張文曉，張碧麗

(天津市兒童醫(yī)院，天津300370)

阿奇霉素對(duì)阿霉素腎病大鼠的腎保護(hù)作用及機(jī)制

張文曉，張碧麗

(天津市兒童醫(yī)院，天津300370)

目的 觀察阿奇霉素對(duì)阿霉素腎病的治療作用，探討其作用機(jī)制。方法 將135只Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、潑尼松組、阿奇霉素組、聯(lián)合組，每組27只。除對(duì)照組外，其余四組采用兩次尾靜脈注射阿霉素制備腎病模型；對(duì)照組尾靜脈注射同等劑量的生理鹽水。造模第5周開始每日晨起阿奇霉素組灌胃給予阿奇霉素62.5 mg/(kg·d)，潑尼松組灌胃給予潑尼松12.5 mg/(kg·d)，聯(lián)合組分別灌胃給予同等劑量的阿奇霉素及潑尼松，對(duì)照組及模型組均灌胃給予等劑量生理鹽水，均1次/d，連續(xù)給藥28天。治療前及治療第2、4周末檢測(cè)24 h尿蛋白、尿肌酐(Ucr)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、總蛋白(Tp)、白蛋白(Alb)、總膽固醇(TCho)、內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)及IL-2、IL-12、IL-6等。結(jié)果 治療期間模型組24 h尿蛋白、BUN、Scr、TCho逐漸升高，Ucr、Tp、Alb、Ccr逐漸降低，血清IL-2、IL-12水平逐漸降低，血清IL-6水平逐漸升高(P均<0.05)；與模型組比較，阿奇霉素組、潑尼松組、聯(lián)合組治療第2、4周24 h尿蛋白、BUN、Scr、TCho均降低，Ucr、Tp、Alb、Ccr均升高，血清IL-2、IL-12水平均升高，血清IL-6水平均降低，聯(lián)合組上述改變更顯著，組間比較P均<0.05。結(jié)論 阿奇霉素治療阿霉素腎病效果較好，其與潑尼松聯(lián)合應(yīng)用效果更顯著；降低血清IL-6、升高血清IL-2和IL-12水平可能是阿奇霉素的作用機(jī)制。

腎病綜合征；阿奇霉素；潑尼松；白細(xì)胞介素

腎病綜合征以大量蛋白尿、低白蛋白血癥、高脂血癥為主要表現(xiàn)，TH1/TH2失衡可能是其發(fā)病機(jī)制之一[1,2]。研究發(fā)現(xiàn)，TH1細(xì)胞因子IL-2、IL-12及TH2細(xì)胞因子IL-6在腎病綜合征進(jìn)展過程中隨TH1/TH2平衡偏倚發(fā)生變化。阿奇霉素屬大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，可通過調(diào)節(jié)炎癥介質(zhì)的釋放發(fā)揮抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用[3]。阿霉素腎病大鼠模型的主要表現(xiàn)及病理變化類似于人類腎病綜合征，尤其是兒童最常見的微小病變型腎病，目前該模型已被國(guó)內(nèi)外學(xué)者普遍用于兒童腎病的研究。2015年3～5月，本研究觀察了阿奇霉素對(duì)阿霉素腎病大鼠的治療效果，現(xiàn)分析結(jié)果并探討其作用機(jī)制。

1 材料及方法

1.1 材料 健康雄性Wistar大鼠135只，體質(zhì)量180～200 g，鼠齡(40±5)d，SPF級(jí)，許可證編號(hào)：SCXK(京)2012-0001，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。阿奇霉素(0.25 mg/片，批號(hào)：H91417)，購(gòu)自輝瑞制藥有限公司。注射用鹽酸多柔比星(阿霉素，10 mg/支，批號(hào)：130710)，購(gòu)自浙江海正藥業(yè)股份有限公司。醋酸潑尼松片(5 mg/片，批號(hào)：130820)，購(gòu)自天津力生制藥股份有限公司。IL-2、IL-12、IL-6 ELISA試劑盒，購(gòu)自美國(guó)R&D公司。金屬代謝籠由天津?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 模型制作與處理 135只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7天，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、阿奇霉素組、潑尼松組、聯(lián)合組，每組27只。除對(duì)照組外，其余四組采用兩次尾靜脈注射阿霉素制備腎病模型[4]；對(duì)照組尾靜脈注射同等劑量的生理鹽水。造模第4周末，造模的四組大鼠均出現(xiàn)大量蛋白尿、低白蛋白血癥、高脂血癥，提示造模成功。第5周開始每日晨起阿奇霉素組灌胃給予阿奇霉素62.5 mg/(kg·d)；潑尼松組灌胃給予潑尼松12.5 mg/(kg·d)；聯(lián)合組分別灌胃給予阿奇霉素及潑尼松，劑量同前；對(duì)照組及模型組均灌胃給予等劑量生理鹽水；均1次/d，連續(xù)給藥28天。給藥期間各組均自由攝取基礎(chǔ)飼料及飲水。

1.3 相關(guān)指標(biāo)觀察 治療前及治療第2、4周末行以下指標(biāo)檢測(cè)：①血、尿生化指標(biāo)：治療前及治療第2、4周末分別將大鼠置于代謝籠，禁食、不禁水，收集24 h尿液，檢測(cè)24 h尿蛋白及尿肌酐(Ucr)；每次留尿后每組隨機(jī)抽取9只大鼠取尾靜脈血，離心取血清，檢測(cè)尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、總蛋白(Tp)、白蛋白(Alb)、總膽固醇(TCho)、AST、ALT、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(γ-GT)，計(jì)算內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)。②血清IL-2、IL-12、IL-6：采用ELISA法檢測(cè)血清IL-2、IL-12、IL-6，具體步驟參照試劑盒說明書，根據(jù)吸光度值(OD值)在標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定其濃度。

2 結(jié)果

2.1 各組血、尿生化指標(biāo)比較 治療期間模型組24 h尿蛋白、BUN、Scr、TCho逐漸升高(P均<0.05)，Ucr、Tp、Alb、Ccr逐漸降低(P均<0.05)；治療第2、4周阿奇霉素組、潑尼松組、聯(lián)合組24 h尿蛋白、BUN、Scr、TCho均明顯低于模型組，Ucr、Tp、Alb、Ccr明顯高于模型組，聯(lián)合組上述改變更顯著，組間比較P均<0.05。見表1。

表1 各組治療前后血、尿生化指標(biāo)變化±s)

注：與對(duì)照組同時(shí)間點(diǎn)比較，aP<0.05；與模型組同時(shí)間點(diǎn)比較，bP<0.05；與阿奇霉素組同時(shí)間點(diǎn)比較，cP<0.05；與潑尼松組同時(shí)間點(diǎn)比較，dP<0.05；與同組治療前比較，eP<0.05；與同組治療2周比較，fP<0.05。

2.2 各組血清IL-2、IL-12、IL-6水平比較 治療前及治療第2、4周模型組血清IL-2、IL-12水平逐漸降低(P均<0.05)，血清IL-6水平逐漸升高(P均<0.05)；治療第2、4周，阿奇霉素組、潑尼松組、聯(lián)合組血清IL-2、IL-12水平明顯高于模型組，IL-6水平明顯低于模型組，聯(lián)合組上述改變更顯著，組間比較P均<0.05。見表2。

3 討論

腎病綜合征患者體內(nèi)存在細(xì)胞免疫失衡及細(xì)胞因子水平紊亂[5,6]。TH1、TH2兩種細(xì)胞由共同前體TH0細(xì)胞在不同細(xì)胞因子刺激下產(chǎn)生[7]。IL-2主要由TH1細(xì)胞產(chǎn)生，是在機(jī)體復(fù)雜的免疫網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的最主要細(xì)胞因子，可激活各種免疫細(xì)胞，特別是誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖和發(fā)揮免疫效應(yīng)，并具有獨(dú)立的降低腎病綜合征患者蛋白尿水平的作用[8,9]。此外，IL-12可刺激TH1細(xì)胞增殖，促進(jìn)TH0細(xì)胞向TH1細(xì)胞分化。Yildiz等[10]報(bào)道，IL-12可以獨(dú)立調(diào)節(jié)腎病綜合征患者血管通透性，在腎病綜合征的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮一定作用。IL-6主要由Th2細(xì)胞產(chǎn)生，可作用于多種靶細(xì)胞，可與其他細(xì)胞因子相互作用啟動(dòng)或促進(jìn)腎組織的炎癥損傷，影響蛋白尿的產(chǎn)生、發(fā)展，促進(jìn)腎臟病理改變，導(dǎo)致腎功能降低[11]。TH1、TH2細(xì)胞相互調(diào)節(jié)在機(jī)體細(xì)胞免疫過程中發(fā)揮重要作用。

本研究結(jié)果顯示，模型組血清IL-2、IL-12明顯低于對(duì)照組，提示阿霉素腎病大鼠體內(nèi)TH0細(xì)胞向TH1細(xì)胞分化不足，TH1細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子減少。給藥治療期間模型組血清IL-2、IL-12水平呈進(jìn)行性降低，蛋白尿水平持續(xù)上升，說明大鼠腎臟損傷加重，推測(cè)IL-2、IL-12可能對(duì)腎臟具有保護(hù)作用；但其血清IL-6水平逐漸升高，提示阿霉素腎病大鼠體內(nèi)TH2細(xì)胞被激活；且血清IL-6水平升高與蛋白尿增加具有一致性， 提示IL-6一定程度上可反映腎臟損傷程度。上述結(jié)果提示，IL-2、IL-12、IL-6參與了阿霉素腎病的發(fā)生、發(fā)展過程，阿霉素腎病大鼠體內(nèi)TH1/TH2平衡可能偏向TH2細(xì)胞。

表2 各組治療前后血清IL-2、IL-12、IL-6水平比較

注：與對(duì)照組同時(shí)間點(diǎn)比較，aP<0.05；與模型組同時(shí)間點(diǎn)比較，bP<0.05；與阿奇霉素組同時(shí)間點(diǎn)比較，cP<0.05；與潑尼松組同時(shí)間點(diǎn)比較，dP<0.05；與同組治療前比較，eP<0.05；與同組治療2周比較，fP<0.05。

阿奇霉素為一種新型的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，不僅具有抗菌作用，還可抑制中性粒細(xì)胞產(chǎn)生過氧化物，減輕中性粒細(xì)胞的趨化和黏附作用，抑制炎癥細(xì)胞因子釋放，進(jìn)而發(fā)揮抗炎作用。研究發(fā)現(xiàn)，阿奇霉素可以通過抑制TH2細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子發(fā)揮抗炎及調(diào)節(jié)免疫作用[12,13]；大環(huán)內(nèi)酯類抗生素聯(lián)合糖皮質(zhì)激素可顯著提高抗炎效果，并可減少糖皮質(zhì)激素引起的不良反應(yīng)[14]。本研究中阿奇霉素組治療后與模型組比較，其蛋白尿水平明顯下降，血清IL-6水平降低，IL-2、IL-12水平升高；提示阿奇霉素不僅可抑制TH2細(xì)胞的過度激活以降低IL-6水平，亦可促進(jìn)TH1細(xì)胞分化上調(diào)IL-2、IL-12水平，結(jié)合血、尿生化指標(biāo)的明顯好轉(zhuǎn)，說明阿奇霉素對(duì)阿霉素腎病大鼠的治療作用可能與其對(duì)IL-2、IL-6、IL-12的調(diào)節(jié)作用有關(guān)[15]。本研究結(jié)果還顯示，聯(lián)合組各項(xiàng)指標(biāo)改善情況最為顯著，提示阿奇霉素聯(lián)合潑尼松治療阿霉素腎病大鼠具有協(xié)同作用，可更有效延緩腎病進(jìn)展，但二者的協(xié)同作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，阿奇霉素治療阿霉素腎病效果較好，與潑尼松聯(lián)合應(yīng)用效果更顯著；降低血清IL-6水平，增加血清IL-2、IL-12水平可能是阿奇霉素的作用機(jī)制。

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天津市應(yīng)用基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計(jì)劃項(xiàng)目(13JCYBJC22300)。

張碧麗(E-mail: zhangbili218@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.28.011

R692

B

1002-266X(2016)28-0034-03

2015-11-19)