薛利華

西安市中醫(yī)醫(yī)院(西安710021)

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咳喘止瀉膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

薛利華

西安市中醫(yī)醫(yī)院(西安710021)

摘要目的：建立咳喘止瀉膏的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜對該制劑中丁香、吳茱萸兩種主藥加以鑒別，采用HPLC法對該制劑中桂皮醛的含量進(jìn)行測定。結(jié)果：丁香、吳茱萸薄層色譜斑點(diǎn)清晰，分離度較好。HPLC法測定結(jié)果桂皮醛在0.042～0.21μg范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量線性關(guān)系良好(r=0.9995), 平均回收率為97.88%， RSD為2.05%。結(jié)論:質(zhì)量控制方法專屬性強(qiáng),重現(xiàn)性好,靈敏度高可作為咳喘止瀉膏的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

主題詞藥品質(zhì)量控制，中藥@咳喘止瀉膏

咳喘止瀉膏原名三焦膏，是我院多位專家共同研究的協(xié)議處方，由我院研制的純中藥院內(nèi)制劑。主要由肉桂、丁香、吳茱萸等組成，經(jīng)外用穴位帖敷，具有溫陽祛寒的功效。經(jīng)過多年來的臨床使用，發(fā)現(xiàn)其對肺寒咳嗽效果顯著，同時(shí)對中陽不振的泄瀉、腎陽衰弱的遺尿也有很好的療效。近年來，隨著穴位帖敷的興起，該制劑的臨床使用有向呼吸科、耳鼻喉科、眼科、脾胃病科等擴(kuò)大的趨勢，用藥量也不斷增大，為確?；颊哂盟巹┝繙?zhǔn)確、安全、有效，需要更有效的控制咳喘止瀉膏的質(zhì)量，探討我院軟膏劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，特對該制劑中兩種主藥丁香、吳茱萸進(jìn)行薄層色譜鑒別，對君藥桂皮進(jìn)行含量測定的研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與試藥1.1儀 器LC-20AT恒流泵；SPD-20A紫外檢測器；SIL-20A自動進(jìn)樣；CTO-10ASVP校溫箱(日本島津)；預(yù)制硅膠G板(青島海洋化工生產(chǎn))；FA2104(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.2試藥肉桂、丁香、吳茱萸等藥材(購自西安盛興飲片廠)；桂皮醛對照品( 110710-201016) 、丁香、吳茱萸對照藥材從中國食品藥品檢定研究院購買；甲醇為色譜純，水為純水，其余實(shí)驗(yàn)試劑為分析純?？却篂a膏( 批號：20150624，20150716，20150807) 及相應(yīng)藥材陰性樣品軟膏由本實(shí)驗(yàn)室自制。

2方法與結(jié)果2.1薄層色譜鑒別2.1.1丁香薄層鑒別[1]：稱取本軟膏三批各10g，分別加硅藻土適量使分散，加乙醚30mL，振搖數(shù)分鐘，用棉質(zhì)纖維濾紙過濾，濾液加熱蒸干，殘?jiān)尤?mL乙醚，待完全溶解為供試品溶液。取不含丁香的處方藥材按咳喘止瀉膏的制備工藝制成陰性樣品軟膏。取丁香對照藥材1g及陰性軟膏10g照前法分別制成對照藥材溶液及陰性對照品溶液。照薄層色譜法(藥典通則0502)試驗(yàn)，前述五種溶液分別吸取5μL，依次在薄層板上點(diǎn)樣，展開劑為石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(9∶1)，展開，取出，晾干，噴灑5%香草醛硫酸溶液少許，105℃加熱直到斑點(diǎn)顯示清晰。三批供試品顯示的色譜斑點(diǎn)和對照藥材色譜位置相應(yīng)、顏色相同。見圖1。

2.1.2吳茱萸薄層鑒別[1]：稱取本軟膏三批各10g，分別加硅藻土適量使分散，加30mL無水乙醇，超聲震蕩30min處理，棉質(zhì)纖維濾紙濾過，濾液加熱蒸干，殘?jiān)?mL無水乙醇使溶解，待完全溶解作為供試品溶液。取不含吳茱萸的處方藥材按咳喘止瀉膏的制備工藝制成陰性樣品軟膏。取吳茱萸對照藥材1g及陰性軟膏10g照前法分別制成對照藥材溶液及陰性對照品溶液。照薄層色譜法(藥典通則0502)試驗(yàn)，前述五種溶液分別吸取6μL，依次在薄層板上點(diǎn)樣，展開劑為環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-三乙胺(19∶5∶1∶1)，展開，取出，晾干，紫外光(365nm)下檢視。三批供試品色譜顯示的熒光斑點(diǎn)與對照藥材色譜位置相應(yīng)、顏色相同。見圖1。

2.2含量測定[1]2.2.1色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(35∶75)為流動相；檢測波長為290nm；柱溫30℃。

2.2.2對照品溶液的制備:取減壓干燥的桂皮醛對照品，精密稱定5.25mg，置50mL容量瓶，加甲醇溶解并稀釋至50mL刻度，搖勻，移液管移取2mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至25mL刻度，搖勻，即得。對照品溶液濃度為8.4μg/mL。

2.2.3制備供試品溶液：取本軟膏約1g，置入錐形瓶中精密稱定，加入精密量取的100mL甲醇溶液，稱重，超聲處理30min，放冷，再稱重，用甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，振搖3min，濾過，再用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.4制備陰性對照液：取不含肉桂的處方藥材按咳喘止瀉膏制備工藝及2.2.3中方法制成陰性對照品溶液。

2.2.5專屬性考察：將濃度為8.4μg/mL桂皮醛對照品溶液、本軟膏供試品溶液和無肉桂陰性對照溶液，分別精密吸取20 μL注入液相儀測定。結(jié)果本軟膏供試品溶液中的桂皮醛與其他峰分離良好，與桂皮醛對照品溶液在相同的保留時(shí)間有相應(yīng)的色譜峰，無肉桂陰性對照溶液在相同的保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)。表明測定的專屬性好，陰性無干擾。

2.2.6線性關(guān)系考察：精密吸取濃度為8.4μg/mL桂皮醛對照品溶液5、10、15、20、25μl，依次注入液相儀測定，以峰面積為Y軸，桂皮醛進(jìn)樣量為X軸，進(jìn)行線性回歸。方程Y= 19.24X -9 ( r = 0. 9995)。表明桂皮醛在0. 042 ～0.21μg范圍內(nèi)。

2.2.7精密度試驗(yàn)：取濃度為8.4μg//mL的桂皮醛對照品溶液，設(shè)定進(jìn)樣量為20μL/次，連續(xù)進(jìn)樣6次，注入液相儀，測定峰面積，RSD計(jì)算結(jié)果為0.78 %，精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn)：取咳喘止瀉膏(批號20150624)依2.2.3方法平行備樣5份，測定得桂皮醛平均含量為0.86 mg/g，RSD為1.02%。結(jié)果表明本法重復(fù)性良好。

2.2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下樣品一份，分別于0，1，2，4，8，12 h 進(jìn)樣，測定桂皮醛的峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果桂皮醛含量RSD 1.21%，表明樣品在12 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.10 加樣回收率試驗(yàn)：精密稱取批號為20150624的咳喘止瀉膏(含量為0.86 mg/g)五份置錐形瓶，每份約0.5g，分別精密吸取加入4 mL濃度為105μg/mL桂皮醛對照品溶液，按2.2.3方法制得供試品溶液，進(jìn)樣測量并計(jì)算，桂皮醛的平均回收率為97.88%，RSD=2.05%，表明該法加樣回收率符合規(guī)定。結(jié)果見表1。

2.2.11樣品含量測定：取三批不同批號的供試軟膏，依2.2.3項(xiàng)下方法制備，在本試驗(yàn)色譜條件下測定，結(jié)果為：0.86 mg/g(20150624)；0.83 mg/g(20150716)；0.89 mg/g(20150807)。

3討論咳喘止瀉膏是我院的外用軟膏劑之一，采用穴位貼敷。近年來，隨著穴位帖敷的興起，用藥量呈現(xiàn)不斷增大的趨勢，對藥品的質(zhì)量也提出更高的要求，而外用軟膏劑作為傳統(tǒng)外用劑型，由于組方、基質(zhì)、工藝、用途等方面的原因，其原有質(zhì)量控制較為簡單，一般按照藥典只進(jìn)行色澤、均勻度、氣味等性狀、穩(wěn)定性及微生物限度的檢測[1]。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不完善，有待進(jìn)一步研究。

本實(shí)驗(yàn)采用薄層鑒別對本制劑中臣藥丁香、吳茱萸進(jìn)行定性鑒別，結(jié)果薄層色譜斑點(diǎn)清晰、方法專屬性強(qiáng)、操作簡便易實(shí)施，且陰性無干擾。用高效液相法對本制劑中君藥桂枝定量測定桂皮醛，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，結(jié)果穩(wěn)定。本試驗(yàn)參照《中國藥典》和有關(guān)文獻(xiàn)[2-4]對咳喘止瀉膏進(jìn)行研究，所建立的方法準(zhǔn)確性好，可以作為咳喘止瀉膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)采用對君藥定量，臣藥定性的方法為我院外用軟膏劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步完善提供思路。

參考文獻(xiàn)

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2015.

[2] 張麗珍，周之榮.高效液相色譜法測定四味清口含片中桂皮醛和橙皮苷的含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2014,33(12)：1627-1630.

[3] 安瑜，張新新，梁晉如，等. HPLC法測定瑞克衛(wèi)瑞消毒液中桂皮醛的含量[J].陜西中醫(yī)，2013,34(2)：230-232.

[4] 鮑佳妮，翟鐵宏，張振秋，等.HPLC 測定桂枝、茯苓藥對提取物中6 個(gè)成分含量 [J]．遼寧中醫(yī)雜志,2015,42(4)：826-829.

(收稿2016-02-22；修回2016-03-22)

【中圖分類號】R286

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.06.046