家鑒定為長(zhǎng)白山野生香薷，經(jīng)陰干、粉碎，得香薷粉末備用。

1.1.2儀器FZ102型微型植物粉碎機(jī)，天津市泰斯特儀器有限公司；揮發(fā)油提取器、FA2004N型天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司；ATC-15A型電子恒溫電熱套，海寧市華星儀器廠；RE3000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器公司；UV2300紫外分光光度計(jì)，上海天美科學(xué)儀器有限公司。

1.1.3試劑乙醚、NaCl、Na2SO4 、95%乙醇溶液、0.1 mol/L DPPH無(wú)水乙醇溶液、16.0 mmol/L FeSO4、0.04 mmol/L H2O2、6.0 mmol/L水楊酸、0.05 mol/L Tris-HCl緩沖液、50 mmol/L 鄰苯三酚、8 mol/L HCl 0.1 mL。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1長(zhǎng)白山野生香薷中揮發(fā)油的提取利用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油[6-7] 。精確稱(chēng)取20 g干燥野生香薷粉末，置于燒瓶?jī)?nèi)，連接水蒸氣蒸餾裝置后開(kāi)始提取；收集餾出液，向餾出液中加入NaCl，靜置后用乙醚萃?。?0 mL×3次），合并萃取液；向萃取液中加入適量無(wú)水Na2SO4后，低溫干燥24 h后再進(jìn)行過(guò)濾，旋蒸回收乙醚，收集揮發(fā)油，置于冰箱內(nèi)備用。

1.2.2長(zhǎng)白山野生香薷中揮發(fā)油抗氧化性研究

1.2.2.1羥基自由基的清除率測(cè)定待測(cè)樣品用無(wú)水乙醇稀釋成0、20、40、60、80 μg/mL。取若干10 mL離心管，依次加入16.0 mmol/L FeSO4、0.04 mmol/L H2O2、6.0 mmol/L水楊酸及不同質(zhì)量濃度的樣品。37 ℃反應(yīng)30 min，流水冷卻，各管中分別加入0.9 mL無(wú)水乙醇，使體系終體積為6.0 mL，2 000 r/min 離心10 min。取出后于510 nm處比色測(cè)定吸光度。每個(gè)試樣做3次平行試驗(yàn)，取平均值。 清除率按下式計(jì)算：

S=（Do（510 nm）-Di（510 nm））/Do（510 nm）×100%。

（1）

式中：Do（510 nm）為未加樣品的吸光度；Di（510 nm）為加入樣品的吸光度；S為清除率，%。

1.2.2.2超氧陰離子自由基的清除率測(cè)定待測(cè)樣品用無(wú)水乙醇稀釋成0、20、40、60、80 μg/mL。取4.5 mL 0.05 mol/L、pH值8.2的Tris-HCl緩沖液于試管中，置于25 ℃水浴中預(yù)熱20 min，加入1 mL供試液、0.5 mL 2.5 mmol/L鄰苯三酚，混勻后在25 ℃水浴中精確反應(yīng)5 min，立即用0.1 mL 8 mol/L HCl終止反應(yīng)，并在波長(zhǎng)320 nm處測(cè)定吸光度D320 nm。對(duì)照組用0.5 mL無(wú)水乙醇代替鄰苯三酚，同時(shí)設(shè)立試劑空白管。每個(gè)試樣做3次平行試驗(yàn)，取平均值。清除率按下式計(jì)算：

S′1=（Do（320 nm）-Di（320 nm））/Do（320 nm）×100%。

（2）

式中：Do（320 nm）為2.5 mmol/L鄰苯三酚溶液的吸光度；Di（320 nm）為加入供試液的吸光度；S′1為清除率，%。

1.2.2.3DPPH自由基清除率的測(cè)定待測(cè)樣品用無(wú)水乙醇稀釋成0、20、40、60、80 μg/mL。分別取不同質(zhì)量濃度的供試品溶液0.5 mL，置于10 mL試管中，加入2.5 mL濃度為 0.1 mol/L DPPH 溶液，室溫避光反應(yīng)30 min。同時(shí)以95%乙醇為空白對(duì)照，于517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。每個(gè)試樣做3次平行試驗(yàn)，取平均值。按照下列公式計(jì)算DPPH自由基清除率：

S2=[Do（517 nm）-（Di（517 nm）-Dj（517 nm））]/Do（517 nm）×100%。

（3）

式中：Do（517 nm）為0.5 mL 95%乙醇加2.5 mL DPPH 溶液的吸光度；Dj（517 nm）為0.5 mL樣品溶液加2.5 mL 95%乙醇的吸光度；Di（517 nm）為0.5 mL樣品溶液加2.5 mL DPPH 溶液的吸光度；S為清除率，%。

2結(jié)果與分析

2.1長(zhǎng)白山野生香薷中揮發(fā)油對(duì)·OH的清除率

按“1.2.2.1”節(jié)方法，測(cè)定長(zhǎng)白山野生香薷中不同濃度揮發(fā)油對(duì)·OH清除率，結(jié)果見(jiàn)表1?？梢?jiàn)長(zhǎng)白山野生香薷中揮發(fā)油對(duì)羥基自由基有很強(qiáng)的清除作用，隨著揮發(fā)油濃度增加，對(duì)羥基自由基的清除作用越明顯，即清除率與揮發(fā)油的含量存在一定的量效關(guān)系。

2.2長(zhǎng)白山野生香薷中揮發(fā)油對(duì) O-2 · 的清除率

按“1.2.2.2”節(jié)方法，測(cè)定長(zhǎng)白山野生香薷中不同濃度揮發(fā)油對(duì) O-2 · 清除率，結(jié)果見(jiàn)表2?？梢?jiàn)長(zhǎng)白山野生香薷中揮發(fā)油對(duì) O-2 · 也有很強(qiáng)的清除作用，5種濃度的揮發(fā)油對(duì) O-2 · 的清除率均隨濃度的增加而增大，即有一定的劑量效應(yīng)。隨著野生香薷中揮發(fā)油濃度的增加，對(duì) O-2 · 的清除作用越明顯。

2.3長(zhǎng)白山野生香薷中揮發(fā)油對(duì)DPPH·的清除率

按“1.2.2.3”節(jié)方法，測(cè)定長(zhǎng)白山野生香薷中不同濃度揮發(fā)油對(duì)DPPH·清除率，結(jié)果見(jiàn)表3。可見(jiàn)長(zhǎng)白山野生香薷中揮發(fā)油對(duì)DPPH·也有很強(qiáng)的清除作用，隨著揮發(fā)油的濃度增加，對(duì)DPPH·的清除作用越明顯。揮發(fā)油對(duì)DPPH·的清除活力隨揮發(fā)油濃度的增加而增強(qiáng)，但隨著濃度增加，清除率增速變緩。

3結(jié)論

為了合理應(yīng)用長(zhǎng)白山區(qū)野生香薷寶貴資源，通過(guò)水蒸氣蒸餾技術(shù)提取香薷中的揮發(fā)油，并對(duì)其抗氧化性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，長(zhǎng)白山野生香薷中揮發(fā)油對(duì)DPPH自由基、超氧陰離子自由基、羥基自由基均有顯著的清除效果，表明長(zhǎng)白山野生香薷中揮發(fā)油具有較強(qiáng)的抗氧化性，是一種天然的抗氧化劑，對(duì)疾病的治療及化妝品產(chǎn)業(yè)均有開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。

目前，長(zhǎng)白山野生香薷主要用作野菜為人們食用，研究結(jié)果可為長(zhǎng)白山野生香薷寶貴資源在藥用價(jià)值和綜合利用等方面提供數(shù)據(jù)支持。

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