李志元，黃 燕，楊延婷，張 丹，吳煥淦，施 征，賈一凡，張翠紅，劉 婕，洪 玨，吳凌翔，馬曉芃＊＊

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)研究生院 上海 201203；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)針灸經(jīng)絡(luò)研究所 上海 200030）

隔藥灸對(duì)慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠下丘腦SP、5-HT及c-Fos的影響＊

李志元1，黃 燕1，楊延婷1，張 丹2，吳煥淦2，施 征2，賈一凡1，張翠紅2，劉 婕2，洪 玨2，吳凌翔2，馬曉芃2＊＊

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)研究生院 上海 201203；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)針灸經(jīng)絡(luò)研究所 上海 200030）

目的：本研究主要觀察隔藥灸對(duì)慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠下丘腦P物質(zhì)、5-羥色胺和c-Fos含量的影響，探討隔藥灸治療慢性炎性內(nèi)臟痛的鎮(zhèn)痛機(jī)制。方法：雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、隔藥灸組和假隔藥灸組。采用三硝基苯磺酸合50%乙醇灌腸的方法制備慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠模型。隔藥灸組選取雙側(cè)天樞穴、氣 海穴進(jìn)行隔藥餅灸治療；假隔藥灸組僅在穴位上放置藥餅和艾炷，不點(diǎn)燃艾 炷；模型組和正常組均不進(jìn)行治療，只做與隔藥灸組相同的固定。治療結(jié)束后，采用腹壁撤回反射評(píng)分（AWR）、機(jī)械性縮足反射閾值（MWT）、熱縮足潛伏期（TWL）觀察大鼠痛行為的變化，采用ELISA技術(shù)檢測(cè)各組大鼠下丘腦P物質(zhì)、5-羥色胺、c-Fos的含量。結(jié)果：與正常組比較，模型組大鼠AWR評(píng)分顯著升高（P＜0.05），MWT、TWL評(píng)分均顯著降低（P＜0.01）；與模型組、假隔藥灸組比較，隔藥灸組大鼠AWR評(píng)分降低（P＜0.05），MWT、TWL評(píng)分均顯著升高（P＜0.01）；假隔藥灸組與模型組比較，AWR、MWT、TWL評(píng)分差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與正常組比較，模型組大鼠下丘腦P物質(zhì)、5-羥色胺、c-Fos含量均顯著升高（P＜0.01）；與模型組、假隔藥灸組比較，隔藥灸組大鼠下丘腦P物質(zhì)、5-羥色胺、c-Fos含量均顯著降低（P＜0.01）；假隔藥灸組與模型組比較，下丘腦P物質(zhì)、5-羥色胺、c-Fos含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：隔藥灸能降低慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠下丘腦P物質(zhì)、5-羥色胺、c-Fos的含量，該作用可能是隔藥灸治療慢性炎性內(nèi)臟痛發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的重要中樞機(jī)制。

灸法 慢性內(nèi)臟痛 炎癥性腸病 P物質(zhì) 5-羥色胺 c-Fos

慢性炎性內(nèi)臟痛是臨床中常見的疼痛形式，其發(fā)病機(jī)制和病理基礎(chǔ)，目前尚無統(tǒng)一定論。有研究認(rèn)為，內(nèi)臟痛敏是其發(fā)生的最主要機(jī)制，而外周傷害性感受器和中樞神經(jīng)元的雙重敏化則是其產(chǎn)生的主要病理基礎(chǔ)[1]。中樞敏化（central sensitization）更是當(dāng)前慢性內(nèi)臟痛研究中的熱點(diǎn)，研究認(rèn)為中樞敏化是慢性內(nèi)臟痛產(chǎn)生痛覺過敏及持續(xù)慢性發(fā)展維持的關(guān)鍵因素[2]。而在中樞敏化形成過程中，眾多炎性疼痛遞質(zhì)如P物質(zhì)（Substance P，SP）、5-羥色胺（5-Hydroxy Tryptamine，5-HT）、c-Fos等都參與了敏化過程。隔藥灸用于改善炎癥性腸病、緩解炎性腹痛已被臨床證明有效[3,4]。課題組前期實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，隔藥灸法不僅對(duì)慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠的痛行為和痛情緒有明顯改善作用，且能有效降低大鼠血清SP、TNF-α、PGE2水平而發(fā)揮鎮(zhèn)痛效應(yīng)[5,6]。本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討隔藥灸對(duì)慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠下丘腦SP、5-HT、c-Fos含量的影響，初步探討隔藥灸對(duì)慢性炎性內(nèi)臟痛鎮(zhèn)痛作用的中樞機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Sprague-Dawley大鼠，雄性，體質(zhì)量150±20 g，購自上海西普爾-必 凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證號(hào)：SCXK（滬）2013-0016。飼養(yǎng)環(huán)境：8:00-20:00光照，20:00-8:00無光照，溫度20±1℃，濕度50.0%左右。常規(guī)適應(yīng)飼養(yǎng)1周后，檢測(cè)大鼠腹壁撤回反射評(píng)分（Abdominal Withdrawal Reflex，AWR）、機(jī)械性縮足反射閾值（Mechanical Withdrawal Threshold，MWT）、熱縮足潛伏期（Thermal Withdrawal Latency，TWL），各組基線無差異，正式納入實(shí)驗(yàn)。

1.2 主要試劑和 儀器

5% 2，4，6-三硝基苯磺酸（Trinitrobenzenesulfonic-acid，TNBS）（美國Sigma公司）；戊巴比妥鈉（美國Sigma公司）；Von Frey纖維毛（美國Stoelting公司）；BME2410A熱痛刺激儀（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所）；ELISA試劑盒（武漢基因美生物科技有限公司）；醫(yī)用血壓計(jì)（上海醫(yī)療器械股份有限公司）；醫(yī)用三通閥（菏澤圣美高分子塑料制品有限公司）；酶標(biāo)儀（Labsystems Multiskan MS）（美國Thermo Fisher公司）；洗板機(jī)（美國Thermo Fisher公司）；吉爾森P型移液器（荷蘭Gilson公司）。

1.3 模型制備

采用TNBS合50.0%乙醇灌腸的方法制備大鼠慢性炎性內(nèi)臟痛模型[7,8]。大鼠造模前禁食24 h，自由飲水。將無水乙醇加雙蒸水配成50.0%乙醇，然后將TNBS與50.0 %乙醇按照體積比2:1混合成TNBS灌腸液。稱重后以2.0%戊巴比妥鈉（30 mg·kg-1）行腹腔注射麻醉，抽取TNBS灌腸液，按3 mL·kg-1灌腸，大鼠體位為頭上尾下，灌腸時(shí)將灌腸針緩緩插入大鼠肛門6-8 cm，注入灌腸液，拔出灌腸針以后仍再將大鼠倒立1 min，以防灌腸液溢出，每7天重復(fù)灌腸1次，共4次。造模結(jié)束后測(cè)定各組大鼠AWR、MWT和TWL評(píng)分，并從每組大鼠中隨機(jī)抽取1只大鼠，進(jìn)行結(jié)腸組織病理學(xué)觀察（HE染色），確認(rèn)動(dòng)物模型是否制備成功。在確定模型制備成功的基礎(chǔ)上，開始干預(yù)治療。

圖1 大鼠隔藥灸示意圖

1.4 實(shí)驗(yàn)分組與干預(yù)

36只SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、隔藥灸組和假隔藥灸組，每組9只。除正常組外，其余3組均制備慢性炎性內(nèi)臟痛模型。造模結(jié)束后，在確定 模型制備成功的基礎(chǔ)上，分別給予干預(yù)處理：隔藥灸組選取天樞穴(雙側(cè))、氣海穴[8-10]，進(jìn)行隔藥灸治療，每次每穴各灸2壯（約10 min），每日1次，共灸7次；藥餅主藥為附子粉，灸前用黃酒調(diào)和，并用動(dòng)物專用模具制成藥餅；用模具將艾絨壓實(shí)制成錐形艾炷，艾炷重量為90 mg，置于藥餅上，點(diǎn)燃艾炷施灸（如圖1所示）。假隔藥灸組[11,12]僅做和隔藥灸組相同的固定，并將艾炷及藥餅置于大鼠腹部天樞穴（雙側(cè)）、氣海穴上，但不點(diǎn)燃艾炷，每次10 min，每日1次，共7次。正常組、模型組不進(jìn)行任何治療，只做與隔藥灸組相同的抓取和固定。

1.5 樣本采集

各組大鼠干預(yù)結(jié)束后，進(jìn)行內(nèi)臟和軀體疼痛感覺評(píng)估。之后各組大鼠麻醉，斷頭后，將標(biāo)本置于冰上，剪開頭部皮膚，充分暴露大腦，用止血鉗將左右顱骨剝離，將左右大腦取下，找到下丘腦后，凍存?zhèn)溆?。沿腹正中線剪開腹部皮膚，充分暴露降結(jié)腸和直腸部分，取肛門至盲腸段結(jié)腸（約8 cm）置于冰袋上，沿腸系膜縱軸剖開，用4℃冷生理鹽水沖洗干凈，置于10.0%福爾馬林溶液固定用于形態(tài)學(xué)觀察。

1.6 觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法

1.6.1 腹壁撤回反射評(píng)分

AWR標(biāo)準(zhǔn)參照Al-Chaer等[14]的方法，分別給以20、40、60、80 mmHg 4個(gè)不同壓力等級(jí)的結(jié)直腸擴(kuò)張刺激。每只大鼠測(cè)量3次，每次結(jié)直腸擴(kuò)張刺激20 s，間隔5 min后進(jìn)行下一次刺激，共3次，取3次平均值為最終評(píng)分值。

1.6.2 機(jī)械性縮足反射閾值測(cè)定[15]

用von Frey纖維絲（折力梯度為2.0、4.0、6.0、8.0、15.0 g）垂直刺激大鼠后肢足底中部，持續(xù)時(shí)間不大于4 s，大鼠出現(xiàn)抬足或舔足行為視為陽性反應(yīng)，否則為陰性反應(yīng)。測(cè)定首先都從2.0 g開始，當(dāng)該力度的刺激不能引起陽性反應(yīng)，則給以相鄰大一級(jí)力度的刺激，如此連續(xù)進(jìn)行，直至出現(xiàn)第一次陰性 和陽性反應(yīng)的騎跨。每個(gè)折力纖維絲均連續(xù)測(cè)定5次，每次刺激間隔30 s。MWT最大力度為15.0 g，大于此值記為15.0 g。

1.6.3 熱輻射法測(cè)定大鼠熱縮足潛伏期

將有機(jī)玻璃箱置于3 mm厚的玻璃板上，按Hargreaves法[16]用熱痛刺激儀照射大鼠足底。照射開始至大鼠出現(xiàn)抬腿回避時(shí)為TWL。自動(dòng)切斷時(shí)間為20.1 s，以防止組織損傷。熱刺激強(qiáng)度在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中維持一致。每只動(dòng)物測(cè)定5次，每次間隔3 min，去最大、最小值，取3次平均值為大鼠TWL值。

1.6.4 結(jié)腸組織病理學(xué)觀察

采用蘇木素-伊紅（Hematoxylin-Eosin，HE）進(jìn)行組織切片染色，光鏡下觀察各組大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)變化。

1.6.5 大鼠下丘腦SP、5-HT和c-Fos檢測(cè)

采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）方法測(cè)定下丘腦SP、5-HT和c-Fos的含量。

1.7 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。對(duì)所有計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)。當(dāng)計(jì)量資料符合正態(tài)分布時(shí)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示；當(dāng)計(jì)量資料為偏態(tài)分布時(shí)采用Median（min，max）來表示。若資料服從正態(tài)分布，組間差異采用One-way ANOVA，方差齊采用LSD-t檢驗(yàn)比較組間差異性；方差不齊時(shí)用Games-Howell比較組間差異性。若資料非正態(tài)分布，采用秩和檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 隔藥灸對(duì)慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠內(nèi)臟高敏與痛行為的影響

2.1.1 各組大鼠AWR評(píng)分

與正常組比較，模型組大鼠AWR評(píng)分在各個(gè)擴(kuò)張壓力下均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，隔藥灸組大鼠AWR評(píng)分在各個(gè)擴(kuò)張壓力下均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；假隔藥灸組大鼠AWR評(píng)分在各個(gè)擴(kuò)張壓力下均無明顯變化（P＞0.05）。與假隔藥灸組比較，隔藥灸組大鼠在隔藥灸治療后AWR評(píng)分明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖4。

圖4 各組大鼠AWR評(píng)分比較

2.1.2 各組大鼠MWT和TWL評(píng)分

與正常組比較，模型組大鼠MWT、TWL評(píng)分均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，隔藥灸組大鼠MWT、TWL評(píng)分均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；假隔藥灸組大鼠MWT、TWL評(píng)分均無明顯變化（P＞0.05）。與假隔藥灸組比較，隔藥灸組大鼠在隔藥灸治療后MWT、TWL評(píng)分明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。詳見圖5、圖6。

圖5 各組大鼠MWT比較

2.2 隔藥灸對(duì)慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠結(jié)腸形態(tài)學(xué)的影響

正常組大鼠結(jié)腸上皮組織結(jié)構(gòu)清晰、完整，黏膜連續(xù)，腺體排列整齊，未見充血、水腫及潰瘍等。模型組大鼠結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)模糊不清，大部分黏膜層缺失，伴有裂隙樣改變，腺體破壞，黏膜及黏膜下層可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),以中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主，淋巴細(xì)胞增生，伴明顯水腫，肌層結(jié)構(gòu)不顯。隔藥灸組大鼠結(jié)腸黏膜上皮結(jié)構(gòu)尚完整，腺體排列尚規(guī)則，部分輕度增生，黏膜及黏膜下層仍有較多炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜下層結(jié)締組織中度水腫。假隔藥灸組大鼠結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)模糊不清，部分黏膜層缺失，腺體破壞，伴明顯水腫，黏膜及黏膜下層可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。

2.3 隔藥灸對(duì)慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠下丘腦SP、5-HT、c-Fos含量的影響

2.3.1 隔藥灸對(duì)慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠下丘腦SP含量的影響

如表1所示，與正常組比較，模型組大鼠下丘腦SP含量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，隔藥灸組大鼠SP含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；假隔藥灸組大鼠SP含量無明顯變化（P＞0.05）。與假隔藥灸組比較，隔藥灸組大鼠SP含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

2.3.2 隔藥灸對(duì)慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠下丘腦5-HT含量的影響

如表2所示，與正常組比較，模型組大鼠下丘腦5-HT含量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，隔藥灸組大鼠5-HT含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；假隔藥灸組大鼠5-HT含量無明顯變化（P＞0.05）。與假隔藥灸組比較，隔藥灸組大鼠5-HT含量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

2.3.3 隔藥灸對(duì)慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠下丘腦c-Fos含量的影響

如表3所示，與正常組比較，模型組大鼠下丘腦c-Fos含量顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，隔藥灸組大鼠c-Fos含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；假隔藥灸組大鼠c-Fos含量無明顯變化（P＞0.05）。與假隔藥灸組比較，隔藥灸組大鼠c-Fos含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

圖6 各組大鼠TWL比較

表1 各組大鼠下丘腦SP含量比較/ng·L-1

表1 各組大鼠下丘腦SP含量比較/ng·L-1

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01；與假隔藥灸組比較，△△P＜0.01。

表2 各組大鼠下丘腦5-HT含量比較/ng·mL-1

表2 各組大鼠下丘腦5-HT含量比較/ng·mL-1

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01；與假隔藥灸組比較，△△P＜0.01。

表3 各組大鼠下丘腦c-Fos含量比較/ng·mL-1

表3 各組大鼠下丘腦c-Fos含量比較/ng·mL-1

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01；與假隔藥灸組比較，△△P＜0.01。

3 討論

慢性內(nèi)臟痛是臨床上極為普遍的癥狀，許多疾病如炎癥性腸病、腸易激綜合征等都存在典型的慢性內(nèi)臟痛。炎癥性腸?。↖rritable Bowel Disease，IBD）是免疫介導(dǎo)的一組特發(fā)性疾病，包括潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative Colitis，UC）和克羅恩病。臨床主要癥狀包括腹痛、腹瀉、粘液膿血便，病程長(zhǎng)，反復(fù)發(fā)作，遷延難愈[17]。炎癥性腸病普遍存在的腹痛等癥狀嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量，常常作為患者就診的主要原因之一[18]。對(duì)于該病的治療，美沙拉嗪作為一線藥物，用于疾病早中期，但因服藥時(shí)間長(zhǎng)，患者難以堅(jiān)持，依從性差，病情易反復(fù)[19,20]。

臨床研究表明，艾灸能有效緩解炎癥性腸病慢性內(nèi)臟痛[3,4]。但目前有關(guān)艾灸鎮(zhèn)痛機(jī)制的研究多集中在功能性腸道疾病，如腸易激綜合征[21,22]；而在炎癥性腸病慢性內(nèi)臟痛領(lǐng)域則研究甚少。因此，本研究在前期工作的基礎(chǔ)上[5]，采用三硝基苯磺酸合50%乙醇灌腸的方法制備大鼠炎癥性腸病慢性內(nèi)臟痛模型，采用隔藥灸天樞穴、氣海穴治療，觀察隔藥灸對(duì)慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠下丘腦SP、5-HT、c-Fos含量的影響，進(jìn)一步探討艾灸治療炎癥性腸病慢性內(nèi)臟痛鎮(zhèn)痛作用的中樞機(jī)制。

下丘腦是神經(jīng)內(nèi)分泌高級(jí)整合中樞，對(duì)于實(shí)現(xiàn)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定十分重要[23]。下丘腦內(nèi)含有多種神經(jīng)遞質(zhì)，其中包括SP、5-HT、c-Fos等。SP是一種由11個(gè)氨基酸組成的多肽，屬速激肽家族成員之一，主要存在于細(xì)神經(jīng)纖維的末梢部位，并廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、脊髓背根和腸道神經(jīng)系統(tǒng)中[24]。其在傷害性刺激和疼痛調(diào)制中具有重要作用。許多實(shí)驗(yàn)都已證明，中樞或外周系統(tǒng)中的SP在內(nèi)臟痛敏鎮(zhèn)痛中存在重要作用。有研究提示下丘腦、脊髓SP含量增加與疼痛效應(yīng)的產(chǎn)生密切相關(guān)[25]，中樞不同水平的SP在針刺鎮(zhèn)痛中起著重要作用[26]。5-HT是一種廣泛存在于腦腸軸中的重要神經(jīng)遞質(zhì)，參與胃腸運(yùn)動(dòng)、痛覺感受、攝食、睡眠、情緒、認(rèn)知及內(nèi)分泌生殖等生理功能活動(dòng)的調(diào)控[27]，是腦干下行抑制系統(tǒng)參與鎮(zhèn)痛作用的主要神經(jīng)活性物質(zhì)[28]。研究發(fā)現(xiàn)，5-HT合成、釋放等環(huán)節(jié)異常均可導(dǎo)致胃腸道內(nèi)臟痛敏的產(chǎn)生[29]。田志穎等[30]檢測(cè)42例UC患者腸黏膜中5-HT的含量，發(fā)現(xiàn)UC患者腸黏膜中5-HT的含量明顯升高，提示5-HT在UC發(fā)病中起重要作用。c-Fos基因是即刻早期基因家族的一員，在正常生理狀態(tài)下大鼠腦中的c-Fos基因有廣泛而恒定的表達(dá)，出現(xiàn)于許多核團(tuán)[31]。但在多種傷害性刺激等不良應(yīng)激條件下，c-Fos基因的表達(dá)顯著上升，采用電針干預(yù)后，c-Fos基因的表達(dá)可明顯下降。如秦明等[32]觀察電針“足三里”穴對(duì)內(nèi)臟痛大鼠延髓內(nèi)臟帶內(nèi)c-Fos和GFAP表達(dá)的影響發(fā)現(xiàn)，電針干預(yù)后內(nèi)臟痛大鼠延髓內(nèi)臟帶內(nèi)c-Fos含量較模型組大鼠明顯下降。

綜上所述，慢性炎性內(nèi)臟痛的形成和發(fā)展可能與SP、5-HT、c-Fos等物質(zhì)關(guān)系密切，本研究采用ELISA技術(shù)檢測(cè)大鼠下丘腦中SP、5-HT、c-Fos的含量，并結(jié)合痛行為學(xué)觀察慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠疼痛表現(xiàn)和隔藥灸的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三硝基苯磺酸合50%乙醇灌腸誘導(dǎo)的慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠的痛行為明顯，下丘腦SP、5-HT、c-Fos含量也明顯升高，提示慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠下丘腦SP、5-HT、c-Fos含量異常升高，可能與其痛行為的發(fā)生密切相關(guān)。采用隔藥灸治療后，慢性炎性內(nèi)臟痛大鼠的痛行為改善，痛閾提高，下丘腦SP、5-HT、c-Fos的含量也明顯降低，提示隔藥灸可能是通過下調(diào)下丘腦中SP、5-HT、c-Fos合成和釋放發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。隔藥灸調(diào)節(jié)下丘腦SP、5-HT、c-Fos在發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用過程中是獨(dú)立起效或是協(xié)同作用尚有待于今后進(jìn)一步研究。

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Impacts of Herb-Partitioned Moxibustion on Hypothalamic SP, 5-HT and c-Fos in Rats with Chronic Inflammatory Visceral Pain

Li Zhiyuan1, Huang Yan1, Yang Yanting1, Zhang Dan2, Wu Huangan2, Shi Zheng2, Jia Yifan1, Zhang Cuihong2, Liu Jie2, Hong Jue2, Wu Lingxiang2, Ma Xiaopeng2
(1. Graduate School Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China; 2. Research Institute of Acupuncture and Meridian, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200030, China)

This study aimed to observe the impacts of herb-partitioned moxibustion (HPM) on substance P (SP), 5-hydroxy tryptamine (5-HT), and c-fos in the hypothalamus of chronic inflammatory visceral pain (CIVP) rats; and to discuss the analgesic mechanisms of HPM. Thirty-six Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into the normal group, the model group, the HPM group and the sham herb-partitioned moxibustion (SHPM)group. Rats of model, HPM and SHPM groups were established for CIVP models with enema of trinitrobenzenesulfonic-acid (TNBS) and 50.0% ethanol. The HPM group was treated with moxibustion at CV6-Qihaiacupoint and bilateral ST25-Tianshuacupoint, which was practiced by placing a lighted moxa cone with a herbal cake being partitioned under each cone. For the SHPM group, herbal cakes and moxa cones were only placed on the same acupoints without ignition. Rats of the normal group and the model group were given no treatment, but only were fixed in the same way as the HPM group. After the treatment, behavioral indexes of abdominal withdrawal reflex (AWR), mechanical withdrawal threshold (MWT) and thermal withdrawal latency (TWL) were detected for both visceral and physical pain. The contents of SP, 5-HT and c-Fos in hypothalamus were quantified by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). As a result, compared with the normal group, the AWR score increased (P＜ 0.05), while MWT and TWL scores decreased significantly in the model group (P＜ 0.01,P＜0.05, respectively). Compared with the model group and the SHPM group, the AWR score decreased (P＜ 0.05), while the MWT and TWL scores increased significantly in the HPM group (P＜ 0.01 orP＜ 0.05). There were no significant differences between the SHPM group and the model group (P＞ 0.05). Hypothalamic SP, 5-HT and c-Fos were higher in the model group than those in the normal group (P＜ 0.01). Compared with the model group and SHPM group, hypothalamic SP, 5-HT and c-Fos reduced significantly in the HPM group (P＜ 0.01). There were no significant differences between the SHPM group and the model group (P＞ 0.05). It was concluded that HPM down-regulated the contents of SP, 5-HT and c-Fos in the hypothalamus of CIVP rats, which may be an important analgesic mechanism of HPM in the treatment of CIVP.

Moxibustion, chronic visceral pain, inflammatory bowel disease, substance P, 5-hydroxy tryptamine, c-Fos

10.11842/wst.2016.03.011

R245

A

（責(zé)任編輯：朱黎婷 張志華，責(zé)任譯審：朱黎婷）

2016-02-14

修回日期：2016-03-09

＊ 國家自然科學(xué)基金委面上項(xiàng)目（81273843）：艾灸對(duì)內(nèi)臟痛鎮(zhèn)痛作用的MAPKs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：馬曉芃；國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（2015CB554501）：艾灸效應(yīng)的啟動(dòng)機(jī)制及其內(nèi)源性調(diào)節(jié)作用的機(jī)理研究，負(fù)責(zé)人：吳煥淦；上海市衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)課題（20144Y0153）：艾灸與針刺治療炎癥性腸病內(nèi)臟痛的效應(yīng)及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：張丹。

＊＊ 通訊作者：馬曉芃，研究員，博士生導(dǎo)師，主要研究方向：針灸治療免疫相關(guān)性疾病的基礎(chǔ)與臨床研究。