王曉梅，黃 艷，王圓圓，劉雅楠，祁 琴，金 鳳，華雪桂，吳煥淦＊＊

（1.上海市針灸經(jīng)絡(luò)研究所 上海 200030；2.上海中醫(yī)藥大學 上海 201203；3.復(fù)旦大學附屬腫瘤醫(yī)院 上海 200032）

艾灸對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸TLR4和TNF-α蛋白及其mRNA表達影響的研究＊

王曉梅1，黃 艷1，王圓圓2，劉雅楠2，祁 琴2，金 鳳3，華雪桂1，吳煥淦1＊＊

（1.上海市針灸經(jīng)絡(luò)研究所 上海 200030；2.上海中醫(yī)藥大學 上海 201203；3.復(fù)旦大學附屬腫瘤醫(yī)院 上海 200032）

目的：觀察艾灸對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸Toll樣受體4（TLR4）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）蛋白及其mRNA表達的影響，進一步探討艾灸治療潰瘍性結(jié)腸炎的作用機制。方法：將40只SD大鼠隨機分為正常組、模型組、隔藥灸組和柳氮磺胺吡啶（Sulfasalazine，SASP）組。采用隔藥灸天樞和氣海穴及SASP灌胃進行干預(yù)。干預(yù)結(jié)束后，應(yīng)用HE染色光鏡下觀察各組大鼠結(jié)腸病理學變化，分別采用Western blot法和FQ-PCR法檢測大鼠結(jié)腸TLR4和TNF-α蛋白及其mRNA表達。結(jié)果：造模大鼠存在結(jié)腸組織病理學損傷，隔藥灸組和SASP組大鼠結(jié)腸病理學與模型組相比均有一定的改善；與正常組比較，模型組大鼠結(jié)腸TLR4和TNF-α蛋白及其mRNA表達均顯著增加（P＜0.05）；經(jīng)隔藥灸和SASP干預(yù)后，大鼠結(jié)腸TLR4和TNF-α蛋白及其mRNA表達均顯著降低（P＜0.05）。結(jié)論：TLR4、TNF-α可能在潰瘍性結(jié)腸炎中發(fā)揮炎癥損傷作用，隔藥灸能下調(diào)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸TLR4和TNF-α的表達，提示其機制可能是通過下調(diào) TLR4和TNF-α表達介導(dǎo)的級聯(lián)反應(yīng)達到艾灸治療潰瘍性結(jié)腸炎的目的。

艾灸 潰瘍性結(jié)腸炎 Toll樣受體4 腫瘤壞死因子α

潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative Colitis，UC）和克羅恩?。–rohn’s Disease，CD）統(tǒng)稱炎癥性腸病，是一種病因不明的慢性直腸和結(jié)腸炎癥性疾病，臨床以腹痛、腹瀉、黏液或膿血便為特征，病變主要限于黏膜層和黏膜下層。UC在歐美發(fā)達國家發(fā)病率較高，近期的研究表明，西歐IBD的發(fā)病率是東歐的2倍[1]，美國婦女UC的發(fā)病率為10/10萬[2]，美國兒童UC的發(fā)病率也不斷升高[3]，匈牙利人UC的發(fā)病率為11.9/10萬[4]。近年來，澳大利亞UC發(fā)病率為23.67/10萬，亞洲國家UC發(fā)病率逐年增加，中國UC的發(fā)病率約為3.44/10萬[5]。

Toll樣受體-4（Toll-like Receptors-4，TLRs-4）是固有免疫系統(tǒng)中的細胞跨膜受體及病原模式識別受體之一，它主要通過識別病原相關(guān)分子模式來啟動免疫反應(yīng)。已發(fā)現(xiàn)TLRs在炎癥、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞凋亡、腫瘤等發(fā)生過程中扮演重要角色[6]，在腸黏膜免疫中發(fā)揮重要作用[7]。TLRs家族包括10個成員，其中TLR4在IBD發(fā)病中發(fā)揮重要角色，在CD和UC結(jié)腸組織中均有表達[8-10]，TLR4可通過核因子κB信號通路誘導(dǎo)腫瘤壞死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α）等炎癥介質(zhì)的表達[11]。

前期研究表明，隔藥灸對UC患者有良好的療效，不僅有效改善UC患者結(jié)腸異常的免疫反應(yīng)[12]，下調(diào)UC患者結(jié)腸黏膜IL-8和ICAM-1蛋白和基因的表達[13]，還可以調(diào)節(jié)UC模型大鼠結(jié)腸TLR2[14]及TLRs信號傳導(dǎo)通路下游因子KGF、TNF-α、IL-12和IL-6表達[15，16]。本研究采用免疫學方法并加局部刺激制備UC大鼠模型[17]，并利用Western blot法及FQ-PCR法，觀察UC大鼠結(jié)腸組織的TLR4和TNF-α蛋白及其mRNA表達水平，探討TLRs在UC發(fā)病過程中的作用，揭示艾灸治療UC的關(guān)鍵信號分子和作用機制。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

清潔級Sprauge-Dawley（SD）雄性大鼠40只，體質(zhì)量183±10 g，由復(fù)旦大學醫(yī)學院動物實驗中心提供。實驗動物在實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)3天，飲食、飲水、精神狀況正常者納入實驗。

1.2 分組與模型制備

將40只大鼠隨機分正常組、模型組、隔藥灸組和柳氮磺胺吡啶（Sulfasalazine，SASP）組，每組10只。

除正常組外其余3組采用免疫學方法合并局部刺激制備UC大鼠模型[17]。將UC患者術(shù)后新鮮結(jié)腸黏膜，加適量生理鹽水制成黏膜勻漿，冷凍24 h溶解后，以3 000 r·min-1離心30 min，取上清液提純測定蛋白質(zhì)含量，并與完全弗氏佐劑混勻配成乳劑。造模大鼠首次于足趾內(nèi)注射抗原液0.3 mL（蛋白含量6 mg），并分別于第10、17、24、31天，于足趾、背部、腹股溝、腹腔內(nèi)注射抗原0.3 mL（蛋白含量6 mg，末次注射不加完全弗氏佐劑）；至第38天，造模大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，3%甲醛2 mL灌腸，留置1 h，用生理鹽水灌腸沖洗，再用含24 mg·mL-1蛋白的抗原液灌腸，留置2 h，用生理鹽水再灌腸沖洗。正常組SD大鼠注射生理鹽水，處理步驟與造模組相同。

造模結(jié)束后，分別取正常組2只和造模大鼠組1只進行模型鑒定，組織病理學結(jié)果提示造模成功。治療過程中隔藥灸組和SASP組大鼠各死亡1只，模型組大鼠死亡2只。

1.3 治療

正常組（n=10）：同步飼養(yǎng)，無任何干預(yù)，只做與各干預(yù)組相同的抓取固定。

模型組（n=10）：造模后無其它干預(yù)，只做與各干預(yù)組相同的抓取固定。

隔藥灸組（n=10）：造模結(jié)束即日起開始干預(yù)，取天樞（雙）、氣海穴，將附子、肉桂、丹參等藥研末（上海中醫(yī)藥大學附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥劑科提供）過100目篩，加黃酒拌成厚糊狀，用模具壓制而成直徑0.5 cm，厚0.3 cm的藥餅，置于所選穴位上，選用精制艾絨（南陽漢醫(yī)艾絨廠）制約90 mg 重艾炷，置于藥餅上，點燃施灸，每次每穴灸2壯，每日1次，共14次。

SASP組（n=10）：柳氮磺胺吡啶腸溶片（上海三維制藥有限公司，批號：200807C30）溶液灌胃。每日投藥量按成人（體重70 kg）與大鼠（體重200 g）1:0.018的比例（據(jù)《藥理實驗方法學》）配制SASP溶液，每日2次，共14次。

1.4 標本采集

治療結(jié)束后，大鼠24 h禁食、不禁水，按照50 mg·kg-1劑量2%戊巴比妥鈉腹腔注射，待大鼠麻醉后，剖腹取大鼠遠端結(jié)腸6 cm左右。沿腸系膜縱行剖開，用預(yù)冷的4℃生理鹽水沖洗后，將截取的結(jié)腸分為兩段，其中一段液氮中保存，待測；另一部分以10%的中性甲醛溶液固定，待測。

1.5 免疫印跡法檢測大鼠結(jié)腸組織的TLR4和TNF-α

將大鼠結(jié)腸組織從-80℃冰箱中取出，置入勻漿器中，把組織剪切成細小的碎片；按照每20 mg組織加入100 μL裂解液的比例加入RIPA裂解液；冰浴勻漿，充分裂解后，12 000 rpm離心5 min，取上清；取部分上清蛋白用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度；取蛋白提取液40 μL加至樣品孔中，留一孔加10 μL預(yù)染的Marker，接通電源，先用70 V恒壓電泳，約30 min，后改用90 V恒壓電泳1.5 h，當指示劑到達距凝膠下端約0.5 cm處時關(guān)閉電源，取出膠板；將膠浸泡于轉(zhuǎn)移緩沖液中平衡15 min，按黑面（負極）→海綿→濾紙→膠→PVDF膜→濾紙→海綿→紅面（正極）的順序制備轉(zhuǎn)膜“三明治”，每層鋪好后先趕走氣泡再鋪另一層。在轉(zhuǎn)移緩沖液中制備三明治可避免氣泡的產(chǎn)生；接上正負極，按膜向正極的方向?qū)⑥D(zhuǎn)移盒放入電轉(zhuǎn)儀中，加入轉(zhuǎn)膜緩沖液；將電轉(zhuǎn)儀置于冰水中，200 mA恒流轉(zhuǎn)膜30 min、90 min；轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，快速取出PVDF膜，放入5%BSA室溫封閉2 h；取出膜，于搖床上用TBST洗膜5 min×3次；孵育袋中加入封閉液稀釋的TLR4 （weiao 1:1 000）、TNF-a （weiao 1:500 ）和GAPDH（weiao 1:2 000），4℃孵育過夜；TBST洗膜5 min×3次，辣根過氧化物酶（HRP）標記的羊抗兔二抗（Jackson 1:2 000）和辣根過氧化物酶（HRP）標記的羊抗小鼠二抗（Jackson 1:2 000）室溫孵育2 h；TBST洗膜15 min×5次。膜于化學發(fā)光檢測試劑（試劑A:試劑B=1:1）反應(yīng)2 min，取出膜，甩去多余的液體，用保鮮膜包好PVDF膜，暗室中用X膠片感光、顯影、定影。

1.6 大鼠結(jié)腸組織TLR3、TLR4 mRNA的FQPCR檢測

從結(jié)腸組織抽提總RNA，按FQ-PCR試劑盒（QIAGEN公司，批號：QIAGEN204054）說明書進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA，按ABI ViiA7 PCR儀（美國ABI 公司）的說明書將cDNA 進行PCR擴增。RNA提?。涸诰G豆大小的組織中加1 mL Trizol，用Tissue Ruptor勻漿器1 min，室溫放置10 min；加200 μL氯仿，充分混勻，15 000轉(zhuǎn)離心5-7 min；取上清，至1.5 mL Eppendorf管加600 μL氯仿，混勻，15 000轉(zhuǎn)離心5 min；取上清，至1.5 mL Eppendorf管加500 μL異丙醇，混勻，15 000轉(zhuǎn)離心10 min；棄上清，用75%乙醇1 mL沖洗，高速離心5 min；棄上清，RNA沉淀于空氣中干燥（2-3 min）；將干燥后的RNA溶解于RNA-free Water中；取1 μL總RNA測OD260，并定量。逆轉(zhuǎn)錄：在1.5 mL離心管中依次加入下列反應(yīng)物（體積為12.5 μL）：DEPC水（8-x）μL，RNA酶抑制劑（50 U·μL-1）0.5 μL，隨機引物（50 pM·μL-1）2 μL，RNA x μL（2 μg）。65℃恒溫處理5 min，室溫放置10 min，高速（高于5 000 g）離心5 s；依次在1.5 mL離心管加入下列反應(yīng)物（加入之后總體積為20 μL）：RNA酶抑制劑（50 U·μL-1）0.5 μL，5× buffer（invitrogen）4 μL，dNTP MIX（10 mM/each）2 μL，DTT 2 μL，AMV（200 U·μL-1）1 μL，水浴40℃下反應(yīng)1 h；90℃處理5-10 min；冰浴5 min；高速離心5 s。

熒光定量PCR擴增：序列與引物設(shè)計的序列參照Gene Bank 數(shù)據(jù)庫中各目的基因的序列（見表1），引物由ABI公司的Primer Express Software v2.0設(shè)計，由華大基因公司合成。PCR反應(yīng)體系（16 μL）：H2O 5 μL，2×SYBGEEN PCR mix 8 μL，Primer（10 pM·μL-1）1 μL，Primer（10 pM·μL-1）1 μL，cDNA 1 μL。反應(yīng)條件：95℃ 2 min，94℃ 10 s，60℃ 10 s，72℃ 40 s，循環(huán)40次。

1.7 統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)采用SPSS for Windows 18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理。計量資料采用均數(shù)±標準差表示，對數(shù)據(jù)作正態(tài)性檢驗。數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，采用One-way ANOVA，方差齊同時采用LSD比較組間差異性，方差不齊時用Games-Howell比較組間差異性，P＜0.05作為差異有統(tǒng)計學意義；數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，采用Mann-Whitney檢驗非參數(shù)檢驗。

2 結(jié)果

2.1 大鼠結(jié)腸組織病理學觀察

在光學顯微鏡下，正常組結(jié)腸黏膜結(jié)構(gòu)清晰，腸腺排列整齊、規(guī)則，結(jié)腸黏膜上皮完整，固有層可見散在淋巴細胞，無明顯的炎性細胞浸潤。模型組結(jié)腸黏膜可見黏膜缺損，黏膜絨毛破壞或缺失，黏膜及黏膜下層有大量單核細胞、巨噬細胞浸潤，局部有充血水腫、腺體破壞或消失、潰瘍形成。隔藥灸組和SASP組結(jié)腸黏膜上皮及腸腺結(jié)構(gòu)較為清楚，排列較模型組規(guī)則，潰瘍已基本愈合，表面由新生上皮細胞所覆蓋，部分仍有黏膜下水腫，炎性細胞浸潤（見圖1）。由此可知，與模型組比較，隔藥灸組和SASP組大鼠結(jié)腸組織病理學損傷均有一定的改善。

2.2 大鼠結(jié)腸黏膜TLR4和TNF-α蛋白表達

模型組UC大鼠結(jié)腸黏膜TLR4和TNF-α的相對表達量明顯高于正常組，隔藥灸組與SASP組模型大鼠結(jié)腸黏膜TLR4和TNF-α的相對表達量較模型組明顯下調(diào)（見表2、圖2）。

表1 引物探針序列

圖1 各組在光學顯微鏡下的組織

表2 大鼠結(jié)腸黏膜TLR4和TNF-α的相對表達量

圖2 TLR4和TNF-α的相對表達情況

2.3 大鼠結(jié)腸黏膜TLR4 mRNA表達

與正常組相比，模型組大鼠結(jié)腸黏膜的TLR4 mRNA的表達明顯升高（P＜0.01）；隔藥餅灸組和SASP組大鼠結(jié)腸黏膜的TLR4 mRNA的表達明顯低于模型組（P＜0.01）；隔藥餅灸組結(jié)腸黏膜TLR4 mRNA表達與SASP組相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表3。

2.4 大鼠結(jié)腸黏膜TNF-α mRNA表達

與正常組相比，模型組大鼠結(jié)腸黏膜的TNF-αmRNA的表達明顯升高（P＜0.05）；隔藥餅灸組和SASP組大鼠結(jié)腸黏膜的TNF-αmRNA的表達明顯低于模型組（P＜0.05）；隔藥餅灸組結(jié)腸黏膜TNF-αmRNA表達與SASP組相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表4。

3 討論

TLRs是與UC關(guān)系密切的模式識別受體。腸道粘膜上皮細胞、內(nèi)分泌細胞、固有層的巨噬細胞、樹突狀細胞、纖維母細胞，以及微血管內(nèi)皮細胞均表達該受體，在腸粘膜免疫中發(fā)揮重要作用[18-20]。目前的研究認為，TLRs是在UC發(fā)生中扮演重要角色[21]，內(nèi)毒素（Lipopolysaccharide，LPS）介導(dǎo)的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在UC的炎癥反應(yīng)中起了至關(guān)重要的作用，TLR4是第一個被發(fā)現(xiàn)存在于人細胞表面與LPS跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)密切相關(guān)的TLR，是LPS跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵受體之一[22，23]。有關(guān)研究顯示，UC患者的TLR4表達上調(diào)[24]。本研究發(fā)現(xiàn)，UC大鼠結(jié)腸組織TLR4的蛋白和mRNA表達明顯上調(diào)，艾灸干預(yù)后TLR4的蛋白和mRNA表達均下調(diào)，這表明艾灸可能通過調(diào)節(jié)TLR4的表達從而改善UC腸道炎癥反應(yīng)。

表3 大鼠結(jié)腸黏膜TLR4 mRNA表達的影響

表3 大鼠結(jié)腸黏膜TLR4 mRNA表達的影響

注：與正常組相比，*P＜0.01，與模型組相比，＃P＜0.01。

表4 大鼠結(jié)腸黏膜TNF-α mRNA表達的影響

表4 大鼠結(jié)腸黏膜TNF-α mRNA表達的影響

注：與正常組相比，*P＜0.05，與模型組相比，＃P＜0.05。

TNF-α是促炎癥細胞因子，是機體炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答的重要調(diào)節(jié)因子[25]。TNF-α通過誘導(dǎo)一氧化氮合酶（inducible Nitric Oxide Synthase，iNOS），使NO增加，引起炎癥，并通過刺激單核細胞和巨噬細胞合成和釋放IL-1和IL-8等使炎癥進一步加重，在UC的發(fā)病中發(fā)揮重要作用[26]。本研究發(fā)現(xiàn)，UC大鼠結(jié)腸組織TNF-α的蛋白和mRNA表達明顯上調(diào)，這表明TNF-α參與了UC腸道炎癥反應(yīng)；艾灸干預(yù)后TNF-α的蛋白和mRNA表達均下調(diào)，這表明艾灸可能通過調(diào)節(jié)TNF-α的表達抑制UC腸道炎癥反應(yīng)。

根據(jù)其主癥，UC歸屬于中醫(yī)學的“腸澼”、“下利”、“久泄”、“久痢”等病癥范疇，其病機是脾胃虛弱為本，濕熱留滯為標。本研究采用隔藥灸療法進行干預(yù)治療，藥餅采用附子、肉桂、丹參、紅花、木香、黃連等配制而成，方中附子和肉桂均可溫陽散寒除濕，木香行氣調(diào)中止痛，三藥共伍可溫陽健脾，理氣和中以治其本；佐以黃連、丹參、紅花等藥而奏清熱利濕、理氣化瘀之效。因此，針灸治療UC不僅可以改善其臨床癥狀和病理特征，還可促進其炎性反應(yīng)吸收和潰瘍修復(fù)，保護腸黏膜，促進腸黏膜的修復(fù)[27，28]，并能明顯改善UC模型大鼠腸道有益菌群的含量[16]以及菌群的多樣性[29]，對UC大鼠腸道微生態(tài)的保護作用。前期研究也發(fā)現(xiàn)，艾灸能有效地抑制UC模型大鼠TLR2信號通路中的上下游信號分子的異常表達，調(diào)節(jié)結(jié)腸黏膜局部過激的免疫反應(yīng)，促進結(jié)腸黏膜損傷的修復(fù)[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，UC模型大鼠結(jié)腸黏膜TLR4和TNF-α蛋白及mRNA表達均顯著增加，推測UC可通過TLR4信號通路產(chǎn)生炎性反應(yīng)；隔藥灸和SASP均能下調(diào)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸TLR4和TNF-α的蛋白及其mRNA表達。因此，本研究認為對TLR4和TNF-α表達的調(diào)節(jié)可能是隔藥灸治療UC的重要機制之一。

總之，TLRs及其信號通路不僅參與了UC的發(fā)病過程，還在介導(dǎo)UC腸道黏膜免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，而艾灸不僅能改善UC的結(jié)腸組織病理學改變，還通過調(diào)節(jié)TLRs受體及其介導(dǎo)的信號通路發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，促進UC結(jié)腸黏膜損傷的修復(fù)。

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Effect of Herb-partition Moxibustion on Protein and mRNA Expressions of TLR4 and TNF-α in Rats with Ulcerative Colitis

Wang Xiaomei1, Huang Yan1, Wang Yuanyuan2, Liu Yanan2, Qi Qin2, Jin Feng3, Hua Xuegui1, Wu Huangan1
(1. Shanghai Research Institute of Acupuncture-Moxibustion and Meridian, Shanghai 200030, China; 2. Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China; 3. Fudan University Shanghai Cancer Center, Shanghai 200032, China)

This study was aimed to observe the effect of herb-partition moxibustion on the protein and mRNA expressions of Toll-like receptor 4 (TLR-4) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) in rats with ulcerative colitis (UC), and to further explore the mechanism of herb-partition moxibustion on UC. A total of 40 male SD rats wererandomly divided into four groups: the normal group, the model group, the herb-partition moxibustion group and the sulfasalazine (SASP) group. Herb-partition moxibustion was used onTianshuandQihaiacupoint in the herbpartition moxibustion group, and SASP gavage was used in the SASP group. The colonic pathological change was detected by HE staining. Protein and mRNA expression of TLR-4 and TNF-α were detected by western blot and FQ-PCR methods, respectively. The results showed that pathological damages appeared in colon tissues of the model rats. Compared with the model group, the colon pathological damage was improved in the herb-partitioned moxibustion group and the SASP group. Protein and mRNA expression of TLR-4 and TNF-α were significantly increased in the model group rats compared with the normal group (P＜0.05). After herb-partitioned moxibustion and SASP treatments, the protein and mRNA expression of TLR-4 and TNF-α were significantly decreased (P＜0.05). It was concluded that TLR-4 and TNF-α may play an important role in inflammatory injury of UC. Herb-partitioned moxibustion can reduce the expression of TLR-4 and TNF-α. It suggested that the underlying mechanism may be the down-regulation of the cascade reaction mediated by TLR4 and TNF-α expression to achieve the purpose of moxibustion to treat UC.

Moxibustion therapy, ulcerative colitis, Toll-like receptor 4, tumor necrosis factor-α

10.11842/wst.2016.03.008

R245

A

（責任編輯：馬雅靜 張志華，責任譯審：王 晶）

2016-02-14

修回日期：2016-03-04

＊ 國家自然科學基金委面上項目（81473758）：艾灸調(diào)節(jié)潰瘍性結(jié)腸炎腸道菌群多樣性及艾灸血清對其LPS信號通路的作用機制研究，負責人：王曉梅；上海市教委科研創(chuàng)新項目（2014YZ052）：艾灸對潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群的調(diào)節(jié)作用及其效應(yīng)機制，負責人：王曉梅；科學技術(shù)部國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃“973計劃”項目（2015CB554501）：艾灸效應(yīng)的啟動機制及其內(nèi)源性調(diào)節(jié)作用的機理研究，負責人：吳煥淦；上海市人才發(fā)展資金（2014068）：艾灸對潰瘍性結(jié)腸炎腸道菌群多樣性的調(diào)節(jié)作用及其效應(yīng)機制研究，負責人：王曉梅。

＊＊ 通訊作者：吳煥淦，本刊編委，教授，博士生導(dǎo)師，主要研究方向：針灸作用的基本原理與應(yīng)用規(guī)律研究。