賀爾奇 Pan Yong-Bao 付瑜華 雷石富 李向勇 盧加舉 張正學(xué)

摘要：【目的】對(duì)9個(gè)果蔗品種（系）進(jìn)行遺傳多樣性分析并構(gòu)建其DNA指紋圖譜，為果蔗品種鑒定和分子育種等提供理論依據(jù)。【方法】利用21個(gè)SSR分子標(biāo)記和毛細(xì)管電泳技術(shù)對(duì)來自4個(gè)省份的9個(gè)果蔗品種（系）進(jìn)行遺傳多樣性分析，應(yīng)用NTSYS-pc 2.11計(jì)算供試材料間遺傳相似系數(shù)，并運(yùn)用UPGMA法進(jìn)行聚類分析，同時(shí)構(gòu)建其DNA指紋圖譜?！窘Y(jié)果】21對(duì)SSR引物共擴(kuò)增出204條帶，多態(tài)性比例為75.99%，每對(duì)引物可擴(kuò)增出4～31條帶，平均為9.71條。其中，17對(duì)引物含有9個(gè)果蔗品種（系）的44個(gè)特征位點(diǎn)，僅有5對(duì)引物鑒別能力最強(qiáng)，單個(gè)引物即可將其完全區(qū)分開。選擇多態(tài)性高、鑒別力強(qiáng)且含有品種（系）特征位點(diǎn)的3對(duì)引物（SMC36BUQ、SMC597CS和SMC851MS）構(gòu)建了9份果蔗品種（系）基于44個(gè)位點(diǎn)的DNA指紋圖譜。9份果蔗材料的遺傳相似系數(shù)為0.62～0.90，平均為0.77。UPGMA聚類結(jié)果顯示，9個(gè)果蔗材料可分為三大類群，且與材料來源地?zé)o直接關(guān)系?！窘Y(jié)論】9個(gè)果蔗品種（系）間的遺傳基礎(chǔ)差異較小，親緣關(guān)系較近，遺傳多樣性并不豐富，在育種中應(yīng)加大果蔗親本遺傳背景的差異，提高其遺傳多樣性。

關(guān)鍵詞： 果蔗；SSR；遺傳多樣性；DNA指紋圖譜

中圖分類號(hào)： S566.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2016）11-1815-07

Abstract：【Objective】In order to provide theoretical basis for variety identification and parental selection during su-

garcane breeding process，the present study was conducted to analyze genetic diversity of nine chewing cane varieties（lines） and construct their DNA fingerprints. 【Method】Combining twenty-one SSR molecular markers with capillary electrophoresis technique，genetic diversities of nine chewing cane varieties（lines） from four provinces were analyzed，and genetic simi-

larity coefficient between tested materials was calculated using NTSYS-pc 2.11. Then nine chewing cane varieties（lines） were clustered for analysis using UPGMA，and their DNA fingerprints were constructed. 【Result】Results showed that，a total of 204 bands were amplified from nine chewing cane varieties（lines） using twenty-one pairs of SSR primers，with polymorphic rate of 75.99%. So every pair of SSR primers could amplify 4-31 bands，with an average of 9.71 bands. Seventeen pairs of primer contained 44 cultivar-specific loci of nine chewing cane varieties（lines）. Only five pairs of primers had the strongest ability to discriminate nine chewing cane varieties（lines），and each pair of primer was able to discriminate each chewing cane varieties（lines）. However，only three pairs of primers（SMC36BUQ，SMC597CS and SMC851MS），which were characterized by high polymorphism and discriminability and contained cultivar-specific loci，were chosen to construct DNA fingerprints of nine chewing cane varieties（lines）. Furethermore，genetic similarity coefficients among nine chewing cane varieties（lines） varied from 0.62 to 0.90，with an average of 0.77. UPGMA clustering result showed that，nine chewing cane materials were clustered into three groups，this result was not related to origins of materials. 【Conclusion】There are little differences in genetic basis，close genetic relationship and poor genetic diversity among nine chewing cane varieties（lines），so genetic background of parents should be increased in breeding process of new varieties.

Key words： chewing cane； SSR； genetic diversity； DNA fingerprint

0 引言

【研究意義】果蔗是一種可直接食用的水果甘蔗，具有皮薄質(zhì)脆、汁多清甜、易咀嚼等特點(diǎn)，可用于解渴、解毒和保健，深受人們的喜愛（李瑞美等，2015）。近年來，隨著果蔗經(jīng)濟(jì)價(jià)值的提高，我國(guó)果蔗生產(chǎn)發(fā)展迅速，尤其在福建、廣東、廣西和貴州等地，其中以廣西推廣面積最大，僅百色隆林縣就超過100 ha，年收入超過2000萬元（馬世榮，2015），但仍無法滿足人們?nèi)找嬖鲩L(zhǎng)的需求（盧慶偉等，2015）。甘蔗常規(guī)育種工作量大、育種周期長(zhǎng)、效率低，是當(dāng)前甘蔗育種面臨的巨大挑戰(zhàn)。SSR（Simple sequence repeats）是基于PCR擴(kuò)增的分子標(biāo)記，具有數(shù)量多、多態(tài)性高、重復(fù)性好、不受環(huán)境因素和生育期的影響等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于物種遺傳多樣性分析、種質(zhì)鑒定、基因定位及輔助育種等研究。因此，利用SSR分子標(biāo)記分析現(xiàn)有果蔗品種的遺傳多樣性并構(gòu)建其DNA指紋圖譜，對(duì)果蔗育種、品種鑒定及種質(zhì)評(píng)價(jià)具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】目前，已有大量利用SSR分子標(biāo)記分析小麥（王立新等，2007）、大豆（趙波等，2008）、馬鈴薯（段艷鳳等，2009）、玉米（邵香蘭，2009）、棉花（尤春源等，2014；戴寶生等，2015）、水稻（蔡海亞等，2015）等作物的遺傳多樣性并構(gòu)建其DNA指紋圖譜的研究報(bào)道。有關(guān)甘蔗遺傳多樣性分析研究報(bào)道較多，但有關(guān)其指紋圖譜構(gòu)建的研究報(bào)道較少。Pan等（2003a，2003b）和Pan（2006）建立了基于毛細(xì)管電泳技術(shù)的甘蔗SSR分子標(biāo)記檢測(cè)體系，利用該體系對(duì)甘蔗進(jìn)行遺傳分析并構(gòu)建育種常用親本基因型數(shù)據(jù)表，剔除錯(cuò)標(biāo)的無性系，大幅度提高了SSR分子標(biāo)記在甘蔗育種效率。Chen等（2009）利用20個(gè)SSR分子標(biāo)記對(duì)不同國(guó)家的35個(gè)甘蔗品種及5個(gè)近緣野生種進(jìn)行遺傳親緣關(guān)系分析，研究發(fā)現(xiàn)40份材料的聚類結(jié)果與品種來源地和甘蔗演化進(jìn)程中近緣野生種的利用率順序基本一致。梁俊等（2010a，2010b）將SSR分子標(biāo)記與毛細(xì)管電泳技術(shù)相結(jié)合對(duì)甘蔗屬3個(gè)不同種的12個(gè)材料進(jìn)行遺傳多樣性及遺傳關(guān)系分析，并對(duì)52個(gè)甘蔗品種進(jìn)行同源性分析，結(jié)果表明參試品種間同源性為55%～87%，彼此間遺傳基礎(chǔ)相近，且構(gòu)建了基于141個(gè)SSR分子標(biāo)記的指紋圖譜數(shù)據(jù)庫。劉新龍等（2010a，2010b）利用SSR分子標(biāo)記對(duì)云南甘蔗品種進(jìn)行遺傳關(guān)系及遺傳多樣性分析，為當(dāng)?shù)馗收嵊N親本選擇和雜交組合配制提供理論指導(dǎo)，并從18個(gè)質(zhì)量性狀和5個(gè)數(shù)量性狀對(duì)73個(gè)云南甘蔗品種和27個(gè)其他省份主栽甘蔗品種進(jìn)行遺傳變異和遺傳多樣性分析，結(jié)果表明品種的遺傳相似性處于中等水平。姚春雪等（2011）對(duì)67份崖城89/9×昆明蔗茅雜種不同世代及其親本材料進(jìn)行SSR多態(tài)性分析，并利用234個(gè)SSR分子標(biāo)記組合構(gòu)建供試材料的DNA指紋圖譜數(shù)據(jù)庫，結(jié)果表明雜交后代材料間存在明顯的遺傳差異。【本研究切入點(diǎn)】雖然果蔗具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，但基于分子標(biāo)記的遺傳多樣性分析、種質(zhì)鑒定、基因定位及輔助育種等研究遠(yuǎn)落后于糖蔗，鮮見果蔗遺傳多樣性分析并構(gòu)建其DNA指紋圖譜的研究報(bào)道。【擬解決的關(guān)鍵問題】將SSR分子標(biāo)記和毛細(xì)管電泳技術(shù)相結(jié)合，以來自4個(gè)省份的9個(gè)果蔗品種（系）為試驗(yàn)材料，利用21對(duì)SSR引物對(duì)其進(jìn)行遺傳多樣性分析并構(gòu)建DNA指紋圖譜，為果蔗的生產(chǎn)應(yīng)用及種質(zhì)創(chuàng)新提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試果蔗材料（表1）由貴州省亞熱帶作物研究所望謨甘蔗育種場(chǎng)提供。在甘蔗生長(zhǎng)期，剪取各果蔗品種（系）植株頂部新鮮葉片，裝入15 mL離心管中，-20 ℃保存?zhèn)溆?。選用21對(duì)多態(tài)性較高的引物（表2）（Pan，2006；Chandra et al.，2014），并由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，且上游引物5'端標(biāo)記FAM。主要儀器設(shè)備：SANYO SIM-F14全自動(dòng)制冰機(jī)、LDZX- 40B立式自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌鍋、TGL-16G高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)、DYY-6B電泳儀、GELl-DOC2000凝膠成像分析儀、Bio-Rad PCR擴(kuò)增儀、ABI 3730XL電泳儀等。CTAB提取液：100.00 mmol NaCl，20.00 mmol EDTA（pH 8.0），2% CTAB（w/v），100.00 mmol Tris- HCl；苯酚/氯仿/異戊醇（25∶24∶1），氯仿/異戊醇（24∶1）。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 基因組DNA提取 果蔗DNA提取參照Pan等（2000）的方法，用分光光度計(jì)和0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的濃度和純度，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2. 2 PCR擴(kuò)增與毛細(xì)管電泳 PCR反應(yīng)體系10.00 μL：dNTP 80.00 mmol/L，上、下游引物各0.20 mmol/L，DNA模板10.0 ng，MgCl2 2.50 mmol/L，KCl 50.00 mmol/L，Tris-HCl 10.00 mmol/L和1.0 U Taq DNA聚合酶。擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃ 30 s，退火30 s（退火溫度見表2），72 ℃ 30 s，進(jìn)行30個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸2 min。對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳分離，GS500為分子量?jī)?nèi)標(biāo)，估算擴(kuò)增片段大小。

1. 2. 3 數(shù)據(jù)分析 根據(jù)9個(gè)果蔗材料的毛細(xì)管電泳圖譜，計(jì)算條帶數(shù)目、大小和多態(tài)性比例，應(yīng)用NTSYS-pc 2.11計(jì)算各材料間遺傳相似系數(shù)；運(yùn)用UPGMA法進(jìn)行聚類分析；利用GeneMapper v3.0和Powerpoint制作毛細(xì)管電泳分離圖譜，再根據(jù)無帶和有帶情況轉(zhuǎn)化為0、1數(shù)據(jù)矩陣。

2 結(jié)果與分析

2. 1 SSR多態(tài)性分析結(jié)果

對(duì)9個(gè)果蔗材料的PCR產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳分離，并通過GeneMapper v3.0和Powerpoint制作其毛細(xì)管電泳分離圖譜（圖1）。以SMC336BS為引物的擴(kuò)增條帶大小在141～183 bp，條帶數(shù)在不同供試果蔗品種（系）間不同，其中以黔糖3號(hào)、黔蔗06/126和黔糖08/688的最多，達(dá)5條。此外，根據(jù)21對(duì)SSR引物擴(kuò)增產(chǎn)物的毛細(xì)管電泳分離圖譜，對(duì)9個(gè)果蔗材料進(jìn)行SSR多態(tài)性分析，結(jié)果如表3所示，21對(duì)SSR引物共擴(kuò)增出204條帶，條帶大小為38～258 bp，多態(tài)性條帶145條，多態(tài)性條帶比例為35.48%～100.00%，平均為75.99%。每對(duì)引物可擴(kuò)增出4～31條帶，平均為9.71條。此外，21對(duì)SSR引物中有17對(duì)含9個(gè)果蔗品種（系）的44個(gè)特征位點(diǎn)，可作為品種（系）的特異引物，利用特異引物可快速與其他8個(gè)材料區(qū)分開。其中，有5對(duì)SSR引物（SMC31CUQ、SMC36BUQ、SMC597CS、SMC851MS和mSSCIR43）鑒別能力最強(qiáng)，僅用單對(duì)引物即可將9份果蔗品種（系）區(qū)分開。

2. 2 遺傳相似性分析結(jié)果

利用NTSYS-pc 2.11對(duì)9個(gè)果蔗材料進(jìn)行遺傳相似性分析，結(jié)果如表4所示，9個(gè)果蔗品種（系）的遺傳相似系數(shù)為0.62～0.90，平均為0.77，表明其遺傳多樣性并不豐富。其中，黔糖3號(hào)和黔糖08/688間的遺傳相似系數(shù)最大，為0.90，表明兩者的遺傳基礎(chǔ)一致性較高，親緣關(guān)系較近；沱江紅和安徽白皮間的遺傳相似系數(shù)最小，為0.62，表明兩者的遺傳基礎(chǔ)差異較大，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。貴州選育的黔糖系列（黔糖06/222、黔糖5號(hào)、黔糖3號(hào)和黔糖08/688）果蔗無性系間的相似系數(shù)為0.68～0.90，親緣關(guān)系較近。

2. 3 聚類分析結(jié)果

基于SSR分子標(biāo)記對(duì)9個(gè)果蔗品種（系）進(jìn)行聚類分析，結(jié)果如圖2所示，在遺傳相似系數(shù)為0.684處，可將9個(gè)果蔗品種（系）分為三大類群：類群I包括2個(gè)果蔗品種和1個(gè)品系，分別為安徽白皮、廣東黃皮和黔糖06/222；類群II為最大類群，包括2個(gè)果蔗品種和3個(gè)品系，又可進(jìn)一步分為兩個(gè)亞類群（A和B），A類群包括黔蔗06/126、黔糖3號(hào)、黔糖08/688和四川白善蔗；B類群僅包括黔糖5號(hào)；類群III僅包括沱江紅。上述結(jié)果表明，9個(gè)果蔗品種（系）的遺傳基礎(chǔ)差異較小，親緣關(guān)系較近，聚類結(jié)果和材料的地理來源無直接關(guān)系。

2. 4 指紋圖譜構(gòu)建

根據(jù)用最少的引物構(gòu)建供試材料DNA指紋圖譜的原則，并綜合考慮該指紋圖譜的廣泛適用性，即在擴(kuò)充供試果蔗材料的情況仍具有種質(zhì)鑒別能力。本研究根據(jù)各供試品種（系）特征位點(diǎn)選用多態(tài)性高、鑒別能力強(qiáng)的3對(duì)SSR引物（SMC36BUQ、SMC597CS和SMC851MS）構(gòu)建了其DNA指紋圖譜。由表5可知，從9個(gè)果蔗材料共擴(kuò)增出44個(gè)特征位點(diǎn)，且品種（系）間DNA指紋圖譜存在明顯差異，表明利用該指紋圖譜可將9個(gè)供試品種（系）進(jìn)行區(qū)分。因此，所建立的指紋圖譜可用于果蔗品種（系）的親緣關(guān)系和品種鑒定。

3 討論

本研究選用的21對(duì)SSR引物在甘蔗屬不同栽培種和野生近緣種的遺傳基礎(chǔ)評(píng)價(jià)中均表現(xiàn)出高多態(tài)性（梁俊等，2010b；劉新龍等，2010b；姚春雪等，2011），已被廣泛應(yīng)用于甘蔗品種選育和種質(zhì)鑒定（Pan et al.，2003a，2003b；Pan，2006；Chen et al.，2009）。雖然我國(guó)目前尚無統(tǒng)一的甘蔗分子身份數(shù)據(jù)庫，但作為被世界甘蔗育種家廣泛采用的SSR引物，這21對(duì)SSR引物可視為甘蔗遺傳基礎(chǔ)評(píng)價(jià)的核心SSR引物。因此，本研究獲得的9個(gè)果蔗品種（系）的SSR多樣性分析結(jié)果，具有廣泛適用性，可為不同蔗區(qū)果蔗品種（系）的真實(shí)性檢測(cè)提供依據(jù)。另外，17個(gè)SSR引物含有9個(gè)果蔗品種（系）的44個(gè)特征位點(diǎn)，因此，在甘蔗種質(zhì)區(qū)分或品種鑒定研究中，若供試材料包含9個(gè)果蔗品種（系）中的其中之一時(shí)，可選用該果蔗品種（系）的特異引物快速準(zhǔn)確將其與其他材料區(qū)分開。本研究根據(jù)用最少的引物組合鑒別盡可能多的供試材料原則，并綜合考慮指紋圖譜廣泛適用性，選用多態(tài)性高、鑒別能力強(qiáng)并含有特征位點(diǎn)的3對(duì)SSR引物構(gòu)建了基于44個(gè)特征位點(diǎn)的9個(gè)果蔗品種（系）的DNA指紋圖譜，可為保護(hù)育種機(jī)構(gòu)的知識(shí)產(chǎn)權(quán)提供科學(xué)依據(jù)。

此外，本研究發(fā)現(xiàn)9個(gè)果蔗品種（系）的遺傳基礎(chǔ)一致性較高，遺傳多樣性并不豐富，且聚類分析結(jié)果和材料的地理來源無直接關(guān)系。該結(jié)論與梁俊等（2010b）的研究結(jié)果一致，其原因主要為包括果蔗在內(nèi)的甘蔗育種均為高貴化育種，現(xiàn)代甘蔗栽培品種的血緣主要來自于熱帶種和割手密。雖然供試果蔗品種（系）來自不同省份，但由于選用的親本遺傳基礎(chǔ)相近，導(dǎo)致育出的果蔗品種（系）間遺傳基礎(chǔ)差異較小。因此，果蔗新品種的選育應(yīng)像糖蔗一樣，在保證適口性和商品性的同時(shí)，適當(dāng)引入斑茅、蔗茅等野生近緣種的遺傳資源，擴(kuò)大果蔗品種（系）的遺傳多樣性。

4 結(jié)論

9個(gè)果蔗品種（系）間的遺傳基礎(chǔ)差異較小，親緣關(guān)系較近，遺傳多樣性并不豐富，在育種中應(yīng)加大果蔗親本的遺傳背景差異，提高果蔗品種（系）的遺傳多樣性。

參考文獻(xiàn)：

蔡海亞，徐得澤，Elagib T，Saad S，姜樂，閘雯靜，李三和. 2015. 基于SSR標(biāo)記的部分重要雜交稻親本指紋圖譜構(gòu)建及遺傳相似性分析[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，54（4）：984-987.

Cai H Y，Xu D Z，Elagib T，Saad S，Jiang L，Zha W J，Li S H. 2015. Establishment fingerprint and analyses of genetic diversity among parent of some elite hybird rice with SSR markers[J]. Hubei Agricutural Science，54（4）：984-987.

戴寶生，南策雄，陳曉偉，黃曉麗，閆振華，盧華平，伊黎，李蔚. 2015. 岡雜棉8號(hào)SSR數(shù)字指紋圖譜的構(gòu)建[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，54（9）：2057-2060.

Dai B S，Nan C X，Chen X W，Huang X L，Yan Z H，Lu H P，Yi L，Li W. 2015. Construction of digital fingerprint of the cotton hybird Gangzamian No. 8[J]. Hubei Agricultura Science，54（9）：2057-2060.

段艷鳳，劉杰，卞春松，段紹光，徐建飛，金黎平. 2009. 中國(guó)88個(gè)馬鈴薯審定品種SSR指紋圖譜構(gòu)建與遺傳多樣性分析[J]. 作物學(xué)報(bào)，35（8）：1451-1457.

Duan Y F，Liu J，Bian C S，Duan S G，Xu J F，Jin L P. 2009. Construction of fingerprinting and analysis of genetic diversity with SSR markers for eighty-eight approved potato cultivals in China[J]. Acta Agronomica Sinica，35（8）：1451-1457.

李瑞美，張樹河，李海明，潘世明. 2015. 地方果蔗品種種質(zhì)資源形態(tài)與農(nóng)藝性狀的多態(tài)性分析[J]. 熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào)，23（4）：399-404.

Li R M，Zhang S H，Li H M，Pan S M. 2015. Diversity analysis of morphology and main agronomic traits in chewing cane[J]. Journal of Tropical and Subtropical Botany，23（4）：399-404.

梁俊，Pan Yong bao，李楊瑞，方峰學(xué). 2010a. 利用SSR標(biāo)記與毛細(xì)管電泳對(duì)甘蔗屬進(jìn)行的遺傳分析[J]. 廣西植物，30（1）：106-111.

Liang J，Pan Y B，Li Y R，F(xiàn)ang F X. 2010a. Assessment of genetic diversity in Succharum using SSR marker and capillary electrophoresis[J]. Guihaia，30（1）：106-111.

梁俊，Pan Yong Bao，李楊瑞，方峰學(xué)，吳凱朝，游建華. 2010b. 甘蔗屬不同種及優(yōu)良甘蔗栽培品種的SSR標(biāo)記遺傳多樣性分析[J]. 廣西植物，30（5）：594-600.

Liang J，Pan Y B，Li Y R，F(xiàn)ang F X，Wu K C，You J H. 2010b. Genetic diversity assessment of Saccharum species and elite cultivars from China using SSR markers[J]. Guihaia，30（5）：594-600.

劉新龍，馬麗，蔡青，應(yīng)雄美，陸鑫，蘇火生，毛鈞，范源洪. 2010a. 云南甘蔗品種表型性狀的遺傳多樣性分析[J]. 植物遺傳資源學(xué)報(bào)，11（6）：703-708.

Liu X L，Ma L，Cai Q，Ying X M，Lu X，Su H S，Mao J，F(xiàn)an Y H. 2010a. Genetic diversity analysis of phenotypic traits in Yunnan sugarcane varieties[J]. Journal of Plant Genetic Resources，11（6）：703-708.

劉新龍，馬麗，陳學(xué)寬，應(yīng)雄美，劉加勇，吳才文. 2010b. 利用系譜圖和SSR標(biāo)記分析云南自育優(yōu)良甘蔗品種的遺傳關(guān)系[J]. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，36（6）：613-619.

Liu X L，Ma L，Chen X K，Ying X M，Liu J Y，Wu C W. 2010b. Pedigree and molecular diversity of the elite srgarcane cultivars in Yunnan，China[J]. Journal of Hunan Agricultural University，36（6）：613-619.

盧慶偉，龐天，宋福龍. 2015. 坡地果蔗高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)綜合管理技術(shù)淺析[J]. 南方農(nóng)業(yè)，9（36）：23-25.

Lu Q W，Pang T，Song F L. 2015. Integrated management technology of high-yield and good-quality sugarcane on slope[J]. South China Agriculture，9（36）：23-25.

馬世榮. 2015. 果蔗高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)無公害栽培技術(shù)[J]. 北京農(nóng)業(yè)，（19）：127-128.

Ma S R. 2015. High-yield and good-quality pollution-free cultivation technique of chewing cane[J]. Beijing Agriculture，（19）：127-128.

邵香蘭. 2009. 甜、糯玉米品種標(biāo)準(zhǔn)DNA指紋技術(shù)的研究及應(yīng)用[D]. 揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué).

Shao X L. 2009. Research and application on standard DNA fingerprint technology of sweet，waxy maize varieties[D]. Yang-

zhou： Yangzhou University.

王立新，李云伏，常立芳，黃嵐，李宏博，葛玲玲，劉麗華，姚驥，趙昌平. 2007. 建立小麥品種DNA指紋的方法研究[J].作物學(xué)報(bào)，33（10）： 1738-1740.

Wang L X，Li Y F，Chang L F，Huang L，Li H B，Ge L L，Liu L H，Yao J，Zhao C P. 2007. Method of ID constitution for wheat cultivals[J]. Acta Agronomica Sinica，33（10）：1738-1740.

姚春雪，王先宏，何麗蓮，李富生. 2011. 甘蔗與蔗茅雜交不同世代的SSR指紋圖譜構(gòu)建[J]. 分子植物育種，9（3）：381-389.

Yao C X，Wang X H，He L L，Li F S. 2011. DNA fingerprint construction of different Succharum spp. × Erianthus fulus using SSR markers[J]. Molecular Plant Breeding，9（3）：381-389.

尤春源，聶新輝，張勝，郭歡樂，王夏青，林中旭. 2014. 新疆彩色棉23個(gè)品種指紋圖譜的構(gòu)建及遺傳多樣性分析[J]. 棉花學(xué)報(bào)，26（2）：161-170.

You C Y，Nie X H，Zhang S，Guo H L，Wang X Q，Lin Z X. 2014. Construction of DNA fingerprinting and analysis of genetic diversity with SSR markers for 23 color cotton cultivars in Xinjiang[J]. Cotton Science，26（2）：161-170.

趙波，金文林，濮紹京，郭蓓，萬平. 2008. 基于SSR小豆新品種（系）DNA指紋圖譜構(gòu)建及親緣分類初探[J]. 北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，23（3）：1-6.

Zhao B，Jin W L，Pu S J，Guo B，Wan P. 2008. DNA fingerprint and relative relationship of new varieties and lines of azuki bean by SSR markers[J]. Journal of Beijing University of Agricultura，23（3）：1-6.

Chandra A， Grisham M P， Pan Y B. 2014. Allelic divergence and cultivar-specific SSR alleles revealed by capillary electrophoresis using fluorescence-labeled SSR markers in sugarcane[J]. Genome，57（6）：363-372.

Chen P H，Pan Y B，Chen R. K，Xu L P，Chen Y Q. 2009. SSR marker-based analysis of genetic relatedness among sugarcane cultivars（Saccharum spp. hybrids） from breeding programs in China and other countries[J]. Sugar Tech，11（4）：347-354.

Pan Y B，Burner D M，Legendre B L. 2000. An assessment of the phylogenetic relationship among sugarcane and related taxa based on the nucleotide sequence of 5S rRNA intergenic spacers[J]. Genetica，108（3）：285-295.

Pan Y B，Cordeiro G M，Richard E P，Henry R J. 2003a. Molecuar genotyping of sugarcane clones with microsatellite DNA markers[J]. Maydica，48（4）：319-329.

Pan Y B，Miller J D，Schnell R J，Richard E P，Wei Q. 2003b. Application of microsatellite and RAPD fingerprints in the Florida sugarcane variety program[J]. Sugar Cane International，20：19-28.

Pan Y B. 2006. Highly polymorphic microsatellite DNA markers for sugarcane germplasm evaluation and variety identify testing[J]. Sugar Tech，8（4）：246-256.

（責(zé)任編輯 陳 燕）