劉艷萍 王思威 孫海濱

摘要：【目的】對除蟲脲在荔枝上的安全性進行評價，為該藥在荔枝上的合理使用提供科學(xué)依據(jù)?！痉椒ā客ㄟ^建立除蟲脲在荔枝全果和果肉的前處理方法和液相色譜—二級管陣列紫外檢測器的儀器方法，對除蟲脲進行定量分析；通過兩年（2013～2014年）兩地（廣東、廣西）的殘留試驗，研究除蟲脲在荔枝上的殘留及消解動態(tài)。【結(jié)果】除蟲脲在荔枝果肉和全果上平均回收率分別為84.1%～84.8%和82.7%～84.9%，相對標準偏差分別為2.9%～4.3%和3.2%～4.2%，最小檢出量為5×10-10 g ，在荔枝全果和果肉上的最低檢測濃度均為0.01 mg/kg。除蟲脲在荔枝上的消解半衰期為3.5～4.9 d；以125.0～187.5 mg/kg劑量、施用3～4次，采收間隔期為7和10 d時，荔枝果肉上的殘留量均小于0.01 mg/kg，全果上的殘留量分別為0.05～0.23和0.01～0.05 mg/kg。【結(jié)論】除蟲脲在荔枝上防治荔枝蒂蛀蟲時施用劑量以125.0 mg/kg為宜，施藥次數(shù)3次，安全間隔期10 d。

關(guān)鍵詞： 除蟲脲；荔枝；殘留分析；使用評價

中圖分類號： S667.1；X592 文獻標志碼：A 文章編號：2095-1191（2016）11-1880-05

Abstract：【Objective】Safety of diflubenzuron in litchi was evaluated， in order to provide a scientific basis for rational use of diflubenzuron in litchi production. 【Method】An effective method was developed for quantitative analysis of diflubenzuron by HPLC-PDA（high performance liquid chromatography with photo-diode array） in whole fruit and flesh of litchi. Terminal residue and degradation dynamics of diflubenzuron in litchi were studied in Guangdong and Guangxi during 2013-2014. 【Result】Results showed that， spiked recoveries of diflubenzuron in whole fruit and flesh of litchi were 84.1%-84.8% and 82.7%-84.9%， respectively， with relative standard deviations of 2.9%-4.3% and 3.2%-4.2%. Limit of detection（LOD） was 5×10-10 g， and limit of quantification（LOQ） was 0.01 mg/kg in whole fruit and flesh. Half life of diflubenzuron in litchi was 3.5-4.9 d. Furthermore， terminal residues of diflubenzuron in flesh were less than 0.01 mg/kg， terminal residues of diflubenzuron in whole litchi were 0.05-0.23 and 0.01-0.05 mg/kg， respectively， when spraying 125.0-187.5 mg/kg diflubenzuron three or four times， and pre-harvest interval was 7 or 10 days. 【Conclusion】Recommended dosage of diflubenzuron is 125.0 mg/kg for prevention and control of Conopomorpha sinensis Bladley by spraying three times at pre-harvest interval of 10 days.

Key words： diflubenzuron； litchi； residue analysis； application evaluation

0 引言

【研究意義】除蟲脲（Diflubenzuron）是一種特異性低毒殺蟲劑，屬苯甲酰類，對害蟲有胃毒和觸殺作用，其通過抑制昆蟲幾丁質(zhì)合成，使幼蟲在蛻皮時不能形成新表皮，導(dǎo)致蟲體成畸形而死亡。該藥對鱗翅目害蟲有特效，對天敵安全。荔枝（Litchi chinensis）是我國熱帶、南亞熱帶氣候區(qū)的特色水果，因色、香、味俱佳被譽為“果中之王”（王麗敏等，2014），但在荔枝整個生長期常有荔枝蛀蒂蟲發(fā)生，特別在果實發(fā)育及成熟期為害，嚴重影響荔枝產(chǎn)量（姜子德等，2011）。當前化學(xué)農(nóng)藥仍是荔枝生產(chǎn)上主要的病蟲害防治手段，其中除蟲脲是一種常用藥劑（高強，2011）。目前除蟲脲在我國荔枝上沒有登記，依據(jù)我國農(nóng)藥管理條例，農(nóng)藥登記后方可使用，但實際生產(chǎn)中存在該藥非法使用問題，因此急需制定相應(yīng)的限量標準，并對該藥在荔枝上使用的安全性進行評價。【前人研究進展】目前，除蟲脲的檢測多在蔬菜、水果、小麥和茶葉上。高曉輝等（1989）報道了蘋果和土壤中除蟲脲的降解情況，除蟲脲在蘋果中的半衰期為39～75 d，降解較慢，在土壤中為8～10 d，較在蘋果中快。黎其萬等（2007）采用高效液相色譜法測定了雪蓮果中除蟲脲等3種農(nóng)藥的殘留，其中除蟲脲的檢出限為0.02 mg/kg。裴亞托（2007）采用高效液相色譜研究了除蟲脲在白菜和油菜上的殘留規(guī)律，結(jié)果表明，除蟲脲在白菜和油菜上的半衰期分別為9.1和10.0 d，其水冼去除率在60%以上。張清明等（2008）建立了梨中除蟲脲等3種苯甲酰脲類農(nóng)藥的殘留分析方法，方法的平均回收率為84%～98%，符合農(nóng)藥殘留分析的要求。唐淑軍等（2010）采用固相萃取小柱測定了蔬菜中除蟲脲的殘留，方法的平均回收率為98%～105%，變異系數(shù)為3.90%～7.75%，檢出限為0.008 mg/kg。蔡亞萍（2012）采用HPLC-MS/MS建立了茶葉中除蟲脲的檢測方法，方法的平均回收率為105%，檢出限為0.016 mg/kg?！颈狙芯壳腥朦c】目前，國內(nèi)文獻僅有除蟲脲在蔬菜、茶葉、小麥等基質(zhì)上的分析方法，以及除蟲脲在蘋果上的消解報道，尚無除蟲脲在荔枝上的殘留研究報道。【擬解決的關(guān)鍵問題】采用高效液相色譜法（HPLC）建立除蟲脲在荔枝上的殘留檢測方法，研究除蟲脲在荔枝上的殘留消解動態(tài)，明確除蟲脲在荔枝上的消解規(guī)律及最終殘留水平，為除蟲脲在荔枝上的合理使用及最大殘留限量的制定提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

供試荔枝品種為淮枝，分別來自廣東省廣州市黃埔區(qū)東圃果園和廣西南寧市江南區(qū)明陽農(nóng)場；供試農(nóng)藥40%除蟲脲懸浮劑由績溪農(nóng)華生物科技有限公司生產(chǎn)。

儀器：Surveyor高效液相色譜儀，配二極管陣列紫外檢測器（PDA），美國菲尼根有限公司；T18-Basic高速勻質(zhì)器，德國IKA公司；0.45 μm Filter Unit濾膜，美國戴安（DIONEX）公司；Y-4水浴恒溫振蕩器，江蘇金壇金城國勝試驗儀器廠；SHZ-Ⅲ 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，無錫星海王生化設(shè)備有限公司；N-EVAP24氮吹儀，美國Organomation儀器有限公司。

試劑：除蟲脲標準品99.4%，德國Dr. Ehrenstorfer Gmbh公司；丙酮、二氯甲烷、石油醚、無水硫酸鈉等試劑為分析純；弗羅里硅土、中性氧化鋁（層析用，60～100目）。

1. 2 田間試驗方法

1. 2. 1 田間試驗設(shè)計 試驗設(shè)空白對照區(qū)、高劑量處理區(qū)、低劑量（推薦劑量）處理區(qū)和消解動態(tài)試驗區(qū)。參照《農(nóng)藥殘留試驗準則》和《農(nóng)藥登記殘留田間試驗標準操作規(guī)程》，2013、2014年分別在廣東省廣州市黃埔區(qū)東圃果園和廣西南寧市江南區(qū)明陽農(nóng)場進行40%除蟲脲懸浮劑在荔枝上殘留消解動態(tài)和最終殘留試驗。

1. 2. 2 消解動態(tài)試驗 每2株荔枝樹為一小區(qū)，設(shè)1個處理，3個重復(fù)。于荔枝生長到成熟個體一半大小時，以40%除蟲脲懸浮劑按有效成分187.5 mg/L的劑量噴霧施藥1次，分別于施藥后當天（2 h）及1、3、7、10、14、21、28和35 d采樣，每次從小區(qū)果樹的上、中、下部的內(nèi)、外側(cè)隨機采集不少于1 kg生長正常、無病害的荔枝個體，去核，計核重后切碎混勻，四分法留500 g。樣品貯存于-20 ℃冰箱，待前處理及分析測定。

1. 2. 3 最終殘留試驗 分別設(shè)推薦劑量125.0 mg/L及1.5倍推薦劑量187.5 mg/L 2個劑量處理，各噴藥3次和4次，小區(qū)按順序排列，每次施藥間隔7～10 d。每2株荔枝為一處理小區(qū)，3次重復(fù)。分別于末次施藥后7和10 d，從小區(qū)的上、中、下部的內(nèi)、外側(cè)隨機采集不少于2 kg生長正常、無病害的荔枝個體。全果樣品：取1 kg荔枝，去核，計核重后切碎混勻；果肉樣品：取1 kg荔枝，除去果皮、果核，將果肉切碎后混勻。樣品均貯存于-20 ℃冰箱，待前處理及分析測定。

1. 3 分析方法

1. 3. 1 樣品前處理 荔枝全果和果肉：稱取20.00 g（精確至0.01 g）荔枝全果或果肉樣品，放入玻璃三角瓶中，加入60 mL丙酮，用高速勻質(zhì)器勻質(zhì)2 min，振蕩30 min，用60目石英砂作助濾劑抽濾，殘渣用30 mL丙酮勻質(zhì)，抽濾，合并抽濾液。將丙酮抽濾液濃縮至約20 mL，加入10%氯化鈉溶液20 mL，用50 mL二氯甲烷萃取3次，二氯甲烷萃取液經(jīng)無水硫酸鈉脫水后在50 ℃水浴上減壓濃縮至少許，用2 mL二氯甲烷/甲醇（95∶5，v/v）溶解，待柱凈化。

稱取2.00 g弗羅里硅土（5%減活）和1.00 g中性氧化鋁（5%減活）混合裝柱，柱頂與底端各加1.5 cm厚的無水硫酸鈉層，用15 mL石油醚預(yù)淋層析柱。將上述溶解物移入層析柱中，用50 mL二氯甲烷/甲醇（95∶5，v/v）混合液洗脫，收集；減壓濃縮至少量；用氣流吹干， 2 mL甲醇定容，供液相色譜測定。

1. 3. 2 儀器條件 液相色譜儀：菲尼根Surveyor 高效液相色譜儀配二極管陣列紫外檢測器（PDA）；色譜柱：依利特ODS2（4.6 mm×250 mm， 5 μm）；柱箱溫度30 ℃；流動相：乙腈∶水=85∶15（v/v），流速0.5 mL/min；檢測波長254 nm，進樣體積10 μL。

2 結(jié)果與分析

2. 1 分析方法的線性范圍、檢出限、準確度及精密度

2. 1. 1 分析方法的靈敏度 在本研究設(shè)計條件下除蟲脲的最小檢出量為5×10-10 g。根據(jù)添加回收率試驗，除蟲脲在荔枝全果、果肉中的最低檢測濃度均為0.01 mg/kg。

2. 1. 2 分析方法的線性關(guān)系 準確稱取除蟲脲標準品并用乙腈溶解，稀釋配制成0.05、0.10、0.50、1.00、5.00 μg/mL標準液，然后分別進樣10 μL，按含量（ng）—峰面積（Area/uV）作標準曲線，線性方程為

y=371641x-12523，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。

2. 1. 3 分析方法的準確度和精密度 準確稱取空白荔枝（全果、果肉）樣品，進行0.01、0.10、1.00 mg/kg 3個水平添加回收試驗，每濃度5次重復(fù)，譜圖見圖1。按1.3.1的條件進行提取、凈化和測定。計算平均回收率和相對標準偏差（RSD）。從表1可以看出，當添加水平在0.01～1.00 mg/kg范圍內(nèi)時，除蟲脲在荔枝果肉和全果中的平均回收率分別為84.1%～84.8%和82.7%～84.9%，RSD分別為2.9%～4.3%和3.2%～4.2%，符合殘留分析要求。

2. 2 除蟲脲在荔枝上的消解動態(tài)

除蟲脲在荔枝上的消解動態(tài)結(jié)果見表2和圖2。其在荔枝上的消解動態(tài)符合一級動力學(xué)方程，降解呈先快后慢并逐漸趨于平緩的趨勢。2013和2014年，廣東點荔枝上除蟲脲的原始沉積量分別為0.30和0.26 mg/kg，第7 d時其消解率分別為73.2%和81.5%，到第14 d時消解率達94.4%和98.5%，半衰期分別為4.4和4.7 d；2013和2014年，廣西點的原始沉積量分別為0.52和0.21 mg/kg，第7 d時消解率為76.5%和56.3%，到第14 d時消解率達93.9%和90.1%，半衰期分別為3.5和4.9 d。

2. 3 除蟲脲在荔枝上最終殘留量測定結(jié)果

2013和2014年，廣東、廣西兩地除蟲脲在不同施藥劑量及不同采樣期的最終殘留量測定結(jié)果見表3。由表3可知，40%除蟲脲懸浮劑分別按有效成分125.0和187.5 mg/L的劑量噴施3～4次，距末次施藥后7和10 d采樣，荔枝果肉中除蟲脲的殘留量均<0.01 mg/kg，施藥后7和10 d全果中的殘留量分別為0.05～0.23和0.01～0.05 mg/kg。

施藥后7 d，荔枝果肉占全果的比例為60%～75%，全果的除蟲脲殘留量是果肉的5～23倍，表明除蟲脲主要殘存在果皮上。

目前，我國、國際食品法典委員會（CAC）、美國、澳大利亞等尚未制定除蟲脲在荔枝上的最大殘留限量（Maximum residue limit， MRL），歐盟為0.05 mg/kg。本研究結(jié)果表明，當采收間隔期為7 d時荔枝全果中除蟲脲的殘留量超過0.05 mg/kg。因此，荔枝采收期除蟲脲的安全間隔期10 d較合適。

3 討論

本研究通過除蟲脲在廣東、廣西兩地荔枝中殘留消解動態(tài)試驗，證明除蟲脲殘留量隨著時間的延長逐漸降低，施藥14 d后其消解率均在90.0%以上，且半衰期較短，屬于易降解農(nóng)藥。最終殘留試驗結(jié)果表明，除蟲脲在荔枝上的半衰期為3.5～4.9 d，與已報道的除蟲脲在白菜和油菜上半衰期分別為9.1和10.0 d（裴亞托，2007），在蘋果上39～75 d、土壤8～10 d（高曉輝等，1989）相比，本研究中除蟲脲在荔枝上的半衰期較在白菜、油菜和蘋果等作物上的明顯偏短，其原因可能與作物不同、氣候條件不一致等因素有關(guān)，且在廣東和廣西的荔枝采收期間多雨水，也是影響半衰期的主要因素。

根據(jù)公式：理論每日最大攝入量（TMDI）=農(nóng)藥每日允許攝入量（ADI，mg/kg）×體重（63 kg），F(xiàn)AO/WHO農(nóng)藥殘留聯(lián)席會議（JMPR）制定除蟲脲的ADI值為0.02 mg/kg，參照我國膳食結(jié)構(gòu)中每日水果的消費量約457 g（王隴德，2005），根據(jù)理論MRL=TMDI/水果消費量，計算得除蟲脲的TMDI和理論MRL值分別為1.26和2.8 mg/kg。目前CAC和我國尚未制定除蟲脲在荔枝中的MRL值，歐盟制定的限量為0.05 mg/kg，根據(jù)本研究結(jié)果推薦我國除蟲脲在荔枝上的MRL為0.05 mg/kg。

本研究未進行除蟲脲膳食風險評估，僅根據(jù)試驗結(jié)果推薦荔枝上除蟲脲的最大殘留限量值，下一步工作將查詢除蟲脲在我國的登記使用情況及各國的限量標準制定情況，并依據(jù)我國的膳食數(shù)據(jù)進行除蟲脲的膳食風險評估。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，除蟲脲在荔枝中的殘留消解符合一級動力方程，根據(jù)化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準則，除蟲脲屬于易降解農(nóng)藥。依據(jù)國內(nèi)外現(xiàn)有技術(shù)資料及本研究結(jié)果，除蟲脲防治荔枝蒂蛀蟲用藥量以125.0 mg/kg為宜，施藥次數(shù)3次，安全間隔期10 d。推薦我國除蟲脲在荔枝上的MRL值為0.05 mg/kg。

參考文獻：

蔡亞萍. 2012. HPLC-MS/MS法測定茶葉中滅多威、除蟲脲和殺螟丹的殘留量[J]. 臺灣農(nóng)業(yè)探索，（4）：70-72.

Cai Y P. 2012. Determination on residual quantity of methomyl， diflubenzuron and cartap in tea by HPLC-MS/MS[J]. Taiwan Agricultural Research，（4）：70-72.

高強. 2011. 防治蒂蛀蟲：除蟲脲效果好[J]. 農(nóng)藥市場信息，（18）： 32.

Gao Q. 2011. Good control effect of diflubenzuron on Conopomorpha sinensis Bladley[J]. Pesticide Market News，（18）： 32.

高曉輝， 李本昌， 龔勇， 芐星. 1989. 除蟲脲在蘋果及土壤中的殘留及消解動態(tài)的研究[J]. 農(nóng)藥， 28（1）：7-8.

Gao X H， Li B C， Gong Y， Bian X. 1989. Residue and degradation dynamics of diflubenzuron in apple and soil[J]. Agrochemicals， 28（1）：7-8.

姜子德， 習平根， 冼繼東， 彭埃天， 陳科偉. 2011. 對未來五年我國荔枝植保研究的思考[J]. 中國熱帶農(nóng)業(yè)， 42（5）： 61-63.

Jiang Z D， Xi P G， Xian J D， Peng A T， Chen K W. 2011. Plant protection research of litchi in China in next five years[J]. Chian Tropical Agriculture， 42（5）： 61-63.

黎其萬， 劉宏程， 張玉榮， 王志飛， 黃相中， 唐利斌. 2007. 雪蓮果中甲霜靈、異菌脲和除蟲脲殘留量的高效液相色譜測定方法[J]. 分析實驗室， 26（12）： 83-85.

Li Q W， Liu H C， Zhang Y R， Wang Z F， Huang X Z， Tang L B. 2007. Determination of metalaxyl， iprodione and diflubenzuron residues in yacon by HPLC[J]. Chinese Journal of Analysis Laboratory， 26（12）： 83-85.

裴亞托. 2007. 除蟲脲生物安全性評價[D]. 天津：天津理工大學(xué).

Pei Y T. 2007. Safety assessment of diflubenzuron[D]. Tianjin：Tianjin University of Technology.

唐淑軍， 賴勇， 梁幸， 宋世文， 戴睿臻. 2010. SPE-GC/MS同時測定蔬菜中除蟲脲和滅幼脲殘留[J]. 農(nóng)藥， 49（3）： 201-203.

Tang S J， Lai Y. Liang X， Song S W， Dai R Z. 2010. Determination of diflubenzuron and chlorbenzuron residues in vege-

tables by SPE-GC/MS[J]. Agrochemicals， 49（3）： 201-203.

王隴德. 2005. 中國居民營養(yǎng)與健康狀況調(diào)查報告之一：綜合報告[R]. 北京：人民衛(wèi)生出版社：40-55.

Wang L D. 2005. One of Investigation Reports on Nutrition and Health of Chinese People：Summary Report[R]. Beijing： Peoples Medical Publishing House：40-55 .

王麗敏，陳潔珍，歐良喜，蔡長河，付丹文，張春陽. 2014. 荔枝雌蕊柱頭可授性研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報，30（3）：619-622.

Wang L M，Chen J Z，Ou L X，Cai C H，F(xiàn)u D W，Zhang C Y. 2014. Studies on stigma receptivity of litchi[J]. Jiangsu Journal of Agricultural Sciences， 30（3）：619-622.

張清明， 花日茂， 湯鋒， 李學(xué)德， 操海群. 2008. 梨中除蟲脲、氟蟲脲、氟啶脲的殘留分析方法[J]. 農(nóng)藥， 47（7）： 519-520.

Zhang Q M， Hua R M， Tang F， Li X D， Cao H Q. 2008. Determination of diflubenzuron， flufenoxuron and chlorfluazuron in pear by HPLC[J]. Agrochemicals， 47（7）： 519-520.

（責任編輯 麻小燕）