諶江華，姚紅燕，王麗麗，柴偉綱，孫梅梅（浙江寧波市農(nóng)業(yè)科學研究院，315040)

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寧波市設施蔬菜灰霉病菌對2種殺菌劑的抗性檢測

諶江華，姚紅燕，王麗麗，柴偉綱，孫梅梅
（浙江寧波市農(nóng)業(yè)科學研究院，315040)

摘要：為明確寧波市設施蔬菜灰霉病菌的抗藥性現(xiàn)狀，采用菌絲生長速率法測定了寧波市6個不同地區(qū)共46個菌株對腐霉利和嘧霉胺2種常規(guī)防治藥劑的抗藥性。試驗結(jié)果表明，測試的灰霉病菌對腐霉利已產(chǎn)生了很高的抗性，整體抗性頻率為80.43%，高抗頻率為22.84%，對嘧霉胺的抗性則相對較低，整體抗性頻率為34.78%，高抗頻率為1.67%；不同地區(qū)間灰霉病菌的抗藥性差異較大，6個地區(qū)以鎮(zhèn)海的抗藥性最為嚴重，慈溪、鄞州兩地的抗藥性則相對較輕。結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，部分灰霉病菌株對腐霉利和嘧菌胺2種殺菌劑產(chǎn)生了雙重抗性，鎮(zhèn)海的雙重抗性頻率最高，達到了60%。為此，在設施蔬菜生產(chǎn)上應合理更換并交替使用與此2種藥劑無交互抗性的藥劑，以有效控制灰霉病。

關鍵詞：設施蔬菜；灰霉病菌；腐霉利；嘧霉胺；抗藥性

諶江華（1981-），男，農(nóng)藝師，碩士，主要從事農(nóng)作物病蟲害綜合防控技術(shù)研究與推廣工作，E-mail：jhchen20@163.com

灰霉病病原菌為灰葡萄孢（Botrytis cinerea Pers.)，可為害黃瓜、番茄、茄子、甜椒、韭菜、萵苣、洋蔥等多種蔬菜作物，發(fā)生范圍廣，為害十分嚴重，給蔬菜生產(chǎn)造成了很大損失[1]。近年來，該病在寧波市設施蔬菜產(chǎn)區(qū)發(fā)生普遍。目前控制該病害仍以化學藥劑防治為主，但因灰霉病菌具有繁殖速率高、遺傳變異大和適合度高等特性[2]，長期連續(xù)大量用藥使得灰霉病菌對多種主要防治藥劑產(chǎn)生了抗藥性，甚至出現(xiàn)了多重抗藥性[3，4]。腐霉利和嘧霉胺是寧波市在蔬菜生產(chǎn)上用于防治灰霉病的主要常規(guī)防治藥劑，隨著這2種藥劑的連續(xù)大量頻繁使用，灰霉病菌對二者產(chǎn)生不同程度的抗性，防治效果逐年下降?；颐共【目顾幮詸z測是一項普通的日常性工作，但其對后續(xù)的病害防治用藥指導具有十分重要的作用，雖然已經(jīng)有不少類似的研究，但是不同地區(qū)的病菌抗藥性不同。即便同一地區(qū)，隨著時間的發(fā)展，病菌的抗藥性也會發(fā)生變化。本研究的目的在于通過對當前寧波地區(qū)灰霉病菌對腐霉利和嘧霉胺2種殺菌劑的抗藥性的檢測，以明確寧波市當前灰霉病菌的抗藥性現(xiàn)狀，為設施蔬菜灰霉病的田間用藥和綜合防治提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗材料

①供試菌株a.菌株采集與分離。從寧波市慈溪、鎮(zhèn)海、鄞州、寧海、象山、奉化6地設施蔬菜上采集并分離純化得到灰霉病菌株46個，用PDA斜面培養(yǎng)基保存到4℃冰箱中備用。

b.敏感菌株。黃瓜灰霉病菌，來源于浙江省化工研究院。

②供試藥劑與培養(yǎng)基a.供試藥劑。50%腐霉利可濕性粉劑，商品名速克靈，日本住友化學工業(yè)株式會社生產(chǎn)；40%嘧霉胺懸浮劑，商品名施佳樂，拜耳作物科學公司生產(chǎn)。

b.培養(yǎng)基。菌株分離培養(yǎng)和腐霉利抗藥性測定采用PDA培養(yǎng)基，嘧霉胺測定培養(yǎng)基按Chapenland 等[5]的方法：葡萄糖10g、瓊脂15g、KH2PO42g、K2HPO41.5g、MgSO4·7H2O5g、（NH4)2SO41g，加水至1000mL。

1.2試驗方法

灰霉病菌的抗藥性測定采用FAO推薦的菌落直徑法（菌絲生長速率法)，即測定抑制菌絲生長50%時殺菌劑的有效抑制中濃度（EC50)，分別測定敏感菌和各地菌株的EC50。各菌株先在PDA平板上活化培養(yǎng)5 d，然后在同一圓周上取直徑0.5 cm的菌絲塊并轉(zhuǎn)移到含系列質(zhì)量濃度的培養(yǎng)基平板中央，25℃恒溫箱中黑暗培養(yǎng)3 d后測量各菌落直徑（cm)，取平均值計算藥劑對菌絲生長的抑制率（%)。利用DPS軟件[7]，通過濃度對數(shù)值（)與抑制率幾率值（)之間的線性回歸關系，求出毒力回歸方程和有效抑制中濃度（EC50)。依據(jù)紀明山等[7]的判定方法根據(jù)各地菌株EC50值與敏感菌EC50值的倍數(shù)進行抗性水平判定，即測試菌株的EC50值為敏感菌株的5倍以下為敏感（S)，5～10倍為低抗（LR)，10～40倍為中抗（MR)，40倍以上為高抗（HR)。根據(jù)判定結(jié)果分析各地菌株抗性頻率、抗性表型比例及同時對兩種藥劑產(chǎn)生抗性的雙重抗性頻率，抗性頻率（%)=抗性菌株數(shù)/總菌株數(shù)×100%；抗性表型比例（%)=各抗性表型菌株數(shù)/總菌株數(shù)×100%；雙重抗性頻率（%)=雙重抗性菌株數(shù)/決菌株數(shù)×100%。

2　結(jié)果與分析

2.1灰霉病菌對腐霉利和嘧霉胺的抗性頻率

從圖1可以看出，所測定的設施蔬菜灰霉病菌對腐霉利和嘧霉胺均產(chǎn)生了不同程度的抗藥性，其中對腐霉利已產(chǎn)生了嚴重的抗性，其抗性頻率達到50%以上，而對嘧霉胺的抗性頻率則相對較低，除鎮(zhèn)海菌株達到60%外，其余各地抗性頻率均在40%以下。從不同的地區(qū)菌株抗性頻率差異來看，鎮(zhèn)海區(qū)灰霉病菌株對2種殺菌劑的抗性頻率均最高，慈溪菌株對腐霉利的抗性頻率最低，而寧海菌株對嘧霉胺的抗性頻率最低，僅為16.67%。

2.2灰霉病菌對腐霉利和嘧霉胺的抗性水平

從圖2可以看出，6個地區(qū)灰霉病菌對腐霉利均產(chǎn)生了高抗菌株，高抗頻率均在10%以上，其中鎮(zhèn)海的高抗頻率最高，達40%；其次為奉化菌株，高抗頻率為28.6%。慈溪菌株的抗性水平則較低，其高抗頻率較低，而敏感頻率則最高。

從圖3可以看出，寧波市設施蔬菜灰霉病菌對嘧霉胺的整體抗性水平比較低。除鎮(zhèn)海菌株產(chǎn)生了高抗菌株外，其余均未出現(xiàn)高抗菌株，且敏感頻率均在60%以上。6個地區(qū)灰霉菌株中，寧海菌株對嘧霉胺的抗性水平最低，檢測未發(fā)現(xiàn)有中高抗菌株，敏感菌株占比達83.3%。

2.3灰霉病菌對腐霉利和嘧霉胺的雙重抗性

從圖4可以看出，測定的寧波6地設施蔬菜灰霉病菌均有菌株對腐霉利和嘧霉胺同時產(chǎn)生了抗性，即雙重抗性，其中以鎮(zhèn)海菌株的雙重抗性頻率最高，達到60%；其次為象山菌株；而慈溪菌株則最低，其雙重抗性頻率為14.29%。

圖1　不同地區(qū)灰霉病菌對2種殺菌劑的抗性頻率

圖2　不同地區(qū)灰霉病菌對腐霉利的抗性水平

圖3　不同地區(qū)灰霉病菌對嘧霉胺的抗性水平

圖4　不同地區(qū)灰霉病菌對2種殺菌劑的雙重抗性

3　討論與結(jié)論

通過菌絲生長速率法測定了寧波市設施蔬菜灰霉病菌對常規(guī)防治藥劑腐霉利和嘧霉胺的抗藥性，結(jié)果表明，測定的灰霉病菌對腐霉利和嘧霉胺均已產(chǎn)生了不同程度的抗性，其中對腐霉利的抗性十分嚴重，整體抗性頻率為80.43%，高抗菌株頻率為22.84%；對嘧霉胺的抗性則相對較輕，整體抗性頻率為34.78%，高抗菌株頻率為1.67%。且各地灰霉病菌中均已有菌株對2種藥劑產(chǎn)生了雙重抗性，平均雙重抗性頻率為32.61%。同時，不同地區(qū)灰霉病菌的抗藥性差異較大，6個地區(qū)中以鎮(zhèn)海的抗藥性最為嚴重，抗性頻率和高抗頻率均最高，而慈溪、鄞州兩地則相對較輕。

腐霉利和嘧霉胺在防治蔬菜灰霉病上已連續(xù)使用多年，特別是近年來寧波市各地設施蔬菜灰霉病發(fā)生嚴重，這2種藥劑頻繁大量使用，且腐霉利常作為設施蔬菜防治灰霉病的煙熏劑大量連續(xù)使用，導致灰霉病菌的抗藥性迅速上升。一般來說，高抗菌株頻率達20%以上，就說明藥劑已沒有使用價值[8]。本試驗檢測出的腐霉利高抗菌株比例達22.84%，表明該藥劑已不適合在寧波市設施蔬菜灰霉病的防治。因此，為了更好地有效控制設施蔬菜灰霉病，降低經(jīng)濟損失，應根據(jù)不同地區(qū)的抗藥性水平積極采取相應措施，合理更換并交替使用與此2種藥劑無交互抗性的藥劑。

參考文獻

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[2]趙曉軍，任璐，周建波，等.山西省蔬菜灰霉病菌對嘧霉胺的抗藥性檢測[J].植物保護，2012，38（5)：120-123.

[3]劉波，葉鐘音，劉經(jīng)芬，等.對多菌靈、速克靈具多重抗性的灰霉病菌菌株性質(zhì)的研究[J].南京農(nóng)業(yè)大學學報，1994，16（3)：50-54.

[4]紀明山，程根武，張益先，等.灰霉病菌對多菌靈和乙霉威抗性研究[J].沈陽農(nóng)業(yè)大學學報，1998，29（3)：213-216.

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Resistance Detection of Botrytis cinerea to Two Fungicides on Protected Vegetables of Ningbo City

CHEN Jianghua,YAO Hongyan,WANG Lili,CHAI Weigang,SUN Meimei(
Ningbo Academy of Agricultural Sciences,Zhejiang 315040)

Abstract:For understanding the status of fungicide resistance of Botrytis cinerea from protected vegetables,we determined the resistance of 46 isolates collected from 6 different areas of Ningbo to two conventional fungicides procymidone and pyrimethanil,by using mycelium growth rate method.The results showed that,B.cinerea from protected vegetables was highly resistance to procymidone,with the total resistance frequency of 80.43% and high-level resistance frequency of 22.84%.The resistance to pyrimethanil was relatively low,with the total resistance frequency of 34.78% and high-level resistance frequency of 1.67%.B.cinerea collected from different areas had greatly different fungicide resistance,and the resistance of Zhenhai was most seriously among the 6 areas,while the resistance of Cixi and Yinzhou was lighter relatively.The results also showed that,some isolates had double -resistance to procymidone and pyrimethanil.The double-resistance of Zhenhai was the highest with the frequency of 60%.Therefore,we should reasonably change and alternatively use the fungicides having no interaction resistance with procymidone and pyrimethanil in greenhouse vegetable production for effective control ofB.cinerea .

Key words:Protected vegetables;Botrytis cinerea ;Procymidone;Pyrimethanil;Fungicide resistance

收稿日期：2015-12-11

基金項目：寧波市農(nóng)科教結(jié)合項目（2014NK34）

DOI:10.3865/j.issn.1001-3547.2016.04.032

中圖分類號：S436.3

文獻標識碼：A

文章編號：1001-3547（2016)04-0082-03