韓瑜++張久磊++王芳++屈小媛++秦華軍++賈強(qiáng)

摘要：為了確定山銀花藥材的適宜采收期，對山銀花藥材不同產(chǎn)地、不同部位、不同時(shí)期的主要藥用成分的積累分布規(guī)律進(jìn)行了研究。高效液相色譜法測定采集于不同產(chǎn)地山銀花藥材花蕾中綠原酸、川續(xù)斷皂苷乙和灰氈毛忍冬皂苷乙的含量，以及同一產(chǎn)地山銀花藥材不同部位、不同時(shí)期綠原酸、川續(xù)斷皂苷乙和灰氈毛忍冬皂苷乙的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采自綏陽小關(guān)的山銀花藥材的綠原酸含量最高；同一產(chǎn)地山銀花藥材的花與葉中綠原酸的含量相對較高，花中含量最高；盛花期比花蕾期中綠原酸含量高。以上結(jié)果表明，產(chǎn)地對山銀花藥材的質(zhì)量有影響，山銀花的花與葉均可作為藥用部位，盛花期為最佳采收期。

關(guān)鍵詞：山銀花；綠原酸；川續(xù)斷皂苷乙；灰氈毛忍冬皂苷乙；分布規(guī)律

中圖分類號(hào)： S184；S567.7+90.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2016）06-0294-02

收稿日期：2015-05-07

基金項(xiàng)目：貴州省中藥現(xiàn)代化重大專項(xiàng)[編號(hào)：黔科合重大專項(xiàng)字（2012）6010號(hào)]。

作者簡介：韓瑜（1984—），女，貴州貴陽人，碩士，助理研究員，主要從事中藥資源利用及藥用成分分析研究。E-mail：1070530803@qq.com。

通信作者：賈強(qiáng)，博士，研究員，主要從事植物化學(xué)及藥理學(xué)研究。E-mail：42540816@qq.com。山銀花（Lonicerae flos）為忍冬科植物L(fēng). macranthoides Hand.-Mazz.、L. hypoglauca Miq.、L. confusa DC. 或L. fulvotomentosa Hsu et S.C. Cheng的干燥花蕾或帶初開的花。夏初花開放前采收、干燥[1]。山銀花具有抗氧化、抗過敏、抗病原微生物、抗炎退熱和免疫調(diào)節(jié)等藥理作用[2-3]。在中醫(yī)上，證實(shí)其具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱之功效，主要用于治療風(fēng)熱感冒和喉痹丹毒等癥[1，4]，為我國常用藥材之一。在民間，山銀花也被稱為“金銀花”，為“銀翹解毒丸片”、“維生素C銀翹片”等多種中成藥的主要原料。最近幾年，還廣泛應(yīng)用于食品、化妝品和保健品等方面，具有很大的市場潛力，因此有廣闊的種植前景。山銀花在我國西南3省、兩廣地區(qū)、湖南、海南等省區(qū)都有廣泛分布[5]。山銀花的主要活性成分有綠原酸、黃酮類和三萜類[6-7]。近些年來，在山銀花中又發(fā)現(xiàn)了20多個(gè)皂苷類成分[3]，其中陳君等從灰氈毛忍冬花蕾中分離得到了8個(gè)皂苷類成分[8]。作為山銀花主要有效成分的綠原酸，與該植物的藥用價(jià)值和臨床療效是緊密相關(guān)的[9]。目前，山銀花的質(zhì)量評(píng)價(jià)主要是由綠原酸含量決定[10]?！吨袊幍洹?010年版一部規(guī)定：“本品按干燥品計(jì)算，含綠原酸（C16H18O9）不得少于2.0%，含灰氈毛忍冬皂苷乙（C65H106O32）和川續(xù)斷皂苷乙（C53H86O22）的總量不得少于5.0%[1]?！?/p>

本研究通過對貴州不同產(chǎn)區(qū)的灰氈毛忍冬植物和在同一產(chǎn)區(qū)、不同部位、不同時(shí)期的灰氈毛忍冬植物的主要活性成分含量進(jìn)行測定，研究山銀花藥材植株在1個(gè)生長周期內(nèi)主要藥用成分的積累與分布規(guī)律，以確定其適宜采收期。研究結(jié)果將為貴州山銀花藥材規(guī)范化栽培和采收提供理論依據(jù)，同時(shí)也為貴州中藥材山銀花的發(fā)展提供一定的技術(shù)支撐。

1材料與方法

1.1樣品采集

2014年4月分別在黔南平塘、鳳崗藥材基地、湄潭縣黃家壩、清鎮(zhèn)、施秉、綏陽小關(guān)采集了山銀花藥材植株樣本，同期采集綏陽小關(guān)山銀花藥材花、葉、枝植株樣本。經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院魏升華教授鑒定，所采樣本為忍冬科植物灰氈毛忍冬L. macranthoides Hand.-Mazz.。具體采集方案見表1和表2。

1.2儀器與試劑

HP1100 HPLC；Xtimate TM C18 4.6 mm×250 mm，4.5 μm色譜柱；綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品（中國生物制品檢定所）、川續(xù)斷皂苷乙標(biāo)準(zhǔn)品（中國生物制品檢定所）、灰氈毛忍冬皂苷乙標(biāo)準(zhǔn)品（中國生物制品檢定所）；乙腈（色譜純）、甲醇（分析純）、乙酸（分析純）、去離子水。

1.3標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

分別取上述3種標(biāo)準(zhǔn)品適量，精確稱量，加50%甲醇制成每1 mL含綠原酸0.5 mg、 川續(xù)斷皂苷乙0.2 mg、灰氈毛忍冬皂苷乙0.6 mg的混合溶液。

1.4樣品溶液的制備

取本品粉末（過4號(hào)篩）約0.5 g，精確稱量，置具塞錐形瓶中，加入50 mL 50%甲醇，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率 300 W，頻率40 kHz）40 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得樣品溶液。

1.5色譜條件

HP1100 HPLC；Xtimate TM C18 4.6 mm×250 mm，4.5 μm色譜柱；以乙腈為流動(dòng)相A，以0.4%乙酸溶液為流動(dòng)相B，按規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫（表3）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：VWD 330 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：5 μL。

1.6測定法

分別吸取2、10 μL標(biāo)準(zhǔn)品溶液，5～10 μL樣品溶液，注入HPLC，檢測，用外標(biāo)法計(jì)算綠原酸的含量，采用同法對數(shù)方程計(jì)算灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙的含量。

2結(jié)果與分析

2.1不同產(chǎn)地山銀花中綠原酸、川續(xù)斷皂苷乙、灰氈毛忍冬皂苷乙的含量測定

不同產(chǎn)地的山銀花花蕾中綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙、川續(xù)斷皂苷乙的含量存在較大差異（表4）。在6個(gè)地區(qū)采集的樣品中綠原酸含量介于1.139%～3.501%之間，黔南平塘采集的樣品綠原酸含量最低，而綏陽小關(guān)采集的樣品綠原酸含量最高；川續(xù)斷皂苷乙含量介于0.217%～1.609%之間，鳳崗藥材基地采集的樣品川續(xù)斷皂苷乙含量最低，而清鎮(zhèn)采集的樣品綠原酸含量最高；灰氈毛忍冬皂苷乙含量介于 5.47%～8.4%之間，施秉采集的樣品灰氈毛忍冬皂苷乙含量最高，而黔南平塘采集的樣品灰氈毛忍冬皂苷乙含量最低。以上結(jié)果表明，產(chǎn)地對山銀花品質(zhì)有很大影響。表4中樣品完全按《中國藥典》2010年版一部方法處理和測定。6個(gè)產(chǎn)地的樣品中只有產(chǎn)自于梅潭縣黃家壩、清鎮(zhèn)、施秉和綏陽小關(guān)的山銀花藥材中綠原酸含量符合《中國藥典》規(guī)定的不少于2.0%的限量。川續(xù)斷皂苷乙和灰氈毛忍冬皂苷乙的總含量最高值是在清鎮(zhèn)采集的樣品，為 9.729%，最低值是在鳳崗藥材基地采集的樣品，為5.787%，平均值為7.828%；6個(gè)產(chǎn)地的樣品均符合《中國藥典》規(guī)定的川續(xù)斷皂苷乙和灰氈毛忍冬皂苷乙的總量不得少于 5.0% 的限量。

2.2同一產(chǎn)地山銀花不同部位、不同時(shí)期綠原酸、川續(xù)斷皂苷乙、灰氈毛忍冬皂苷乙的含量測定

表5中樣品完全按《中國藥典》2010年版一部方法處理和測定。根據(jù)測試結(jié)果可看到，在山銀花藥材花的部分綠原酸含量較高值是在盛花期采集的樣品，為2.92%，而較低值是在花蕾期采集的樣品，為2.36%，平均值為2.64%，所有樣品均符合《中國藥典》規(guī)定的不得少于2.0%的限量；而川續(xù)斷皂苷乙和灰氈毛忍冬皂苷乙的總含量較高值是在花蕾期采集的樣品，為8.03%，較低值是在盛花期采集的樣品，為458%，平均值為6.305%；只有花蕾期的樣品符合《中國藥典》規(guī)定的川續(xù)斷皂苷乙和灰氈毛忍冬皂苷乙的總量不得少于 5.0% 的限量。在山銀花藥材葉的部分綠原酸含量較高值是在盛花期采集的樣品，為2.90%，而較低值是在花蕾期采集的樣品，為2.14%，平均值為2.52%，所有樣品均符合《中國藥典》規(guī)定的限量；而川續(xù)斷皂苷乙和灰氈毛忍冬皂苷乙的總含量較高值是在盛花期采集的樣品，為1.36%，較低值是在花蕾期采集的樣品，為1.27%，平均值為1.315%；所有樣品均低于《中國藥典》規(guī)定的限量。在山銀花藥材枝的部分綠原酸含量較高值是在盛花期采集的樣品，為0.51%，而較低值是在花蕾期采集的樣品，為0.33%，平均值為0.42%，所有樣品均低于《中國藥典》規(guī)定的限量；而川續(xù)斷皂苷乙和灰氈毛忍冬皂苷乙的總含量較高值是在盛花期采集的樣品，為 1.82%，較低值是在花蕾期采集的樣品，為0.78%，平均值為1.3%；所有樣品均低于《中國藥典》規(guī)定的限量。

3討論與結(jié)論

山銀花藥材中這3種活性成分的含量隨著采集地點(diǎn)的不同而發(fā)生波動(dòng)，體現(xiàn)了地區(qū)因素對于藥材質(zhì)量的影響。此外，灰氈毛忍冬皂苷乙的含量普遍要比同地區(qū)樣品中的川續(xù)斷皂苷乙的含量高；而作為山銀花藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)研究的主要成分綠原酸的含量最高值出現(xiàn)在采自綏陽小關(guān)產(chǎn)區(qū)的樣品中，因此，為了研究山銀花藥材中綠原酸的積累與分布規(guī)律，筆者把

采自綏陽小關(guān)產(chǎn)區(qū)不同時(shí)期、不同部位的樣品作為研究對象進(jìn)行分析。

花與葉中綠原酸的含量相對較高，花中含量最高，而葉中的含量也較高；在花中川續(xù)斷皂苷乙和灰氈毛忍冬皂苷乙的總含量較高，而在葉與枝中二者總含量較低，故綜合考慮花與葉均可作為用藥部位；而花與葉中綠原酸含量在盛花期都比花蕾期高，可考慮將盛花期作為最佳采收期。

綜上所述，本試驗(yàn)對不同產(chǎn)區(qū)山銀花藥材的主要藥用成分綠原酸、川續(xù)斷皂苷乙、灰氈毛忍冬皂苷乙的含量進(jìn)行了測定，說明了不同產(chǎn)區(qū)是造成其藥用成分含量差異的影響因素之一。因此，對不同產(chǎn)區(qū)主要藥用成分的累積和分布規(guī)律的研究是很有必要的。與此同時(shí)，對同一產(chǎn)區(qū)山銀花不同部位、不同時(shí)期綠原酸的積累與分布規(guī)律的研究表明，不同部位和不同時(shí)期，主要藥用成分的含量也有較大差異，所以通過此項(xiàng)研究能更準(zhǔn)確地確定藥用部位和最佳的采收期。

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