何侃亮

陜西省中醫(yī)醫(yī)院 (西安 710003)

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不同炮制方法對手掌參抗疲勞和抗氧化活性的影響

何侃亮

陜西省中醫(yī)醫(yī)院 (西安 710003)

摘要目的：探討不同炮制方法對手掌參抗疲勞和抗氧化活性的影響。方法：利用羊奶炮制法、冷浸炮制法和蜜制炮制法來制備手掌參樣品。通過小鼠的游泳實驗和吊網(wǎng)實驗來考察三種炮制品不同劑量的抗疲勞作用。利用藥物對DPPH自由基和ABTS自由基的清除作用來考察三種炮制品不同濃度的抗氧化活性。結(jié)果：與空白對照組相比，服用三種炮制品不同劑量的小鼠，其游泳時間和懸網(wǎng)時間均明顯延長，且呈現(xiàn)出劑量依賴性。服用三種炮制品不同濃度的小鼠，其對DPPH自由基和ABTS自由基均有清除作用，且呈現(xiàn)出濃度依賴性。同時無論是延長作用還是清除作用，其作用效果均稍有不同，順序為羊奶炮制品大于蜜制炮制品大于冷浸炮制品。除了冷浸泡制品以外，羊奶泡制品和蜜制炮制品的作用效果與空白對照組比均具有顯著的差異。結(jié)論：手掌參有良好的抗疲勞和抗氧化活性，且羊奶炮制法可以很好的保留手掌參的藥效成分。

主題詞中藥炮制學(xué)@手掌參

手掌參，又名手參，佛手參，陰陽參等，為蘭科地生草本植物手掌參Gymnadenia conopsea (L.) R.Br的干燥塊莖。具有補腎益精、滋補強壯和生津止渴等功效，用于病后體弱、虛勞消瘦、肺虛咳喘和神經(jīng)衰弱等病癥，具有抗疲勞、抗氧化及抗衰老等多種生物活性，在民間，手掌參為常用的蒙藥、藏藥[1]。目前，手掌參多奶制后應(yīng)用，以提高其補益作用[2]。本文首次嘗試使用其它方法來炮制手掌參，并進行抗氧化和抗疲勞的藥效學(xué)的比較研究，通過比較幾種炮制方法的藥效學(xué)效果差異，進而評價炮制方法的適用性。

1材料1.1動物昆明種小鼠，體重20±2g，雌雄兼用，購于第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心，合格證號為陜動準字第01號。

1.2儀器旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申勝生物技術(shù)有限公司)；AY220 電子分析天平(日本島津分析儀器公司)；HH-4數(shù)顯恒溫?zé)岚逅″?國華電器有限公司)。

1.3實驗試藥手掌參藥材采自陜西秦嶺山區(qū)；1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH，美國Sigma公司)；2 ,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS，美國Sigma公司)；紅景天膠囊(四川宇妥藏藥藥業(yè)有限責(zé)任公司)；羧甲基纖維素鈉(CMC-Na，上海精析化工試劑有限公司，鈉含量6.5～8.5%)；無水乙醇(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；鮮羊奶購于郊區(qū)農(nóng)場；梔子購自于寶芝林大藥房。

2方法2.1樣品制備2.1.1羊奶炮制法：取100g手掌參，加250mL鮮羊奶，浸泡1h，文火煎煮至羊奶全部滲到藥材不留液體為標(biāo)準。取出，曬干，在60℃干燥，粉碎過120目篩備用。

2.1.2水制法:取100g手掌參，加250mL水，浸泡1h，文火煎煮至水全部滲到藥材不留液體為標(biāo)準。取出，曬干，在60℃干燥，粉碎過120目篩備用。

2.1.3蜜制炮制法[3]：取100g手掌參，加250mL 5%梔子液，浸泡至藥汁吸盡。余同2.1.2。

2.2小鼠的抗疲勞研究[4]2.2.1游泳試驗：取20±2g的小鼠110只，按體重隨機分成11組，每組10只，分別為空白對照組、陽性對照組和給藥組(羊奶炮制法組、冷浸炮制法組和蜜制炮制法組)?？瞻讓φ战M給予0.5%CMC-Na溶液，陽性對照組給予紅景天(1g/kg)，給藥組分別設(shè)高、中、低劑量組(4、2、1g/kg相應(yīng)藥物的混懸液)，口服灌胃給藥,1d1次，連續(xù)給藥7d，末次給藥1h后，將小鼠分別投入裝有水(水溫25℃，水深40cm)的玻璃缸內(nèi)。分別記錄每組小鼠的游泳時間，并利用t檢驗來比較空白對照組和各給藥組小鼠游泳時間的差異。

2.2.2吊網(wǎng)試驗：按“2.2.1”項下要求進行分組，給藥。末次給藥40min后，將小鼠倒懸于水平的粗鋼絲上，分別記錄每組小鼠的懸網(wǎng)活動時間，并利用t檢驗來比較空白對照組和各給藥組小鼠吊網(wǎng)活動能力的差異。

2.3抗氧化活性研究2.3.1對DPPH自由基的消除作用[5]：采用DPPH方法來評價羊奶炮制品、冷浸炮制品和蜜制炮制品的體外抗氧化活性。將2mL0.25mmol/L DPPH 的乙醇溶液與3種炮制品的高、中、低濃度溶液分別等體積混合均勻，室溫避光靜置30min，于517nm處檢測吸光度值(AS)；用無水乙醇作為空白對照，于517nm處測定A0；不同濃度的羊奶炮制品、冷浸炮制品和蜜制炮制品與無水乙醇等體積混合均勻后，在517nm出測得AX。將維生素C作為陽性對照，同法操作，進行平行實驗。按公式(1)計算清除率。

DPPH清除率=[1-(AS-AX)/A0]×100% (1)

2.3.2藥物對ABTS自由基的清除作用[6]：配制好一定濃度的ABTS自由基儲備液，不斷稀釋，使其在734nm處的吸光度值為0.7±0.02。測定時，在比色皿中加入10μL的藥物溶液(不同濃度的羊奶炮制品、冷浸炮制品和蜜制炮制品溶液)，之后加入490μL的ABTS+工作液，混合均勻后，于30℃靜置10min，在734nm處測定吸光度值A(chǔ)S。將無水甲醇作為空白，以490μL ABTS·+溶液和10μL無水甲醇混合后測定吸光度值A(chǔ)0。將維生素C作為陽性對照，按照同樣操作步驟，進行平行實驗。按公式(2)計算清除率。

ABTS清除率=(1-AS/A0)×100% (2)

3結(jié)果3.1小鼠的抗疲勞實驗由表1可知，三者對小鼠游泳時間和懸網(wǎng)活動時間延長順序為：羊奶炮制品>蜜制炮制品>冷浸炮制品，同時除了冷浸炮制品，其它兩組與空白對照組結(jié)果相比具有顯著差異(P<0.05)。

3.2抗氧化活性研究從表2可見，蜜制炮制品和冷浸炮制品并不十分適用于手掌參的炮制，且羊奶炮制法可以有效的保留抗氧化成分。

4結(jié)論本文使用3種方法對手掌參進行了炮制，發(fā)現(xiàn)3種炮制品均有抗疲勞和抗氧化活性，且抗疲勞和抗氧化活性均呈現(xiàn)出劑量(濃度)依賴性。冷浸炮制法和蜜制炮制法并不能很好的保留手掌參的藥效成分，因此相對于羊奶炮制法來說，冷浸炮制法和蜜制炮制法并不適用于手掌參的炮制。同時也證實了手掌參有良好的抗疲勞和抗氧化活性，具有一定的開發(fā)價值，且羊奶炮制法可以很好的保留手掌參的藥效成分，是炮制手掌參的有效方法。

參考文獻

[1] 格格日勒,包勒朝魯,那生桑.蒙藥材手參研究概況[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2013, 9(10):22-23.

[2] 海平,蘇雅樂,王秀蘭.手參及其炮制品鹽酸小檗堿含量的測定[J].中國民族醫(yī)藥雜志, 2009, 15(3):62-64.

[3] 王麗娜.蜜制平性人參炮制工藝研究[D].沈陽：遼寧中醫(yī)藥大學(xué),2006.

[4] 范少敏,郭琳,馮改利,等.秦巴山區(qū)人參屬中藥抗應(yīng)激和抗疲勞作用的研究[J].陜西中醫(yī), 2014,35(6):756-757.

[5] 馮改利,宋小妹,鄧翀,等.DPPH法篩選大血藤抗氧化活性有效部位[J].陜西中醫(yī),2011, 32(9):1233-1235.

[6] 張愛蓮,于敏,徐宏化,等.齒瓣石斛的化學(xué)成分及其抗氧化活性[J].中國中藥雜志, 2013, 38(6).

(收稿2016-01-07；修回2016-03-04)

Influence of different processing methods on Gymnadenia R.Br anti-fatigue effect and antioxidant activity

Shaanxi Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine(Xi’an 710003)

He Kanliang

KEY WORDSScience of Processing (TCD)@GymnadeniaR.Br.

ABSTRACTObjective：To investigate the effect of different processing methods on Gymnadenia R. Br anti-fatigue and anti-oxidant activity. Methods：Gymnadenia R. Br samples were prepared by milk processing method, cold soak processing method and honey processing method. The different dose of three processing products anti-fatigue effect were examined by swimming and hanging net mice experiments. The different concentrations of three processing products antioxidant activity were examined by drug on DPPH radical and ABTS radical scavenging effect. Results： Compared with the control group, taking different doses of three processing products of the mouse, and its time of swimming and hanging nets were significantly prolonged time, and in a dose-dependent manner; taking different concentrations of three processing products of the mouse, and its DPPH free radical and ABTS radical scavenging effect, and exhibits a concentration-dependent manner. At the same time, whether to prolong the effect or scavenging effect, its effects are slightly different, in order of milk processing products over honey processing products over maceration processing products. In addition to cold soak products, milk products and honey products effect than the control group have significant difference. Conclusion：Gymnadenia R.Br has a development value with obviously anti-fatigue and antioxidant activity. The milk processing method was an effective method for processing Gymnadenia R.Br.

【中圖分類號】R282

【文獻標(biāo)識碼】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.06.051