張　元,周偉娥,李紹輝,鄭　陽,周　昱,張　峰,馮雪松,*

(1.中國醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,遼寧沈陽 110013;2.中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院食品安全研究所,北京 100176)

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動物源性食品中喹諾酮類殘留前處理及分析方法的研究進(jìn)展

張?jiān)?,2,周偉娥2,李紹輝2,鄭陽2,周昱1,張峰2,馮雪松1,*

(1.中國醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,遼寧沈陽 110013;2.中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院食品安全研究所,北京 100176)

喹諾酮類獸藥殘留是目前重要的動物源性食品安全問題之一,檢測食物基質(zhì)中痕量獸藥殘留依賴于有效的前處理方法和精密的分析儀器。本文闡述了喹諾酮類獸藥的研究背景和現(xiàn)狀,并對國內(nèi)外食品中喹諾酮類獸藥殘留的液液萃取(Liquid-Liquid Extraction,LLE)、固相萃取(Solid-Phase Extraction,SPE)、基質(zhì)輔助固相分散萃取(Matrix Solid-Phase Dispersion,MSPD)、QuECHERs(Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged,Safe,QuECHERs)、超臨界流體萃取(Supercritical Fluid Extraction,SFE)和免疫親和色譜(Immunoaffinity Chromatography,IAC)等前處理方法及液相色譜質(zhì)譜法、液相色譜法、毛細(xì)管電泳分析方法及免疫分析測定法等檢測方法進(jìn)行了綜述,擬為動物源性食品中喹諾酮類藥物的殘留監(jiān)控提供理論參考,綜述指出SPE和QuECHERs為最有前景的前處理方法,而質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展和儀器的小型化為檢測儀器的發(fā)展趨勢。

動物源性食品,前處理技術(shù),檢測,喹諾酮獸藥殘留

喹諾酮類藥物類(quinolones,QNs)是人工合成的具有1,4-二氫-4-氧代喹啉-3-羧酸結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)的一類藥物的總稱。該藥作為抗生素已有超過50年的使用歷史,主要通過阻斷特異性拓?fù)涿?抑制細(xì)菌DNA復(fù)制而發(fā)揮抗菌作用[1],該藥具有價格低廉、抗菌譜廣、無交叉耐藥性等諸多優(yōu)點(diǎn)。目前在臨床及獸藥領(lǐng)域均有著極其廣泛的應(yīng)用[2]。由于喹諾酮類藥物在預(yù)防和治療過程中的不規(guī)范使用,許多動物源性食品常存在該類藥物的殘留。鑒于此,人類往往成為了該類藥物的“被動吸收者”。喹諾酮類藥物能夠致癌、致畸、致突變,同時能夠用引發(fā)胃腸道及神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)等,人類若大量服用,往往具有很大的風(fēng)險[3-5]。一旦喹諾酮類藥物在肉、蛋、乳等各類動物源性食品中發(fā)生殘留,一方面,殘留的藥物可能對人體健康造成潛在的危害;另一方面,獸藥殘留也會阻礙動物源性產(chǎn)品的進(jìn)出口貿(mào)易。我國農(nóng)業(yè)部規(guī)定動物肌肉組織中環(huán)丙沙星、單諾沙星、恩諾沙星、沙拉沙星、二氟沙星、惡喹酸和氟甲喹的最高殘留限量(maximum residue limit,MRL)在10～50 μg/kg,美國則禁止在食用動物養(yǎng)殖過程中使用氟喹諾酮類藥物[6]。

目前在食品安全領(lǐng)域,大量關(guān)于喹諾酮類藥物檢測的研究已開展,如牛奶[7-8]、雞蛋[9-10]、肉類(豬、牛、羊、雞)[11-12]、魚及水產(chǎn)品[13-14]等。有學(xué)者[15]對各類抗生素作為獸藥或飼料添加劑的使用量進(jìn)行了統(tǒng)計研究,指出氟喹諾酮類藥物是目前使用量最大的獸藥抗生素之一,在對多種食品進(jìn)行獸藥殘留檢測后發(fā)現(xiàn),氟喹諾酮類以檢出率19%略微落后于磺胺類藥物,在各類獸藥抗生素殘留檢出率排行中位居次席[15]。目前動物源性食品中喹諾酮類抗生素殘留的前處理和分析方法取得了較大進(jìn)展,相關(guān)報導(dǎo)層出不窮,但近年內(nèi)該領(lǐng)域取得的最新進(jìn)展尚無較系統(tǒng)的綜述,對該領(lǐng)域進(jìn)行綜述不僅有助于研究者把握最新研究現(xiàn)狀,更能夠協(xié)助研究者在現(xiàn)有研究基礎(chǔ)上針對性地開展深入研究。因此本文擬對近5年內(nèi)動物源性食品中喹諾酮類抗生素殘留的前處理和分析方法進(jìn)展進(jìn)行綜述,以期為動物源性食品中喹諾酮類獸藥殘留監(jiān)控提供依據(jù)。

1　動物源性食品樣品前處理

建立復(fù)雜基質(zhì)中喹諾酮類藥物殘留的檢測方法,前處理是極其重要的一環(huán)。前處理不僅要最大限度地提取待測目標(biāo)物,還需要最大程度地減小雜質(zhì)的存在,從而降低基質(zhì)干擾,降低檢測限。截止目前,不同喹諾酮類藥物的前處理方法被相繼開發(fā),常見的有液-液萃取[16-19](LLE)、固相萃取[20-24](SPE)、基質(zhì)輔助固相分散萃取[25-27](MSPD)、“快速、簡易、廉價、有效、穩(wěn)定、安全”的萃取方法[11,28-29](QuECHERS)等,以下分述之。

1.1液-液萃取(LLE)

液-液萃取主要基于分析物在不同溶劑間的分配系數(shù)不同的原理,亦可通過控制pH調(diào)節(jié)藥物在兩相中的分配。乙酸乙酯、正己烷等均為常見的有機(jī)萃取溶劑。彭濤等[16]建立了同時測定雞肉中5種喹諾酮類藥物的液質(zhì)聯(lián)用方法,磷酸鹽緩沖溶液和乙腈混合溶液提取后,采用正己烷液液分配凈化除去脂肪,隨后經(jīng)C18柱凈化后經(jīng)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometer,LC-MS/MS)檢測,結(jié)果表明5種喹諾酮類藥物回收率在79.8%～95.1%之間,檢出限在0.1～1 μg/kg之間。占春瑞等[17]在測定雞肉中喹諾酮類物質(zhì)時也采用正己烷液液分配去除雞肉中脂類雜質(zhì),方法的檢出限可低至2.2～3.7 μg/kg,而回收率可高達(dá)78.3%～101.8%。

然而,LLE操作費(fèi)時、選擇性差、消耗高純?nèi)軇┒?不符合現(xiàn)代化儀器分析的發(fā)展趨勢,且部分樣品會發(fā)生乳化現(xiàn)象而影響測定,目前應(yīng)用逐漸減少,且已逐步被SPE代替。但近年來在其基礎(chǔ)上,液液分散微萃取(Dispersive Liquid-Liquid Micro-extraction,DLLME)作為一種新型微萃取技術(shù)被提出,該法操作簡單、快速、準(zhǔn)確、對環(huán)境友好,短短幾年取得了較大的研究進(jìn)展,Junza等[18]建立了同時測定牛奶中17種喹諾酮和14種β-內(nèi)酰胺類抗生素的HPLC-MS/MS方法,沉淀蛋白后,1070 μL乙腈作為分散劑,570 μL三氯甲烷作為萃取劑,萃取時間60 s,然后離心并行上機(jī)檢測,方法的檢出限可低至4.1～104.8 mg/kg,而回收率可高達(dá)72%～110%,研究還考察了不同因素對提取效率的影響,發(fā)現(xiàn)萃取劑和分散劑的體積及性質(zhì)、pH及鹽濃度值、萃取時間和離心時間均對提取效率有一定影響。Moema等[19]亦采取DLLME法凈化雞肝,隨后采取高效液相色譜對6種氟喹諾酮類藥物進(jìn)行檢測,凈化過程中分別優(yōu)化了分散劑類型及體積、萃取劑類型及體積、鹽種類、濃度和pH等因素對萃取效率的影響,最終選取1 mL乙腈作為分散劑,200 μL三氯甲烷作為萃取劑,渦旋30 s,離心5 min,該法測定雞肝中6種氟喹諾酮類藥物回收率高達(dá)83%～102%,定量限低至5～19 μg/kg之間。

1.2固相萃取(SPE)

固相萃取主要基于固體吸附劑將目標(biāo)物吸附,從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物與干擾物質(zhì)的分離和富集。操作步驟主要有前處理(均質(zhì)、離心等)、活化及上樣、不同洗脫劑洗脫及回收待測物四個主要步驟。常見的固相萃取填料有硅膠、氧化鋁和C18等。Jiménez-Díaz等[20]采用Isolute ENV SPE柱對豬肉組織進(jìn)行凈化,進(jìn)而分別采用熒光檢測器、液相色譜質(zhì)譜及液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜使用全面檢測其中8種喹諾酮類藥物,三種檢測器的檢出限分別為0.1～2.1、0.3～1.8、0.2～0.3 ng/g。侯建波等[21]建立了蜂蜜中6大類54種藥物(含15種喹諾酮)殘留的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜方法,樣品經(jīng)磷酸鹽緩沖液提取后,采用Oasis HLB 固相萃取柱凈化,隨后上機(jī)檢測,該法對喹諾酮類定量限達(dá)2.0 μg/kg,回收率也符合檢測要求。Galarini等[22]建立了符合歐盟2002/657法規(guī)的蜂蜜中27種抗生素(包含喹諾酮類)殘留的篩查和確證方法,樣品經(jīng)水解和脫脂后,采用Strata-X-C強(qiáng)陽離子柱進(jìn)行凈化,隨后上機(jī)檢測,該方法定量限低至0.23～2.0 μg/kg。達(dá)到歐盟2002/657法規(guī)要求。

固相萃取法有機(jī)試劑消耗量低、回收率高、分離效果好、操作簡單,同時可用于小體積樣品。但是其富集倍數(shù)有限,對于部分基質(zhì)中的雜質(zhì),凈化方法尚未開發(fā)完成。近年來,在固相萃取技術(shù)基礎(chǔ)上,固相微萃取技術(shù)被提出且已取得一定的發(fā)展。該法主要利用待測物在基體和萃取相間的非均相平衡,使待測組分?jǐn)U散吸附到石英纖維表面的固定相涂層,繼而進(jìn)入儀器進(jìn)行分析。相比SPE,該法具有更大的萃取表面積和更薄的固定相膜,且操作更為簡便。Gajda等[23]建立了同時測定雞蛋中7種喹諾酮類藥物殘留的熒光定量方法和質(zhì)譜確證方法,采用固相微萃取對樣品進(jìn)化,乙腈作為萃取劑,熒光方法回收率在85%～93%之間,定量限可達(dá)17～43 μg/kg;質(zhì)譜法回收率在92%～99%之間,定量限可達(dá)7～11 μg/kg。

近年來,在常規(guī)SPE基礎(chǔ)上,磁性固相萃取技術(shù)(magnetic-solid phase extraction,M-SPE)作為一種“革命性”技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生,該技術(shù)采用磁性或者可被磁化的物質(zhì)作為吸附劑,相較常規(guī)SPE填料,納米填料比表面積更大,擴(kuò)散距離更短,只需要使用少量的吸附劑就能實(shí)現(xiàn)低濃度的微量萃取,具有平衡時間短、萃取能力強(qiáng)、萃取效率高等優(yōu)點(diǎn)。Ibarra等[24]采用毛細(xì)管電泳法測定牛奶中7種喹諾酮類藥物,樣品采取M-SPE技術(shù)進(jìn)行凈化,實(shí)驗(yàn)中比較了磁性吸附材料的種類、用量及樣品pH對萃取效率的影響,牛奶凈化后上機(jī)檢測,方法檢出限在9～12 μg/L,回收率高達(dá)74%～98%。

1.3基質(zhì)輔助固相分散萃取(MSPD)

基質(zhì)輔助固相分散萃取最早于1989年被提出[27],該方法常用于液體或者粘稠樣品,對于部分含有脂類的原料也適用,該法首先將樣品和填料混合研磨,以使樣品在固定相顆粒表面均勻分散,從而獲得半固態(tài)樣品,進(jìn)行裝柱并通過不同洗脫淋洗液進(jìn)行洗脫而對目標(biāo)物進(jìn)行凈化,

基質(zhì)固相分散是將樣品與填料一起混合研磨,使樣品均勻分散于固定相顆粒表面,制成半固態(tài)后裝柱,然后根據(jù)“相似相溶”原理選擇合適的淋洗劑洗脫出各種待測物。該法將勻漿、提取和凈化等多個步驟融為一體,有效減少了樣品損失。Yu等[25]建立了同時測定豬肉組織中喹諾酮類、磺胺類和四環(huán)素類獸藥殘留的高效液相色譜方法,實(shí)驗(yàn)中采用MSPD法對樣品進(jìn)行凈化,2 g C18、0.05 g乙二胺四乙酸二鈉和0.05 g草酸加入樣品中輕微攪拌均勻裝柱,正己烷除脂,乙腈∶二氯甲烷(v/v:1∶1)洗脫目標(biāo)物,該法回收率在80.6%～99.2%之間,定量限在7～34 μg/kg。Duan等[26]建立了測定雞蛋中恩諾沙星的流動注射化學(xué)發(fā)光測定方法,樣品亦采用MSPD法進(jìn)行凈化,氟羅里硅土作分散吸附劑,二氯甲烷洗脫目標(biāo)物后進(jìn)行檢測,檢出限可低至5 ng/L。Wang等[27]同時采用高效液相-熒光檢測器測定了豬組織中5種喹諾酮類藥物,0.5 g豬肉組織中加入2 g C18均質(zhì),隨后分別以1 g無水硫酸鈉、0.25 g C18、樣品和C18均質(zhì)物、0.5 g無水硫酸鈉裝柱,正己烷洗脫除脂,最后以乙腈洗脫目標(biāo)物待測,該法回收率在60.1%～107.7%之間,檢出限在9～22 μg/kg,能較好地滿足檢測需求。

綜上,MSPD法萃取凈化效率高、溶劑和樣品用量低、節(jié)省時間。但該法不易標(biāo)準(zhǔn)化,主要受制于研磨的粒度大小不同,以及填裝技術(shù)有較大差別。

1.4QuECHERs方法

近年來食品中喹諾酮類獸藥殘留的QuECHERs方法也被開發(fā)出來,QuECHERs方法將提取、分離和凈化等多個步驟融合為一步,可以減少實(shí)測樣品用量,減少試劑和耗材消耗,同時節(jié)省操作人員的精力和時間,此外,QuECHERs方法具有較廣的樣品檢測范圍,對于各種食品,如果蔬、植物、谷物、肉類等均可以采用,目前歐盟已將該法寫進(jìn)標(biāo)準(zhǔn):EN 15662-2007[28]。

QuECHERs方法在分離萃取喹諾酮類藥物時,有著較好的效果。Lombardo-Agüí等[29]采用QuECHERs前處理結(jié)合熒光檢測器同時測定魚中8種喹諾酮類藥物殘留,采用SampliQ QuECHERS Kit隔水獨(dú)立包裝鹽袋(含4 g硫酸鎂,1 g氯化鈉,1 g 檸檬酸鈉和0.5 g檸檬酸氫鈉)進(jìn)行凈化處理,該法檢出限0.1～4.7 μg/kg,回收率在72%～108%。Lombardo-Agüí等[30]還建立了QuECHERs前處理結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用測定蜂蜜樣品中8種喹諾酮類藥物的方法,該法檢出限在0.2～4.1 μg/kg。Rocha等[11]建立了QuECHERs前處理結(jié)合高分辨質(zhì)譜測定豬肉和豬肝中12種喹諾酮類藥物的方法,實(shí)驗(yàn)中采用33Box-Behnken響應(yīng)面分析法優(yōu)化了QuECHERs方法,萃取相的組成、萃取相中乙酸含量及萃取相使用量,最終選取50 mg(C18/PSA:1/1,w/w),5%冰醋酸(v/v),該法回收率在88.8%～112.2%之間,符合檢測要求。

綜上所述,QuECHERs方法能符合現(xiàn)代分析要求。為了簡化和優(yōu)化該方法在獸藥領(lǐng)域內(nèi)的應(yīng)用,很多研究者對傳統(tǒng)QuECHERs方法進(jìn)行了改進(jìn)以使分離喹諾酮類藥物時效果更好,均取得了較好的效果。

1.5其他

近年來,超臨界流體萃取(Supercritical Fluid Extraction,SFE)也成為熱點(diǎn)研究領(lǐng)域之一,流體在超臨界狀態(tài)時往往具有密度大、粘度低及擴(kuò)散系數(shù)大等優(yōu)點(diǎn),SFE正是基于上述原理將待測組分從基質(zhì)中洗脫出來的萃取方法,該方法集萃取和分離為一體,能顯著減少待測物損失。Shim等[31]建立了SFE前處理結(jié)合液相色譜測定雞蛋中4種喹諾酮類藥物的方法,首先使用超臨界CO2去除干擾雜質(zhì),隨后使用含20%甲醇的超臨界CO2萃取目標(biāo)物,該法回收率高達(dá)83%～96%。Shen等[32]建立了SFE前處理結(jié)合液相色譜測定雞肉中2種喹諾酮類藥物的方法,對比優(yōu)化了不同提取參數(shù)對萃取效率的影響,同樣選用含20%甲醇的超臨界CO2萃取目標(biāo)物,該法回收率也高達(dá)70%～87%之間。除此以外,免疫親和色譜(Immunoaffinity Chromatography,IAC)也被一些學(xué)者提出用于喹諾酮類藥物的檢測,亦取得較好的效果。該法基于抗原與抗體特異性、可逆性結(jié)合的特點(diǎn),首先將抗體與惰性基質(zhì)偶聯(lián)并裝柱,上樣后雜質(zhì)因無吸附而直接洗脫去除,再經(jīng)適當(dāng)溶劑洗脫待測物,該法選擇性強(qiáng),由其適用于復(fù)雜基質(zhì)。趙思俊等[33]建立了免疫親和色譜-HPLC-FLD測定雞肉中10種喹諾酮類藥物的方法,優(yōu)化了免疫親和色譜操作條件對樣品進(jìn)行凈化,該法回收率達(dá)74.7%～94.8%,檢出限達(dá)0.05～0.15 μg/kg。

2　動物源性食品樣品檢測技術(shù)

目前復(fù)雜基質(zhì)中喹諾酮類藥物的檢測技術(shù)已經(jīng)取得很大進(jìn)展,借助于靈敏度較高的分析儀器,如高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)、液質(zhì)聯(lián)用等,藥物檢出限和定量限均能滿足各國出入境、食品藥品監(jiān)督管理局及相關(guān)機(jī)構(gòu)的檢測要求。

2.1液相色譜質(zhì)譜法

在HPLC串聯(lián)的各種檢測器中,串聯(lián)質(zhì)譜由于靈敏度和選擇性高于其他檢測器,目前應(yīng)用較為廣泛。質(zhì)譜技術(shù)可以對通過色譜無法分離的物質(zhì)進(jìn)行定量,且具有較高的靈敏度和較寬的線性范圍。盡管如此,在定量時,實(shí)驗(yàn)者仍然需要盡可能地優(yōu)化色譜條件以對目標(biāo)化合物進(jìn)行分離,從而降低雜質(zhì)對待測物產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)。

目前各種食品基質(zhì)中喹諾酮類藥物的質(zhì)譜檢測方法均有報道。Han等[7]建立了同時測定牛奶中喹諾酮等38種獸藥殘留的方法,該方法定量8種喹諾酮類藥物,檢出限低至0.01～0.3 μg/kg,定量限達(dá)0.03～0.6 μg/kg,取得了檢測效果。孟哲等[8]也建立了高靈敏度和選擇性的測定乳制品中8種氟喹諾酮類和5種磺胺類獸藥殘留的高分辨質(zhì)譜法,喹諾酮定量限分別達(dá)到0.5～0.8 μg/L,能夠很好的滿足測定需求。Rocha等[11]采用高效液相串聯(lián)高分辨質(zhì)譜同時測定豬肉和豬肝中的12種喹諾酮類藥物,該法檢測限(CCα)達(dá)100.1 ～106.4 μg/kg,定量限(CCβ)到100.2～112.7 μg/kg,也能夠滿足測定要求。然而質(zhì)譜方法存在的最主要的問題就是儀器成本高且對操作人員要求極高,在多數(shù)基層食品安全檢測部門使用仍然較難,同時,由于質(zhì)譜儀器與許多流動相不“兼容”,流動相的選擇也相對“挑剔”。

2.2液相色譜法

反相高效液相色譜-紫外或熒光檢測器為經(jīng)典的喹諾酮類藥物的分析方法,目前在食品殘留領(lǐng)域仍然有著極其廣泛的應(yīng)用。但無論熒光檢測器還是DAD檢測器通常只能用作定量分析,而無法直接提供待測物的結(jié)構(gòu)或化學(xué)組成。

鄧思維等[2]建立了納米纖維固相萃取-高效液相色譜-熒光檢測麻辣燙湯液中喹諾酮類藥物的方法,樣品經(jīng)固相萃取凈化后,上機(jī)檢測,激發(fā)波長280 nm,發(fā)射波長450 nm,該法定量限(LOQ)為3.9～18μg/L。Jiménez等[9]建立了雞蛋中9種喹諾酮類殘留的確證方法,0.01mol/L草酸水溶液和乙腈作為流動相,柱溫25 ℃,馬波沙星激發(fā)波長為297 nm,發(fā)射波長507 nm,諾氟沙星、環(huán)丙沙星、單諾沙星、恩諾沙星、沙拉沙星和雙氟沙星激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為280 nm和458 nm,惡喹酸激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為263 nm和380 nm,氟沙星則分別為248 nm和361 nm,該法檢出限和定量限分別為0.2～19.8 μg/kg和0.4 ～33.5 μg/kg。Sun等[13]也采取高效液相色譜串聯(lián)熒光檢測器(Fluorescence Detector,FLD)測定了魚中多種喹諾酮類殘留,激發(fā)波長和發(fā)射波長分別選取為290 nm和480 nm,定量限在0.06～0.22 μg/kg。Moema等[19]則采取了HPLC-DAD檢測了雞肝中6種喹諾酮類藥物殘留,檢測波長選定在280 nm,方法定量限5～19μg/kg。

液相色譜法過程中待測物在色譜中實(shí)現(xiàn)分離是必不可少的一環(huán),不同填料的色譜柱應(yīng)用于該類藥物的分離均有報道,目前反相柱(由其是C18或者C8柱)應(yīng)用較廣。流動相也是實(shí)現(xiàn)喹諾酮類藥物分離的重要影響因素之一,最常采用的流動相組合為乙腈-水或甲醇-水等。除此以外,鄧思維等[2]也采用甲醇-水-磷酸三相組合(25∶75∶0.1,v/v)的流動相進(jìn)行分離,取得了較好的分離效果。Jiménez等[9]采用0.01 mol/L草酸水溶液和乙腈作為流動相,38 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了對9種喹諾酮類藥物的充分分離。調(diào)節(jié)流動相pH也是保證峰形,改善分離度的影響因素之一,因此很多學(xué)者在建立喹諾酮類藥物分析方法的同時,也常采用甲酸或者乙酸或者引入緩沖鹽以達(dá)到調(diào)節(jié)并控制pH的良好效果,鄧思維等[2]采用三乙胺溶液調(diào)節(jié)pH至2.8用于促進(jìn)喹諾酮藥物的電離,改善峰形拖尾,提高分離效果。除了上述影響因素以外,不同的梯度條件也是極其重要的。

2.3毛細(xì)管電泳分析方法

毛細(xì)管電泳方法也是一種較好的定量分析方法,在樣品量很小的時候具有較多優(yōu)勢,該方法分離效能高、試劑、耗材消耗少,同時能實(shí)現(xiàn)多物質(zhì)的同時檢測。Ibarra等[24]采用毛細(xì)管電泳法同時測定了牛奶中7種喹諾酮類藥物,分別采用40 mmol/L 磷酸鹽緩沖液作為流動相,在15 kV電壓下,10 min內(nèi)7種喹諾酮類抗生素取得了很好的分離,該法檢出限在9～12 μg/L。周梅仙等[34]建立了高效毛細(xì)管電泳檢測雞蛋中環(huán)丙沙星、氧氟沙星和恩諾沙星3 種喹諾酮類抗生素的測定方法,緩沖液為pH8.53的30 mmol/L Na2B4O7-10 mmol/L KH2PO4溶液,分離電壓為18 kV,溫度為25 ℃,選定檢測波長280 nm,3種抗生素在12 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)基線分離。

2.4其他分析方法

免疫分析測定法是一種較新型的檢測方法,該法具有專屬性高、靈敏度高、操作簡易、成本低的優(yōu)點(diǎn),在日常分析中應(yīng)用非常廣泛。該方法基于抗原與抗體相結(jié)合的原理,可在較短時間內(nèi)實(shí)現(xiàn)對少量殘留物質(zhì)的測定。關(guān)于免疫分析法測定喹諾酮類藥物已有較多報道,Jiang等[35]建立了雙色酶聯(lián)免疫吸附法檢測牛奶中喹諾酮類藥物的方法,該方法有較大的創(chuàng)新性,文章中首創(chuàng)使用兩種不同的酶:堿性磷酸酶(ALP)和辣根過氧化物酶(HRP)同時檢測兩種不同低分子量的化學(xué)成分,該法對喹諾酮類的檢出限低至2.4 ng/mL。

3　結(jié)論和展望

在過去5年中,不同食品基質(zhì)中喹諾酮類藥物殘留的不同分析檢測方法相應(yīng)已被開發(fā),無論在食品、環(huán)境樣品及藥物分析中均有相關(guān)報道。在分析過程中,研究的熱點(diǎn)主要集中在待測物提取和凈化步驟的改進(jìn)。其中最能實(shí)現(xiàn)該目標(biāo)的前處理方法一般認(rèn)為是QuEChERS和SPE技術(shù),這兩種技術(shù)的優(yōu)勢都包括低試劑消耗及高通量,因此,這些技術(shù)有望在未來取得較大突破。

目前提出的分析方法主要基于HPLC串聯(lián)(多級)質(zhì)譜,因此在高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀上取得相應(yīng)進(jìn)展也將有助于我們?nèi)〉酶玫臍埩艉Y查目的。目前的研究趨勢是質(zhì)譜檢測器與現(xiàn)代化的色譜技術(shù)(比如超高效液相色譜)聯(lián)用,同時飛行時間質(zhì)譜儀(Time of Flight Mass Spectrometer,TOF)和軌道阱質(zhì)譜儀(Orbitrap Mass Spectrometer)也是更為有效的檢測工具,隨著儀器的飛速發(fā)展,痕量有機(jī)物包括喹諾酮類物質(zhì)的定性定量及多殘留篩查均取得了較大的進(jìn)步,但這些儀器仍然具備價格昂貴且運(yùn)行維護(hù)成本高的問題,為了降低成本,縮短分析時間,很多微生物學(xué)測定方法、免疫法及生物傳感器測定方法被相繼開發(fā)出來,儀器的小型化及自動化同樣也是研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域之一,相信隨著研究的進(jìn)展,在不久的將來在分析儀器及前處理領(lǐng)域均會取得較大的突破。

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Research progress in pretreatment technologies and detection methods of quinolones residues in foods

ZHANG Yuan1,2,ZHOU Wei-e2,LI Shao-hui2,ZHENG-Yang2,ZHOU Yu1,ZHANG Feng2,FENG Xue-song1,*

(1.School of Pharmacy of China Medical University,Shenyang 110013,China;2.Institute of Food Safety of Chinese Academy of Inspection and Quarantine,Beijing 100176,China)

Quinolones residue is currently one of important problems in animal-derived food safety. The detection of quinolones in a complex food matrix mainly relies on an effective pretreatment method and precision instruments. This paper summarized the research background and status of quinolones,and reviewed the research progress in China and other countries on pretreatment technologies,such as liquid-liquid extraction,solid-phase extraction,matrix solid-phase dispersion,QuECHERs,supercritical fluid extraction and immunoaffinity chromatography and detection methods,such as high performance liquid chromatography-tandem mass,high performance liquid chromatography,capillary electrophoresis and immunoassay,this review could provide reference of monitoring quinolones residues in food. The review suggests that SPE and QuECHERs are most promising pretreatment methods,and the development of mass-spectrometric technique and the miniaturization of instrument will be a development trend.

food;pretreatment technology;detection;quinolones residues

2015-04-23

張?jiān)?1990-),男,在讀碩士,研究方向:分析化學(xué)及藥物分析,E-mail:13840149878@163.com。

馮雪松(1968-),男,博士,副教授,研究方向:藥物分析,E-mail:voncedar@126.com。

國家重大科學(xué)儀器設(shè)備開發(fā)專項(xiàng)項(xiàng)目(2012YQ14000806);國家質(zhì)檢總局科技計劃專項(xiàng)(2014Ik084);北京市科技計劃課題(Z141100002614020);質(zhì)檢公益性行業(yè)科研專項(xiàng)分項(xiàng)目(201410088-02);遼寧省科學(xué)技術(shù)廳自然科學(xué)基金(201202252)。

TS251.1

A

1002-0306(2016)05-0378-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.05.069