顯齒蛇葡萄葉有效成分的提取工藝研究

顯齒蛇葡萄為葡萄科蛇葡萄屬的一種野生木質落葉藤本植物，又名白茶、藤茶、龍須茶、甘露茶等。2013年12月24日國家衛(wèi)生計生委發(fā)布了《關于批準顯齒蛇葡萄葉等3種新食品原料的公告》，確定了顯齒蛇葡萄葉可以作為新資源食品來使用。顯齒蛇葡萄葉中黃酮化合物含量高達43.4~45.5%，富含二氫楊梅素、槲皮素、顯齒蛇葡萄素、山奈酚等成分。由于人體不能直接合成黃酮化合物，只能從食品中間接獲得，因此研究植物中黃酮化合物的提取方法有重大意義。本試驗采取超聲波提取法，對顯齒蛇葡萄黃酮化合物的提取工藝條件進行篩選，以期獲得顯齒蛇葡萄黃酮化合物超聲提取的優(yōu)化工藝條件，為顯齒蛇葡萄食用及藥用資源的合理開發(fā)提供一定的依據(jù)。

實驗材料,顯齒蛇葡萄葉干品（產(chǎn)地為湖南省）、蘆丁標準品、無水乙醇、硝酸鋁、亞硝酸鈉等，以上試劑均為分析純，原料及試劑均由吉林益健生物科技有限公司提供。KQ250DB型數(shù)控超聲波清洗器、QUINTIX124-1CN型分析天平、HH-6型恒溫水浴鍋、TDZ5-WS低速臺式離心機、UV-1750型紫外可見分光光度計。

試驗方法,選取顯齒蛇葡萄干品，粉碎過60目篩，準確稱取5.00g干粉置于圓底燒瓶中，以乙醇溶液作為提取溶劑，分別考查液料比、提取劑濃度、超聲溫度、超聲時間、超聲功率對黃酮化合物提取效果的影響。具體條件設為：液料比設為10:1、20:1、30:1、40:1、50:1、60:1（mL/ g），乙醇濃度設為25%、35%、45%、55%、65%、75%、100%，超聲溫度設為25℃、35℃、45℃、55℃、65℃、80℃，超聲時間設為10、25、40、55、70、85min，超聲功率設為120、150、180、210、240、270W。經(jīng)過超聲波提取后，過濾、離心、稀釋，利用硝酸鋁-亞硝酸鈉顯色法測定溶液吸光度，計算顯齒蛇葡萄中黃酮化合物的得率。以上不同條件實驗均平行3次，結果取平均值。

實驗結果分析,液料比的影響：提取劑的體積直接關系到物料有效成分的浸出量，當液料比小于30:1時，得率明顯上升，液料比為30:1時，得率達到12.7%，當液料比大于30:1時，其得率上升趨勢變緩。從節(jié)約能耗的角度出發(fā)，液料比確定為30:1最佳。提取劑濃度的影響：當提取劑乙醇的濃度變化時，極性也隨之變化，對提取效果有一定影響。乙醇濃度在65%左右時得率最大，可達到13.05%，當乙醇濃度升高至75%或100%時，得率反而降低?？赡苁怯捎谝掖紳舛冗^高使非極性物質也隨之溶出，導致黃酮化合物得率下降。因此確定乙醇濃度為65%時較佳。超聲溫度的影響：當溫度小于65℃時，隨著溫度的升高得率有所增加，當溫度超過65℃時，得率逐漸下降，同時提取物的顏色逐漸變深?？赡苁怯捎跍囟冗^高使部分黃酮化合物結構被破壞，同時葉綠素溶出使顏色變深，因此確定超聲溫度為65℃為宜。

超聲時間的影響：當超聲時間在40min左右時得率最大為13.93%，延長超聲時間，得率反而降低。可能是由于超聲時間過短黃酮化合物溶解不充分，超聲時間過長，溶解出來的化合物易被氧化。綜合時間、能耗等因素，確定超聲時間為40min為宜.超聲功率的影響：當超聲功率小于240W時，得率隨著功率的增加也逐漸提高，超聲功率大于240W后，得率反而下降，可能是由于超聲功率太高對分子造成一定程度的破壞。因此確定超聲功率應控制在240W以內。

從顯齒蛇葡萄中提取黃酮化合物的常用方法主要有五種：熱浸提法、微波提取法、超聲波提取法、超臨界萃取法、逆流提取法。超聲波提取法是通過超聲振蕩產(chǎn)生空化效應、擾動效應，對提取物進行攪拌和破碎，加速有效成分的擴散釋放，具有易操作、省時、提取率高、結構破壞性小的優(yōu)點，該方法被廣泛用于食品原料中有效成分的提取。本實驗得到的超聲法提取顯齒蛇葡萄黃酮化合物的最佳條件為：液料比為30:1；提取劑乙醇的濃度為65%；超聲溫度為65℃，超聲時間40min；超聲功率240W。用以上工藝條件進行超聲提取，得率可達15,11%。以上數(shù)據(jù)可為顯齒蛇葡萄黃酮化合物相關產(chǎn)品的開發(fā)提供參考。

□長春醫(yī)學高等?？茖W校 汲軍 王丹丹

吉林省中醫(yī)中藥研究院 趙昱偉