唐雷

[摘要] 目的 探討基因蛋白Caveolin-1與胃癌侵襲及轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 方法 整群選取采用在該院2011年1月—2015年1月間手術(shù)切除胃組織存檔蠟塊57例，組織學(xué)類型、分級和分期等均參考世界衛(wèi)生組織分級系統(tǒng)（2011），臨床分期，I期9例，II期15例，III期28例，IV期5例。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的39例，無腋窩淋巴轉(zhuǎn)移的18例。應(yīng)用FCM（流式細胞免疫法）檢測Caveolin-1在57例胃癌組織中的相關(guān)表達， 以熒光指數(shù)（Fluorescence Idex， FI）表示結(jié)果，取因其它良性胃部病變而手術(shù)切除的正常胃組織12例作為對照。 結(jié)果Caveolin-1基因蛋白在III，IV期胃癌中的FI值0.53±0.27，明顯低于I，II期的胃癌FI=0.91±0.31，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.3782，P=0.0297<0.05）；Caveolin-1基因蛋白在有淋巴轉(zhuǎn)移的胃癌組織中平均FI值為0.51±0.21明顯低于無淋巴轉(zhuǎn)移的胃癌FI=0.94±0.27，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.4563，P=0.0294<0.05）。結(jié)論 胃癌組織中Caveolin-1的低表達可能促進了胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，提示Caveolin-1可作為胃癌診斷的一個有效指標(biāo)并有助于胃癌的預(yù)后判斷。

[關(guān)鍵詞] 胃癌；Caveolin-1；侵襲及轉(zhuǎn)移；流式細胞術(shù)

[中圖分類號] R735 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2016）02（b）-0052-03

[Abstract] Objective To discuss the relationship between Caveolin-1 gene protein and invasion and metastasis of gastric cancer. Methods 57 cases of gastric tissue archived wax blocks of surgical resection in our hospital from January 2011 to January 2015 were adopted， the World Health Organization grading system （2011） was referred to histological types， grading and staging， 9 cases were in I stage， 15 cases were in II stage， 28 cases were in III stage， 5 cases were in IV stage， 39 cases were with lymphatic metastasis， 18 cases were without axillary lymph node metastases， the related expression of Caveolin-1 in 57 cases of gastric cancer tissues was detected by FCM （Flow cytometry immune method） ， the result was expressed by the fluorescence index（Fluorescence Idex， FI）， 12 cases of normal gastric tissues of surgical resection caused by other benign gastric lesions were selected as controls. Results FI values of Caveolin-1 gene protein in the III， IV stages of gastric cancer were obviously lower than those in the I， II stages of gastric cancer （0.53±0.27 vs 0.91±0.31）（t=2.3782，P=0.0297<0.05）， the difference was obvious with statistically significant； the average FI value of Caveolin-1 gene protein in the gastric cancer tissues with lymphatic metastasis was obviously lower than that in the gastric cancer tissues without lymphatic metastasis （0.51±0.21 vs 0.94±0.27）（t=2.4563，P=0.0294<0.05）， the difference was obvious with statistically significant. Conclusion The low expression of Caveolin-1 in gastric cancer tissues may promote the invasion and metastasis of gastric cancer， which reminds that Caveolin-1 can be used as an effective index in diagnosis of gastric cancer and contributes to the prognosis of gastric cancer.

[Key words] Gastric cancer； Caveolin-1； Invasion and metastasis； Flow cytometry

近年來研究[1-3]發(fā)現(xiàn)腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移無疑是影響胃癌患者預(yù)后的重要因素之一，而胃癌的發(fā)生、發(fā)展又是一個多基因、多因素共同作用的結(jié)果。對于與胃癌侵襲及轉(zhuǎn)移過程中密切相關(guān)基因的研究是目前的一個研究熱點。胞膜窖（Caveolae）的標(biāo)記性蛋白Caveolin-1與腫瘤細胞的惡性轉(zhuǎn)化、增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移相關(guān)密切，且對信號傳導(dǎo)起著調(diào)控作用。該研究通過流式細胞術(shù)（FCM）檢測2011年1月—2015年1月間手術(shù)切除的57例胃癌組織存檔蠟塊中Caveolin-1在胃癌侵襲及轉(zhuǎn)移過程中的表達，評價其在胃癌侵襲及轉(zhuǎn)移中的作用，分析其與胃癌的相關(guān)性，力圖為胃癌轉(zhuǎn)移機制的研究以及胃癌的診斷和臨床預(yù)后判斷提供一個有價值的思路，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

整群選取采用在該院手術(shù)切除胃組織存檔蠟塊57例，常規(guī)病理檢查證實，患者術(shù)前均未接受過化療。年齡在30～70歲，平均年齡在（58.5±10.3）歲，其中男性30例，女性27例。組織學(xué)類型、分級和分期等均參考世界衛(wèi)生組織分級系統(tǒng)（2011）。臨床分期，I期9例，II期15例，III期28例，IV期5例。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的39例，無腋窩淋巴轉(zhuǎn)移的18例。取因其它良性胃部病變而手術(shù)切除的正常胃組織12例作為對照，年齡在28～69歲，平均年齡在（57.3±9.7）歲，其中男性7例，女性5例。

1.2 實驗方法

1.2.1 單細胞懸液的制備 切取厚50 m的蠟塊組織10片，置于10 mL試管中用二甲苯脫臘（置于37 ℃的恒溫箱24 h）。100%、95%、70%及50%各20 min酒精水化后加5 mL蒸餾水，5 min后用眼科剪刀將組織剪碎，生理鹽水沖洗后，300目銅鋼網(wǎng)過濾制得混懸液，1000 r/min離心沉淀4 min，棄上清液，備測。

1.2.2 細胞免疫熒光標(biāo)記 間接免疫熒光標(biāo)記法，取100l的1×106/mL細胞，PBS液10 mL洗滌，1000 r/min離心2 min，棄上清夜；先后加入 1：50鼠抗人單克隆抗體Caveolin-1（一抗）和1：20羊抗鼠FITC-IgG工作液（二抗）工作液各100 L，室溫孵育30 min，PBS液10 mL洗滌棄上清液；加入PBS100 L，500目銅網(wǎng)過濾后上機檢測。

1.2.3 采取正常胃組織對照、PBS代替一抗陰性對照、分別加入一抗和二抗的陽性對照及FITC標(biāo)記的小鼠IgG同型對照。

1.2.4 染色結(jié)果觀察 免疫熒光染色涂片后，熒光顯微鏡觀察，結(jié)果顯示細胞發(fā)出黃綠色熒光。Caveolin-1基因蛋白的熒光多分布在胞膜或胞質(zhì)，胞漿較少。

1.2.5 流式細胞術(shù)檢測法 美國Beckman Coulter公司生產(chǎn)Epics-XLII型流式細胞儀，激發(fā)波長488nm，15mW氬離子激光器。應(yīng)用Expo32ADC免疫熒光數(shù)據(jù)分析。

1.3 試劑

所有抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。一抗：鼠抗人Caveolin-1單克隆抗體；二抗：羊抗鼠FITC-IgG（Code 111-095-003 115-095-003 Lot：61141）。

1.4 結(jié)果判定

以熒光指數(shù)（Fluorescence Idex， FI）表示結(jié)果，F(xiàn)I=樣品蛋白表達的平均熒光強度（mode值）/正常對照樣品平均熒光強度（mode值）。

1.5 統(tǒng)計方法

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行系統(tǒng)統(tǒng)計分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，進行 t 檢驗。

2 結(jié)果

2.1 Caveolin-1在胃癌中的表達

Caveolin-1基因蛋白在胃癌中的平均FI值為0.63±0.25明顯低于正常胃組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（FI=1.00±0.19，t=2.1567，P=0.0321<0.05），表明Caveolin-1低表達促進了胃癌的生長。

2.2 Caveolin-1在胃癌中的表達與淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系

Caveolin-1基因蛋白在有淋巴轉(zhuǎn)移的胃癌組織中平均FI值為0.51±0.21明顯低于無淋巴轉(zhuǎn)移的胃癌FI=0.94±0.27，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.4563，P=0.0294<0.05），表明Caveolin-1基因蛋白表達水平與胃癌有無淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)。

2.3 Caveolin-1在胃癌中的表達與臨床分期的關(guān)系

Caveolin-1基因蛋白在III，IV期胃癌組織中FI值為0.53±0.27，明顯低于I，II期的胃癌FI=0.91±0.31，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.3782，P=0.0297<0.05），表明Caveolin-1基因蛋白表達水平與胃癌的臨床分期相關(guān)。

3 討論

世界范圍內(nèi)胃癌是常見惡性腫瘤，發(fā)展中國家男女發(fā)病率分別居于人體惡性腫瘤的第2位和第4位，嚴重侵襲著人們的生命安全[4]。我國胃癌發(fā)生率是世界范圍內(nèi)最高的國家之一[5]，目前對胃癌的治療已經(jīng)從單純化療過渡到了分子靶向治療[6-7]。尋找胃癌新的靶點將成為胃癌治療新的研究方向。

胃癌預(yù)后所受到的影響因素很多，腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移及擴散是致死的主要原因。Caveolin-1是細胞膜的主要結(jié)構(gòu)蛋白和標(biāo)志蛋白，與腫瘤的分化、增殖、凋亡、侵襲及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[1]。Caveolin-1在腫瘤發(fā)生過程中的機制尚不清楚，與多種惡性腫瘤相關(guān)[9-10]。

該研究結(jié)果顯示Caveolin-1基因蛋白在胃癌中的表達明顯低于正常胃組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.1567，P=0.0321<0.05），表明Caveolin-1低表達促進了胃癌的生長，與黃陳[8]的研究結(jié)果相似，與劉銘[2]的研究結(jié)果不同。劉銘等對24例癌前病變和65例胃癌組織進行免疫組化分析，研究顯示Caveolin-1在胃癌及癌前病變中的表達，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。Caveolin-1基因蛋白在有淋巴轉(zhuǎn)移的胃癌組織中表達明顯低于無淋巴轉(zhuǎn)移的胃癌，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.4563，P=0.0294<0.05），表明Caveolin-1基因蛋白表達水平與胃癌有無淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)。Caveolin-1基因蛋白在III，IV期胃癌組織中FI值明顯低于I，II期的胃癌差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.3782，P=0.0297<0.05），表明Caveolin-1基因蛋白表達水平與胃的臨床分期相關(guān)，進一步證明Caveolin-1蛋白抑制腫瘤的生長及發(fā)展。黃陳[1]采用免疫組化法檢測70例胃癌患者手術(shù)切除的癌組織和癌旁組織中Caveolin-1的表達水平，研究結(jié)果表明Caveolin-1在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌中的表達低于無淋巴轉(zhuǎn)移的胃癌，在III，IV期胃癌中的表達低于I，II期的胃癌，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），結(jié)果表明Caveolin-1的表達水平與胃癌的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，與該研究結(jié)果相似。而許文集等[3]的研究結(jié)果則顯示caveolin-l在進展期及伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組中高于早期及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組（P<0.05），與該研究結(jié)果相反。這說明caveolin-l與胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系有待于進一步深入研究。

綜上所述，該研究結(jié)果表明Caveolin-1與胃浸潤及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，評價其在胃癌侵襲及轉(zhuǎn)移中的作用，分析其與胃癌的相關(guān)性，力圖為胃癌轉(zhuǎn)移機制的研究以及胃癌的診斷和臨床預(yù)后判斷提供一個有價值的思路。

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（收稿日期：2015-11-06）