王海燕，黃 琳，胡若飛，張 勇

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麥冬皂苷提取分離及分析方法研究進(jìn)展

王海燕，黃 琳，胡若飛，張 勇

(湖北文理學(xué)院 化學(xué)工程與食品科學(xué)學(xué)院，湖北 襄陽(yáng) 441053)

麥冬作為一味重要的傳統(tǒng)滋陰中藥，具有廣泛的藥理活性. 其主要生物活性成分之一的麥冬皂苷日益引起廣大關(guān)注，涌現(xiàn)出多種提取分離及定量分析方法. 文章綜述了麥冬皂苷的三種主要提取方法：溶劑提取法、酶提取法和超聲提取法，同時(shí)分析了常見的麥冬皂苷定量方法，以期為麥冬及其皂苷類活性成分的深入研究和開發(fā)利用提供參考.

麥冬；麥冬皂苷；提取分離；定量分析

麥冬()是一味非常重要的傳統(tǒng)滋陰中藥，在2010版《中國(guó)藥典》中收錄的有兩大類，一類為麥冬()，即百合科沿階草屬植物麥冬()的干燥塊根；另一類為山麥冬()，包括湖北麥冬()和短葶山麥冬的干燥塊根[1]. 麥冬主要活性成分有甾體皂苷、多糖和黃酮[2]，其中甾體皂苷以其廣泛的生物活性受到研究者的廣泛關(guān)注，其主要苷元為薯蕷皂苷元和魯斯可皂苷元[3]. 目前，已經(jīng)分離并鑒定出的皂苷化合物有: 麥冬皂苷A、B、B'、C、C'、D、D'、F、G、H、K、L、M、N、O、P、Q、Ｒ、S[4]、14-羥基麥冬皂苷 C[5]、Ⅰ、(25R)-螺甾-5烯-3 β，14 α-二醇-3-O-α-L-吡喃木糖基(1→3)-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)]-α-L-吡喃鼠李糖苷[6]、慈溪皂苷A和B等. 現(xiàn)將其主要提取分離及分析方法進(jìn)展綜述如下.

1 麥冬的提取分離

1.1溶劑提取法

麥冬的甾體皂苷元因其多具有較好的結(jié)晶態(tài)，可溶于氯仿、石油醚等溶劑中，而在水中不易溶，幾乎不溶于或難溶于苯、乙醚等溶劑. 但若將其與糖尤其是寡糖結(jié)合成皂苷后，則一般可溶于水，尤其更溶于熱水、烯醇中，故可用親水性溶劑對(duì)其進(jìn)行回流提取. 錢斯日古楞等[7]利用乙醇提取麥冬皂苷. 結(jié)果顯示，影響提取因素的主次順序依次為提取溫度、提取時(shí)間和乙醇濃度. 最優(yōu)條件為：60℃，50%乙醇提取2h. 周躍華等[8]得到的充分提取麥冬總皂苷的優(yōu)化條件為：麥冬加 10倍量 80%乙醇，熱回流提取 3次，每次 1h. 林韻涵等[9]采用正交試驗(yàn)優(yōu)選湖北麥冬總皂苷提取物的最佳提取工藝為：10 倍量 70% 乙醇加熱回流提取 3 次，每次 2 h. 進(jìn)一步選用步驟少、工藝簡(jiǎn)單、操作性強(qiáng)且易產(chǎn)業(yè)化的 D101 樹脂進(jìn)行純化，發(fā)現(xiàn)50%~70%乙醇對(duì)總皂苷的洗脫效果最好，可以選擇 70% 的乙醇作為洗脫劑. 鄧惠方等[10]以10 kg麥冬為原料，采用甲醇浸提法提取，經(jīng)過(guò)脫脂、脫糖處理后，通過(guò)硅膠柱層析法分離純化麥冬皂苷D，以氯仿-甲醇為洗脫劑，得到麥冬皂苷D. 經(jīng)高效液相色譜檢測(cè)，純度為91.2%. 結(jié)果表明用硅膠柱層析法可快速分離出純度較高的麥冬皂苷D. 周躍華等[11]比較了浙麥冬總皂苷純化用大孔樹脂的型號(hào)及不同濃度乙醇作為洗脫劑對(duì)純化的影響，結(jié)果表明麥冬總皂苷用D-101樹脂吸附、70%乙醇洗脫，取得了較好的效果. 劉霞等[12]也應(yīng)用D- 101大孔吸附樹脂提取湖北麥冬中總皂苷，得到含量為81.15%的總皂苷. 車仁國(guó)等[13]則利用AB-8大孔吸附樹脂吸附麥冬總皂苷，用乙醇梯度洗脫，確定了AB-8大孔吸附樹脂吸附容量為53.16 mg/mL、乙醇濃度為80%時(shí)，洗脫麥冬總皂苷效果最佳，純化效果良好. 簡(jiǎn)言之，采用乙醇提取法、硅膠柱層析法、大孔吸附樹脂吸附法提取輔以溶劑洗脫可有效分離麥冬總皂苷及其單體物質(zhì).

1.2酶提取法

麥冬的組成成分復(fù)雜，包含的植物纖維、淀粉等非活性成分在常規(guī)提取過(guò)程中往往影響活性成分的浸出. 由于酶具有高效、專一性強(qiáng)、催化條件溫和等優(yōu)勢(shì)，不僅能提高有效活性成分的含量，而且可以減少污染物排放，故可用酶來(lái)提取麥冬的有效成分[2]. 胡瑞君等[14]利用果膠酶、纖維素酶輔助提取麥冬皂苷，得到較理想的提取工藝條件為：0.1%纖維素酶、8%果膠酶、pH4.5、50℃、2h，所得麥冬總皂苷含量為3.5762‰. 車仁國(guó)等[15]以短葶山麥冬皂苷C為標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)生物酶法和常規(guī)醇提法提取的麥冬總皂苷進(jìn)行比較研究，并采用三種不同方法進(jìn)行含量分析. 結(jié)果表明3種方法的測(cè)定結(jié)果一致，均表明生物酶法提取的麥冬總皂苷濃度大于常規(guī)醇提法.

1.3超聲提取法

超聲提取法主要運(yùn)用空化現(xiàn)象，微小的氣泡因爆裂產(chǎn)生較大壓力，使植物細(xì)胞壁及整個(gè)生物體的破裂在瞬間完成，短時(shí)間內(nèi)使植物細(xì)胞內(nèi)的有效成分釋放出來(lái)，從而顯著提高提取效率[2]. 趙燕燕等[16]利用超聲提取麥冬皂苷D，影響因素主次順序?yàn)榱６取⒁掖紳舛?、先期浸泡時(shí)間和溫度. 通過(guò)超聲方法對(duì)中草藥有效成分進(jìn)行提取，其提取率與細(xì)胞破壁有關(guān)，因此可通過(guò)觀察麥冬細(xì)胞破壁結(jié)果來(lái)優(yōu)化提取工藝，簡(jiǎn)化操作.

2 麥冬皂苷含量測(cè)定方法

2.1紫外分光光度法

因甾體皂苷自身無(wú)紫外吸收，對(duì)其檢測(cè)比較困難，故需要選擇對(duì)其專屬性較好的顯色劑進(jìn)行顯色后再采用比色法測(cè)定其含量[17]. 許敏等[18]以麥冬皂苷D為對(duì)照品，用紫外分光光度計(jì)，香草醛-冰醋酸-高氯酸顯色，在最大吸收波長(zhǎng)395 nm下測(cè)定麥冬總皂苷的含量. 何佳奇等[19]也采用紫外分光光度法，在390nm波長(zhǎng)處測(cè)得浙麥冬塊根和須根中總皂苷成分平均含量分別為11.31mg/g和13.38mg/g，浙麥冬須根與塊根所含皂苷類成分基本一致，且含量較高. 李林洲等[20]以短葶山麥冬皂苷C為指標(biāo)性成分，對(duì)茴香醛比色法進(jìn)行試驗(yàn)條件（顯色劑濃度、反應(yīng)溫度、顯色劑體積、反應(yīng)時(shí)間等因素）進(jìn)行優(yōu)化后，測(cè)得短葶山麥冬中總皂苷含量為1.48%，其平均加樣回收率為95.8%. 劉玉鳳等[21]也以香草醛-高氯酸為顯色劑，薯蕷皂苷元為對(duì)照品，采用比色法檢測(cè)麥冬果實(shí)中總皂苷元的含量. 該方法較為簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為麥冬總皂苷的質(zhì)量控制方法，亦可作為傳統(tǒng)方法的有效補(bǔ)充.

2.2 HPLC法

此法具有簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，適用于麥冬皂苷的含量測(cè)定. 鞏克民等[22]建立了HPLC測(cè)定增液湯中麥冬皂苷D′含量的方法，測(cè)得麥冬皂苷D′的質(zhì)量濃度在0.018~0.180 g/L與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.9999)，平均回收率為99.4%(RSD=0.73%, n=9). 何禮等[23]也采用此法檢測(cè)川麥冬中的麥冬皂苷 D的含量，并比較了塊根和須根中麥冬皂苷 D 的含量差異. 測(cè)得麥冬塊根和須根中皂苷 D 的平均含量分別為 0.348‰和 0.403‰（兩者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異）. 另外，胥秀英等[24]也以該法測(cè)定了麥冬皂苷Ra和慈溪麥冬皂苷A的含量.

2.3 RP-HPLC法

本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于麥冬藥材的質(zhì)量控制. 鞏克民等[25]建立了RP-HPLC法測(cè)定麥冬皂苷D′的含量. 采用DiamonsilTMC18色譜柱，流動(dòng)相為水-乙腈(體積比為52:48)，檢測(cè)波長(zhǎng)為208nm. 麥冬皂苷D′的質(zhì)量濃度在0.018~0.180mg/mL與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.9999)，平均回收率為99.5% (RSD=0.96%. n=9).

2.4 HPLC-ELSD法

該方法除了具有簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)外，還具有線性關(guān)系良好、重現(xiàn)性佳的優(yōu)勢(shì)，適用于對(duì)麥冬皂苷類化合物的檢測(cè). 金虹等[26]采用HPLC-ELSD 法測(cè)得川麥冬與須根平均麥冬皂苷 D 含量分別為 0.034%和 0.041%，兩者無(wú)顯著性差異. 姚令文等[27]采用此法測(cè)得20批川麥冬中麥冬皂苷D′的質(zhì)量分?jǐn)?shù)范圍在0.0046%～0.0103%，表明不同產(chǎn)地的川麥冬在含量上并沒有因?yàn)榈貐^(qū)不同而有太大差異. 吳笑如等[28]以麥冬皂苷D、D′為對(duì)照品，應(yīng)用該法測(cè)定川麥冬須根大孔樹脂富集物中麥冬皂苷D、D′的含量. 結(jié)果表明，麥冬皂苷D在4.424～22.12μg范圍內(nèi)線性良好；麥冬皂苷D′在3.848～19.24μg范圍內(nèi)線性良好. 俞建平等[29]采用該法測(cè)定浙麥冬、川麥冬中麥冬皂苷D的含量，發(fā)現(xiàn)麥冬皂苷D在0.2565～6.4125μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好. 繆菊連等[30]也采用此法檢測(cè)生脈飲中麥冬皂苷D的含量，結(jié)果表明麥冬皂苷D在5~80μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.9997). 吳弢等[31]也采用此法測(cè)定了湖北麥冬皂苷 B的含量，表明ELSD是皂苷類化合物較為適宜的檢測(cè)器. 在研究短葶山麥冬皂苷的報(bào)道中，胡正芳等[32]為控制質(zhì)量利用此法測(cè)定不同產(chǎn)地和采收期短葶山麥冬塊根中皂苷C的含量，測(cè)得10批不同產(chǎn)地短葶山麥冬藥材中皂苷C質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.25%～0.41%，15批不同采收期藥材的質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0.13%～0.38%. 丁銳等[33]也采用該法測(cè)得短葶山麥冬皂苷C進(jìn)樣量在1.04～8.34μg范圍內(nèi)線性良好(r= 0.9998).

2.5近紅外光譜法

該方法具有快速簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確無(wú)損的特點(diǎn)，已經(jīng)應(yīng)用于麥冬總皂苷含量的檢測(cè). 陳雪怡等[34]采用近紅外光譜法對(duì)浙麥冬中麥冬總皂苷含量進(jìn)行快速測(cè)定. 采用紫外分光光度法測(cè)定樣品中麥冬總皂苷的含量之后，運(yùn)用偏最小二乘法建立含量與近紅外光譜(NIR)之間的多元校正模型，從而對(duì)未知樣品含量進(jìn)行預(yù)測(cè). 所建立的麥冬總皂苷校正模型相關(guān)系數(shù)(R)、校正均方差(RMSEC)分別為0.99031和0.0235. 經(jīng)外部驗(yàn)證，校正模型的預(yù)測(cè)均方差(RMSEP)為0.0361，預(yù)測(cè)值與真實(shí)值的相關(guān)系數(shù)達(dá)0.9957. 張娟娟等[35]采用近紅外光譜分析技術(shù)對(duì)麥冬有效成分進(jìn)行定量分析，結(jié)果表明光譜經(jīng)過(guò)Savitzky-Golay平滑+多元散射校正(MSC)+一階導(dǎo)數(shù)預(yù)處理之后得到的定標(biāo)模型效果最佳，分析得到的結(jié)果精度較高.

2.6 非水介質(zhì)毛細(xì)管電泳法

采用非水介質(zhì)毛細(xì)管電泳法，黃寶美等[36]同時(shí)測(cè)定了麥冬中薯蕷皂苷元和魯斯可皂苷元的含量. 以70%甲醇為非水介質(zhì)，20 mmol/L硼砂-HCl為緩沖溶液(pH 7.61)，運(yùn)行25 kV高壓，+0.70 V工作電極電位的條件下，實(shí)現(xiàn)了被測(cè)組分的有效分離. 測(cè)得麥冬中薯蕷皂苷元和魯斯可皂苷元的含量分別為0.018 mg/g和0.008 mg/g，平均回收率分別為102%和99.2%. 本法為麥冬中薯蕷皂苷元和魯斯可皂苷元的質(zhì)量控制提供了新方法.

3 結(jié)語(yǔ)

麥冬皂苷不同的提取分離及檢測(cè)手段各有優(yōu)勢(shì)，也有著各自的局限性. 傳統(tǒng)方法仍在延續(xù)，而日益興起的制備和檢測(cè)措施由于更快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì)，逐漸被大多數(shù)科研工作者接受并運(yùn)用. 由于麥冬皂苷不同的提取工藝而導(dǎo)致皂苷得率各異，含量也有所不同，大多在提取過(guò)程后，還需再進(jìn)行一步純化使含量得以提升. 相信隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，麥冬皂苷提取工藝及分析方法必將不斷更新，其得率、含量隨之大幅度提升，從而加快傳統(tǒng)中藥綜合利用的步伐.

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1.1 材料 試驗(yàn)于2015—2017年在山東萊州大自然園藝科技有限公司蘋果示范園進(jìn)行，試材煙富3/M9/八棱海棠，2015年定植，株行距1.5 m×4 m，示范園按常規(guī)管理。發(fā)枝促花劑包括發(fā)枝素型和促花劑型，其中發(fā)枝素用于促進(jìn)1～2年生幼樹主干抽生長(zhǎng)枝，促花劑用于促使2～3年生幼樹分枝抽生中短枝，形成花芽。試劑由萊州大自然園藝科技有限公司自主研制生產(chǎn)，主要成分為6-BA。

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(責(zé)任編輯：徐 杰)

Research Progress on Extraction Separation and Analysis Method for Saponin

WANG Haiyan, HUANG Lin, HU Ruofei, ZHANG Yong

(School of Chemical Engineering and Food Science, Hubei University of Arts and Science,Xiangyang 441053, China)

Ophiopogon japonicus is an important nourishing-yin drug among the traditional Chinese herbs, with a wide range of pharmacological activity. Saponin, one of the major active components in ophiopogon japonicas, has caused more and more researchers’ attention accompanied with a variety of extraction and separation and analysis methods. So the methods were summarized in this paper, which will provide references for further research and utilization to both ophiopogon japonicus and saponin.

Ophitopogin japonicus; Saponin; Extraction and separation; Quantitative analysis

S567.23+2

A

2095-4476(2016)02-0028-04

2015-11-05;

2016-01-20

湖北省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2015CFC804); 湖北文理學(xué)院科研啟動(dòng)經(jīng)費(fèi)資助項(xiàng)目; 湖北文理學(xué)院食品新型工業(yè)化學(xué)科群建設(shè)項(xiàng)目

王海燕(1971— ), 女, 湖北宜城人, 湖北文理學(xué)院化學(xué)工程與食品科學(xué)學(xué)院副教授, 博士.