楊儉　吳小霞　辛朝雄

【摘要】 目的 研究結核性胸膜炎患者實施T-SPOT.TB試驗的診斷意義。方法 25例合并胸腔積液的結核性胸膜炎患者作為觀察組， 另選擇同時期25 例肺炎滲出性胸膜炎且無原發(fā)結核患者作為對照組， 對兩組胸腔積液實施 T-SPOT.TB結核試驗， 觀察記錄檢測結果。結果 觀察組檢測結果陽性23 例， 陰性2例， 敏感性92.0%（23/25）；對照組檢測結果陽性5 例， 陰性 20 例， 敏感性20.0%（5/25）。觀察組敏感性大于對照組（P<0.05）。結論 對結核性胸膜炎患者實施T-SPOT.TB試驗的檢測方法可以提高診斷準確性， 且該檢測方法對結核桿菌敏感性較高。

【關鍵詞】 T-SPOT.TB試驗；結核性胸膜炎；診斷

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.13.086

作為胸腔積液發(fā)生的常見原因， 結核性胸膜炎于國內胸腔積液患者中占49.5%～54.5%， 因其特異性表現(xiàn)缺乏， 細菌學方法檢測陽性率不高， 且胸膜活檢創(chuàng)傷性也使其在臨床應用中受到限制[1， 2]。該病初診確診難度較大， T細胞斑點試驗（tcell enzyme-linked immunospot， T-SPOT）主要由酶聯(lián)免疫斑點檢測技術（enzyme-linked immunospot， ELISPOT）發(fā)展而來， 其可以于單細胞水平針對細胞因子的分泌狀況進行檢

測[3]。主要通過事先進行設計的抗體捕獲細胞所分泌的特殊細胞因子通過酶聯(lián)斑點顯色表現(xiàn)出來。通常檢驗1 d內可以完成， 從而為患者減少因檢驗而滯后的治療時間。T-SPOT.TB

試驗具有較高的敏感性、特異性及可重復性， 可以從20～30萬

的細胞中將單個蛋白分泌細胞檢測出來， 需要的標本數(shù)量少， 操作便利。本文就結核性胸膜炎患者實施T-SPOT.TB試驗的意義進行研究， 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集2014年1月～2015年3月到本院進行檢查的結核性胸膜炎合并有胸腔積液患者25例作為觀察組， 其中男14例， 女11例；年齡21～69歲；平均年齡（32.2±12.5）歲，

25例患者中結核性胸膜炎合并單側胸腔積液患者13例， 合并雙側胸腔積液患者12例；診斷依據如下：有呼吸系統(tǒng)典型結核中毒癥狀、結合抗原陽性、結核菌素試驗（PPD試驗）強陽性、痰液抗酸桿菌陽性、結核抗體5項多項陽性者， 上述檢查陽性符合3個以上即可確診。另選擇同時期25 例肺炎滲出性胸膜炎且無原發(fā)結核患者作為對照組， 男13例， 女12例；年齡20～64歲；平均年齡（31.2±11.1）歲；對照組中2例胸腔積液與肺纖維化有關， 1例與類風濕性關節(jié)炎有關。所有研究對象及相關家屬均簽署知情同意書。

1. 2 方法 胸水樣本收集：采集胸腔積液 50 ml后2 h內常規(guī)分離淋巴細胞用于檢測。ELISPOT過程：在活化后預包被好抗體的平板中， 每孔加入100 μl， 細胞濃度為 2×105個細胞/孔。背景陰性對照孔中不加入任何刺激物。陽性對照每孔加入5 PHA， 終濃度 5 μg /ml。實驗孔加入抗原ESAT-6， 終濃度為5 μg / 孔。然后蓋上板蓋， 放入 37℃， 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)16～24 h。第2天洗板后， 加入檢測抗體孵育1 h， 洗板后再加入親和素孵育1 h。最后加入顯色劑顯色。待顯色洗板后， Elispot 斑點計數(shù)， 并記錄斑點的各種參數(shù)。

1. 3 結果判定 根據 T-SPOT.TB 試劑盒使用說明書， 如果陰性對照孔斑點形成細胞（SFC）<6， （ 檢測孔SFC-陰性對照孔 SFC） ×4 ≥24， 可判斷所測標本為陽性；如果陰性對照孔SFC≥6， 檢測孔 SFC為陰性對照孔2倍， 可判斷所測標本為陽性。

1. 4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據。計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

觀察組檢測結果陽性23 例， 陰性2例， 敏感性92.0%

（23/25）；對照組檢測結果陽性5 例， 陰性20例， 敏感性20.0%

（5/25）。觀察組敏感性大于對照組（P<0.05）。

3 討論

在胸腔積液中對抗酸桿菌、結核分枝桿菌培養(yǎng)陽性的檢查一直是作為結核胸腔積液診斷的金標準[4]， 但其診斷常常受到低陽性率和影像學特異性的限制。T-SPOT.TB試驗是由Lalvani等發(fā)明， 在2005年12月由FDA獲得最終批準， 目前已在美、英等國廣泛使用。其檢測原理主要包括：①結核分枝桿菌對比卡介苗菌株與較多環(huán)境下的分枝桿菌， 前者基因中特異性存在著RD1基因序列， 可以編碼生成兩類蛋白， 包括ESAT-6及CFP-10兩種蛋白均作為特異性抗原對T淋巴細胞產生刺激進而變?yōu)橹旅鬞淋巴細胞同時生成干擾素-γ（IFN-γ）；②T細胞斑點試驗主要是由酶聯(lián)免疫斑點技術發(fā)展而來， 其可以于單細胞水平針對細胞因子的分泌狀況進行檢測。主要通過事先進行設計的抗體捕獲細胞所分泌的特殊細胞因子通過酶聯(lián)斑點顯色表現(xiàn)出來[5]。單個顯色斑點即代表單個結核分枝桿菌致敏T淋巴細胞， 通過斑點計數(shù)以確定體內結核分枝桿菌效應T細胞的存在與否及存在數(shù)量。當前， 較多報告均對T-SPOT.TB試驗在活動性肺結核、肺外結核等中的敏感度、特異度給予肯定評價。

本次研究結果顯示， 觀察組檢測結果陽性23 例， 陰性2例， 敏感性92.0% （ 23/25） ；對照組檢測結果陽性5 例， 陰性 20 例， 敏感性20.0% （5/25）。但由于本實驗的病例數(shù)較少， 同時由于部分患者的結核性胸膜炎處于潛伏期， 會在一定程度上影響本研究的精準性。但是T-SPOT.TB試驗的高效性、便捷性、高質量等特性有效提高了結核性胸膜炎確診率， 減少了漏診和誤診， 且T-SPOT.TB特異性和實用性較高， 具有很大的臨床意義。

參考文獻

[1] 潘燕玉. ELISPOT和IP-10檢測用于結核病診斷的研究. 中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院， 2013 .

[2] 李敬萍. IL-27在結核性胸膜炎胸水中的表達及意義. 石河子大學， 2013.

[3] 繆海鋒. T-SPOT試驗在臨床結核診斷中的應用價值研究. 浙江大學， 2013.

[4] 鄧淵升. IFN-γ釋放檢測試驗的結核病診斷價值研究現(xiàn)狀. 重慶醫(yī)科大學， 2013.

[5] 周樂亮. T-SPOT.TB聯(lián)合細胞因子INF-γ、IL-10等檢測在結核病診斷中的應用. 中南大學， 2013.

[收稿日期：2016-01-14]