桑鳳梅，張士金，竇晨輝

(鄭州人民醫(yī)院中醫(yī)科，鄭州 450003)

柴芩承氣湯對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠內(nèi)毒素、白細(xì)胞介素-6的影響*

桑鳳梅，張士金，竇晨輝

(鄭州人民醫(yī)院中醫(yī)科，鄭州 450003)

目的:研究柴芩承氣湯對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠內(nèi)毒素、白細(xì)胞介素-6的影響。方法:選取36只SD大鼠，按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，觀察各組動(dòng)物血漿、肺組織、回腸組織病理的變化，分別測(cè)定內(nèi)毒素、白細(xì)胞介素-6在不同病理以及不同時(shí)間段治療的濃度變化。結(jié)果:治療后，SAP+柴芩承氣湯治療組大鼠內(nèi)毒素濃度的變化(0.077±0.013)Eu/mL顯著低于模型組的濃度(3.31±0.698)Eu/mL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療后，SAP+柴芩承氣湯治療組大鼠白細(xì)胞介素-6濃度的變化(45.17±6.13)pg/ mL顯著低于模型組的濃度(87.31±5.98)pg/mL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:柴芩承氣湯對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠內(nèi)毒素、白細(xì)胞介素-6具有一定的影響，值得廣泛推廣使用。

柴芩承氣湯;重癥急性胰腺炎;內(nèi)毒素;白細(xì)胞介素-6

重癥急性胰腺炎(SAP)在發(fā)病過(guò)程中會(huì)釋放大量促炎因子，當(dāng)失去促炎因子與抗炎因子之間的平衡時(shí)，炎性反應(yīng)綜合癥便出現(xiàn)，進(jìn)而影響臟器功能衰竭［1］。SAP具有病情險(xiǎn)惡、發(fā)病快、致死亡率高的特點(diǎn)［2］。為探討其治療重癥急性胰腺炎的可能機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)主要觀察柴芩承氣湯對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠內(nèi)毒素、白細(xì)胞介素-6的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 選取36只SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量230 g～280 g之間，由四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 柴芩承氣湯組成:蒲公英、金銀騰各25 g，黃芩、柴胡各12 g，金鈴子、陳皮、青香藤、大黃、芒硝各8 g，沖服［3］。注射用水于實(shí)驗(yàn)前按照1 g生藥/mL配成。

1.1.3 試劑 采用ChAT進(jìn)行試劑盒檢測(cè)，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前結(jié)合生理鹽水配成3%的牛膽酸溶液，保存時(shí)應(yīng)避免光的直射［4］。

1.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 大學(xué)科技實(shí)業(yè)總公司提供GC-911r放射免疫計(jì)數(shù)器，日本SANYO公司提供超低溫冰箱，由海市醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所提供鱟試劑盒。

1.2 方法

1.2.1 制作SAP模型 喂養(yǎng)大鼠1周培養(yǎng)適應(yīng)性，在進(jìn)行試驗(yàn)前半天禁止入食但不禁水。注射麻醉腹腔進(jìn)行常規(guī)消毒之后，在腹部正中線切入長(zhǎng)度約為3.5 cm的切口，撥開(kāi)肝葉確鑿十二指腸，取出長(zhǎng)度約為4.5 cm左右，翻動(dòng)十二指腸之后發(fā)現(xiàn)片狀胰腺，淡黃色或者半透明乳白的為膽胰管［5］。十二指腸進(jìn)行固定，伸直膽胰管，見(jiàn)十二指腸乳頭開(kāi)口采用留置針刺破腸壁，當(dāng)發(fā)現(xiàn)十二指腸稍微高于腸壁時(shí)將針尖抬高，進(jìn)入到膽總管之后，沿其方向進(jìn)針約為2.8 cm，針芯退出以后，黃色膽汁流出［6］。夾住接近肝端使用微型血管夾，泵入3%的牛膽酸溶液，微泵標(biāo)準(zhǔn)為0.1 mL/100 g，在5 min內(nèi)泵完［7］。保留5 min留置針與微血管夾之后，將留置針拔出，微血管夾打開(kāi)。在大鼠胰腺表現(xiàn)出血、壞死以及水腫等癥狀時(shí)，造模極為成功。

1.2.2 制作假手術(shù)模型 術(shù)前準(zhǔn)備進(jìn)入至腹腔操作，刺破腸壁后保持5 min的留置針，不需要藥物注射。

1.2.3 分組 按照隨機(jī)數(shù)表法分為假手術(shù)對(duì)照組、SAP模型組、SAP+柴芩承氣湯治療組3組各12只。假手術(shù)對(duì)照組在模型造模成功后注射生理鹽水共4 mL于皮下，每2 h 1次，其中應(yīng)將0.4 mL/ 100 g的生理鹽水經(jīng)胃管注入，每1 h 1次，在5 h后取血經(jīng)腹腔靜脈并進(jìn)行檢驗(yàn)。SAP模型組在模型成功后，注射生理鹽水共4 mL于皮下，每2 h 1次，其中應(yīng)將0.4 mL/100 g的生理鹽水經(jīng)胃管注入，每1 h 1次，在5 h后取血經(jīng)腹腔靜脈并進(jìn)行檢驗(yàn)。SAP +柴芩承氣湯治療組用配置好的柴芩承氣湯治療SAP大鼠，在制造模型成功后的12 h灌入配置好的柴芩承氣湯1 mL/100 g。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察各組間的生化指標(biāo)、淀粉酶、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶和血清乳酸脫氫酶。觀察各組動(dòng)物血漿、肺組織、回腸組織病理的變化，分別測(cè)定內(nèi)毒素、白細(xì)胞介素-6在不同病理以及不同時(shí)間段治療的濃度變化。制作組織動(dòng)物血漿、肺組織、回腸組織，加入 PBS緩沖液后采用勻漿器攪拌均勻，在低溫高速離心機(jī)中分離出上清液，并分裝置入小離心管在－75℃的冰箱中保存并檢測(cè)蛋白。內(nèi)毒素水平的測(cè)定采取鱟試劑偶氮基質(zhì)顯色方法，白細(xì)胞介素-6的測(cè)定采取放射免疫法。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組、模型組、SAP+柴芩承氣湯治療組生化指標(biāo)比較

表1顯示，模型組的淀粉酶、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、血清乳酸脫氫酶均高于對(duì)照組和SAP+柴芩承氣湯治療組水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表1 對(duì)照組、模型組、SAP+柴芩承氣湯治療組生化指標(biāo)比較(±s)

表1 對(duì)照組、模型組、SAP+柴芩承氣湯治療組生化指標(biāo)比較(±s)

鼠數(shù) 對(duì)照組 模型組 SAP+柴芩承氣湯治療組t淀 粉 酶 (AMY)(IU/L) 12 842.6±68.5 3097.6±1032.2 1132.1±87.3 75.1099丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)(IU/L) 12 67.6±11.4 169.9± 38.1 53.6± 9.8 23.9698天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)(IU/L) 12 171.4±10.9 992.4± 164.2 186.2±52.5 49.8331血清乳酸脫氫酶(LDH)(IU/L) 12 656.3±98.4 1412.1± 249.4 200.1±25.3 38.0762

2.2 對(duì)照組、模型組、SAP+柴芩承氣湯治療組內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果

表2顯示，模型組內(nèi)毒素表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組和SAP+柴芩承氣湯治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表2 對(duì)照組、模型組、SAP+柴芩承氣湯治療組血漿、肺和回腸的內(nèi)毒素濃度比較(±s，Eu/mL)

表2 對(duì)照組、模型組、SAP+柴芩承氣湯治療組血漿、肺和回腸的內(nèi)毒素濃度比較(±s，Eu/mL)

組別 鼠數(shù) 血漿 肺組織 回腸組織對(duì)照 組12 0.059±0.007 2.51±0.18 2.58±0.32模 型 組 12 0.364±0.315 4.54±0.31 5.01±0.81 SAP+柴芩承氣湯治療組 12 0.101±0.019 2.16±0.41 2.89±0.61統(tǒng) 計(jì) 值 57.9768 6.4834 8.0492 P 0.0000 0.0391 0.0179

2.3 對(duì)照組、模型組、SAP+柴芩承氣湯治療組白細(xì)胞介素-6檢測(cè)結(jié)果

表3顯示，模型組白細(xì)胞介素-6的濃度表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組和SAP+柴芩承氣湯治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.4 治療后不同時(shí)間段各組大鼠內(nèi)毒素變化

表4顯示，治療后SAP+柴芩承氣湯治療組大鼠內(nèi)毒素濃度的變化(0.077±0.013)Eu/mL顯著低于模型組濃度(3.31±0.698)Eu/mL，且較后時(shí)間段濃度變化均顯著低于前時(shí)段(1.467±0.058)Eu/ mL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表3 對(duì)照組、模型組2組、SAP+柴芩承氣湯治療組血漿、肺和回腸的白細(xì)胞介素-6濃度比較(±s，pg/mL)

表3 對(duì)照組、模型組2組、SAP+柴芩承氣湯治療組血漿、肺和回腸的白細(xì)胞介素-6濃度比較(±s，pg/mL)

別 鼠數(shù) 血漿 肺組織 回腸組織對(duì)照組組0.0000 0.0000 0.0000 12 6.49± 1.07 4.51±0.17 9.58±0.36模 型 組 12 115.36±16.31 34.54±1.31 43.01±1.61 SAP+柴芩承氣 湯治療組 12 68.41± 7.14 19.97±2.41 20.14±2.35統(tǒng) 計(jì) 值 45.9002 42.4461 25.5301 P

表4 治療后不同時(shí)間段各組大鼠內(nèi)毒素的變化(±s，Eu/mL)

表4 治療后不同時(shí)間段各組大鼠內(nèi)毒素的變化(±s，Eu/mL)

組別 鼠數(shù) 12 h 24 h 48 h對(duì)照組12 0.033±0.009 0.024±0.012 0.030±0.0 t P 08 0.3471模型組12 1.386±0.036 1.799±0.587 3.31±0.698 9.5359 0.0000 06 0.96 SAP+柴芩承 氣 湯 治 療 組 12 1.467±0.058 0.643±0.052 0.077±0.013 81.0091 0.0000

2.5 治療后不同時(shí)間段各組大鼠白細(xì)胞介素-6的變化

表5顯示，經(jīng)治療后SAP+柴芩承氣湯治療組大鼠白細(xì)胞介素-6濃度的變化(45.17±6.13)pg/ mL顯著低于模型組濃度(87.31±5.98)pg/mL，且較后時(shí)間段濃度變化均顯著低于前時(shí)段(68.67± 6.58)pg/mL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

柴芩承氣湯具有大承氣湯與大柴胡湯的共同功效，大柴胡湯主要針對(duì)偏重陽(yáng)明的患者，大承氣湯具有燥、實(shí)、痞滿、堅(jiān)的特點(diǎn)，為此具備消除痞滿、通里攻下的功效以及活血涼血、清熱解毒的功能，此方法對(duì)于重癥急性胰腺炎的治療已經(jīng)逐漸在臨床中得到認(rèn)可［8-9］。

表5 治療后不同時(shí)間段各組大鼠白細(xì)胞介素-6的變化(±s，pg/mL)

表5 治療后不同時(shí)間段各組大鼠白細(xì)胞介素-6的變化(±s，pg/mL)

組別 鼠數(shù) 12 h 24 h 48 h t P .9255模型組12 69.86±7.36 91.43±5.87 87.31±5.98 6.3743 0.0000對(duì)照組12 20.53±5.09 21.14±6.15 20.32±5.76 0.0946 0 SAP+柴芩承 氣 湯 治 療 組 12 68.67±6.58 60.43±3.52 45.17±6.13 9.0522 0.0000

相關(guān)研究表明，柴芩承氣湯具有排除腸胃積滯、去除腸道內(nèi)毒素的功效，使腸道的免疫屏障得以保護(hù)［10-11］。在本次研究中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)柴芩承氣湯治療后大鼠的血漿(0.101±0.019)Eu/mL、肺組織(19.97 ±2.41)Eu/mL和回腸組織(2.89±0.61)Eu/mL的毒素濃度均得以明顯降低，與相關(guān)研究者的觀點(diǎn)一致。提示柴芩承氣湯可以很好地使內(nèi)毒素的生產(chǎn)得以減少，進(jìn)而吸收、快速滅活以及排泄的功能，有利于減輕由于內(nèi)毒素導(dǎo)致的炎性反應(yīng)綜合征和急性肺遭受損害［12］。

通過(guò)本次研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠實(shí)施柴芩承氣湯治療后，其血漿(68.41±7.14)pg/ mL、肺組織(19.97±2.41)pg/mL和回腸(20.14± 2.35)pg/mL的白細(xì)胞介素-6濃度均有所下降。白細(xì)胞介素-6能夠快速反應(yīng)炎癥，促炎因子會(huì)因此進(jìn)而引發(fā)一系列甚至放大病理的炎癥反應(yīng)，最終致全身出現(xiàn)炎癥反應(yīng)綜合癥以及多器官功能受損。相關(guān)研究顯示，白細(xì)胞介素-6重癥急性胰腺炎在發(fā)病中起舉足輕重的作用，其白細(xì)胞介素-6升高，對(duì)重癥急性胰腺炎的發(fā)病機(jī)制危險(xiǎn)越大，因此在發(fā)病后應(yīng)該及時(shí)對(duì)白細(xì)胞介素-6的含量進(jìn)行檢測(cè)，可以對(duì)重癥急性胰腺炎的嚴(yán)重程度進(jìn)行有效評(píng)價(jià)［13～14］。

相關(guān)研究表明，柴芩承氣湯具有抑制多種細(xì)胞尤其是白細(xì)胞介素-6以及毒素的活性及產(chǎn)生，進(jìn)一步緩解重癥急性胰腺炎由于炎癥帶來(lái)的發(fā)炎，降低組織器官受損的概率［15］。在本次研究中也發(fā)現(xiàn)，柴芩承氣湯治療重癥急性胰腺炎大鼠，在不同時(shí)間段的毒素、白細(xì)胞介素-6的濃度均在不同程度呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，表明柴芩承氣湯具有改善胰腺組織病理學(xué)變化的功能，逐漸緩解病情，符合相關(guān)研究者的觀點(diǎn)。

綜上所述，柴芩承氣湯對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠內(nèi)毒素、白細(xì)胞介素-6的具有一定的影響，值得廣泛推廣使用。

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Effects of Chaiqin Chengqi Decoction on Endotoxin and Interleukin-6 in Rats with Severe Acute Pancreatitis

SANG Feng-mei，ZHANG Shi-jin，DOU Chen-hui
(Zhengzhou People’s Hospital of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450003，China)

Objective:To study the Chaiqing Chengqi decoction influence toxin and interleukin-6 on rats with severe acute pancrentitis.Methods:36 SD rats，according to a random number table divided into three groups.Observed in plasma，lung tissue of animals in each group.Endotoxin，interleukin-6 concentrations were measured in different pathological changes and the different time periods of treatment.Results:After treatment，SAP + changes in toxin concentration in Chaiqin-Chengqi Treated rats(0.077 ±0.013)Eu/mL concentration was significantly lower than the model group(3.31 ±0.698)Eu/mL，the difference has statistically significance.After treatment，SAP +changes in interleukin-6 concentrations Chaiqingchengqi Treated rats(45.17 ±6.13)pg/mL concentration was significantly lower than the model group(87.31±5.98)pg/mL，the difference has statistically significance.Conclusion:Chaigin Chengqi Decoction decoction on rats with severe acute toxin within the interleukin-6 has a certain influence，which worth widely used.

Chaigin Chengqi Decoction;Severe acute pancreatitis;Endotoxin;Interleukin-6

R285.5

:B

:1006-3250(2016)03-0345-03

2015-07-19