孫秀峰，孫成狀

(1.山東省費縣城北畜牧獸醫(yī)工作站 273400；2.山東省費縣上冶畜牧獸醫(yī)工作站 273400)

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豬的人工采精和精液保存

孫秀峰1，孫成狀2

(1.山東省費縣城北畜牧獸醫(yī)工作站 273400；2.山東省費縣上冶畜牧獸醫(yī)工作站 273400)

豬采精通常采用手握法。采精頻率依公豬而定，一般每2～3天或每4～5天采集1次。采精時廢棄最初射出部分液體，精子濃集部分收集后去凝膠。公豬射出的富精子部分通常在100～150 mL，在對精子的密度、活力、形態(tài)進行評估后進行稀釋。

1　液態(tài)精液

豬的輸精99%采用液態(tài)精液。由于豬的精子對低溫特別敏感，因此幾乎所有的豬精液是采用室溫稀釋液。精液在室溫下保存時，必須要抑制精子的活動，以保證精子能保持足夠長的活力。

20世紀60年代至70年代用于室溫保存的稀釋液基本都是依利諾伊變溫稀釋液(IVT)，近來已逐漸被Guelph稀釋液、BTS稀稀釋夜(貝滋維爾溶解液)和Zorlesco等稀釋液所取代。Guelph稀釋液比IVT稀釋液配制簡單，但稀釋后精子活力保持時間與IVT液相當。更為復雜配方的稀釋液，如Zorlesco稀釋液，可使精子在12 d內保持受精能力，但試驗表明有效期可能比此要短。美國使用最為廣泛的是BTS稀釋液。

通常建議的輸精精子數(shù)不得低于1×109個，如果在采集當天未使用，則需加大精子數(shù)量。研究認為，精液多保存1 d，精子數(shù)應增加1×109個。因此，商業(yè)人工授精中心的常規(guī)一次輸精劑量所含的精子數(shù)為2.5×109。如果采精時無法準確確定精子的密度，或是用于當?shù)刎i群，推薦稀釋比例為1∶4～1∶7，每頭份輸精劑量所含精子數(shù)大約為(2～4.5)×109個。輸入精液的容積很重要，較大容積的精液量可以刺激子宮運動，保證有足量的精子能到達受精部位，而容積太小則達不到預期效果。建議的輸精量為70～100 mL(通常為80 mL)。輸精前精液通常盛放在塑料管(杯、瓶)中，15 ℃以上保存。在商品豬進行人工授精時，可將不同公豬的精液混合使用，這樣可以消除不同公豬精液對稀釋的不良反應，改進輸精效果。

2　冷凍保存

豬精液冷凍保存的效果不好，解凍后精子復蘇率不高，個體之間差異較大，解凍后精子受精能力低于液態(tài)精液。冷凍精液解凍后兩次輸精，母豬受胎率最高可達到70%，而使用液態(tài)精液輸精后80%～90%的母豬受胎。冷凍精液每胎產(chǎn)仔數(shù)也低于液態(tài)精液。因此，采用凍精人工授精的豬僅占1%，主要用于國際貿易。

限制豬冷凍精液應用的因素主要有兩個。第一，豬精子對冷休克極為敏感。卵黃和脫脂奶對大多數(shù)其他動物的精液具有良好的抗冷休克保護作用，但對豬精子則幾乎沒有任何作用。第二，雖然甘油可能是豬精子最好的冷凍保護劑，但其對豬精子的毒性作用又比對其他動物強。因此，使用凍精輸精后要獲得中等程度的受胎率，也需要非常高的精子濃度，一般每次輸精劑量要達到(5～6)×109個。因此制備凍精時，每次射出的精液僅可供5頭母豬使用。由于稀釋比例很低，因此只能用于以提高豬的遺傳品質為目的的國際貿易和遺傳資源保存。

為了提高豬精液冷凍效果，人們進行了大量的

研究，雖然早期的研究進展緩慢，但解凍后精子的活力和穩(wěn)定性有所提高，而且在許多方面都有明顯的進展。

(1)稀釋液的改進當稀釋液中添加清潔劑Orvas Es Paste(OEP)時，由于其能將脂肪球分解，因此有利于卵磷脂與細胞膜之間的相互作用，從而明顯提高了卵黃的保護效應。在冷凍和解凍過程中，添加抗氧化劑，如維生素E、谷胱甘肽或超氧化物歧化酶可以阻止脂質發(fā)生過氧化。

(2)控制冷凍過程溫度的控制是精液冷凍成功的關鍵。以往在冷凍豬精液時通常采用冷凍大容量細管(5～6 mL)，冷凍和解凍過程中溫度不好控制，尤其是細管中心的溫度更難控制。如果將精液分裝在0.5 mL細管中(含2×109個精子)，解凍后再稀釋到適宜的容積，對冷凍溫度的控制要容易些，這樣的精液量也適宜解凍后輸精。有一種“扁平袋冷凍系統(tǒng)”，可將含5×109個精子的5 mL扁平塑料袋(內裝有稀釋液)進行冷凍，但必須保證受冷均勻、有效。

(3)公豬的選擇可根據(jù)精子對冷凍的反應選擇公豬，選擇的公豬精液如果能很好地耐受冷凍，則精液在冷凍解凍后質量穩(wěn)定，很少有射出的精液在冷凍后不能生存。有人建議應根據(jù)精液的耐凍性對公豬進行優(yōu)劣評定。在牛人工授精的早期，曾進行過類似的選擇，并以此有效淘汰了精液不耐凍的公牛(至少在奶牛上有效)。

(4)輸精近來的研究發(fā)現(xiàn)，解凍后存活的精子并非沒有發(fā)生變化。在雌性生殖道內，部分精子發(fā)生類似獲能的反應變化，使精子在雌性生殖道內存活的時間縮短。選擇適宜的輸精位置和時間，有助于提高冷凍精液的受胎率和窩產(chǎn)仔數(shù)。

3　傳染病的控制

用于采精的公豬應進行血清學檢查，確保它們沒有攜帶生殖傳染病和其他有可能危害畜群健康的疾病。精液中添加抗生素可以消除非特異性和致病性細菌。控制疾病傳播最有效的方法是檢疫每月進場的豬群。在此期間，對觀察到有疾病臨床癥狀的公豬及時進行血清學檢查。

2016-04-25

S828.3文獻標識碼：B

1005-2739(2016)05-0030-02