酶聯(lián)免疫法做抗體檢測時應注意的事項

近幾年來，隨著養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，畜禽抗體水平的檢測越來越受到廣大養(yǎng)殖戶的重視。作為獸醫(yī)實驗室工作人員，筆者結合自己的工作實踐，現(xiàn)將酶聯(lián)免疫法做抗體檢測時應注意的事項總結如下：

1　試驗前應注意的事項

1.1試驗前應先檢查試劑盒是否過期，試劑盒內(nèi)的試劑是否因為瓶蓋松動、破裂等因素造成污染或變質(zhì)。如有以上現(xiàn)象則本試劑盒不能用。

1.2由于試劑盒是在2℃～8℃下保存的，所以整套試劑在使用前應平衡至室溫。室溫為22℃～25℃。

1.3檢查樣本血清是否保存完好，是否溶血或污染。若因保存不好發(fā)生變質(zhì)或樣本血清本身就因為采集不當而發(fā)生溶血或污染則可能影響檢測結果，檢測意義就不大了。

1.4做試驗前應先對樣本血清進行編號和標記，使其與反應板上的編號一一對應。一般一個反應板一次最多可做90份樣本血清，這樣就可能涉及到多個養(yǎng)殖戶，所以我們要對樣本進行編號和標記，使其與養(yǎng)殖戶的畜禽一一對應起來，以便對試驗結果進行分析。

2　試驗過程中應注意的事項

2.1做試驗時一定要設定陽性對照孔、陰性對照孔和空白對照孔，以便確定試驗是否有效。

2.2每次加樣時要更換滴頭，以免造成交叉污染。特別是在加樣本血清時，一定要加一個樣本血清換一次滴頭。

2.3每次加樣所用的時間應盡量縮短，以避免因加樣時間過長而出現(xiàn)的前后加樣反應時間不一致導致結果出現(xiàn)誤差。

2.4在溫育反應時，溫育30 min誤差應控制在±2 min以內(nèi)，溫育10 min誤差應控制在±1 min以內(nèi)，避免因反應時間縮短或延長而造成整體顯色降低或升高。

2.5每次洗板時，不管是手洗還是洗板機洗，洗完后都要把反應板拍干。

2.6每次試驗溫育反應所用的封板膜不能重復使用，試劑瓶蓋也不能交叉使用，以免造成交叉污染，從而影響試驗數(shù)據(jù)的準確性。

2.7試驗中所用的終止液屬于強腐蝕性物質(zhì)，一定要做好個人防護，避免其掉到身體或衣物上。

2.8在使用酶標儀前，一定要先把酶標儀的開關打開，檢查系統(tǒng)是否能夠正常運行。并且在檢測數(shù)據(jù)前要預熱30 min。

3　試驗完成后應注意的事項

3.1試驗完成后，應先根據(jù)試劑盒說明書上提供的指標，對應試驗數(shù)據(jù)判定試驗是否有效。（使用單波長測定時，各孔OD值應先減去空白對照孔OD值，再進行結果分析。）如未達到指標，則試驗無效需要重做。

3.2試驗完成后，試劑開封如未用完，反應板條應和干燥劑一起放入自封袋內(nèi)密封2℃～8℃保存，其它液體組份使用后瓶蓋擰緊置2℃～8℃保存。開封的試劑盒應在1周內(nèi)用完。

3.3試驗結束后，在確定本次試驗有效的情況下，根據(jù)前的面編號對各個養(yǎng)殖戶畜禽的抗體水平進行分析。對分析結果和原始數(shù)據(jù)做好記錄并保存，以備以后查詢。

3.4不同物種的試劑盒不能用于其它物種樣品的檢測，不同批號的試劑盒中的組份不能混用。

3.5試驗結束后，所有樣本、洗棄液和各種廢棄物都應按傳染物做好無害化處理。

054200河北省內(nèi)丘縣農(nóng)業(yè)局魏永杰