劉 瓊，劉 蜜

（1.湖南師范大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南省人民醫(yī)院，長沙 410006；2.湖南省交通醫(yī)院，長沙 410000）

血清學(xué)診斷ABO新生兒溶血病的實驗研究

劉 瓊1，劉 蜜2

（1.湖南師范大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南省人民醫(yī)院，長沙 410006；2.湖南省交通醫(yī)院，長沙 410000）

目的：了解長沙地區(qū)ABO血型新生兒溶血?。℉DN）的發(fā)病情況，探討血清學(xué)三項實驗在診斷新生兒溶血病中的臨床價值，為該病的早期預(yù)防、早期診斷和臨床治療提供依據(jù)。方法：收集中南大學(xué)湘雅醫(yī)院2016年1月～7月產(chǎn)科和新生兒科疑似母嬰ABO血型不合的新生兒血液標本，對其進行ABO血型檢測及新生兒溶血病血清學(xué)三項試驗（直接抗人球蛋白試驗、游離抗體試驗和紅細胞抗體釋放試驗）。結(jié)果：在583例檢測結(jié)果中，確診為新生兒溶血病的有145例，發(fā)病率為24.87%。其中男性患兒80例，發(fā)病率為25.64%，女性患兒65例，發(fā)病率為23.98%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；A型血患兒90例，O-A型母嬰血型模式的發(fā)病率為54.88%，B型血患兒55例，O-B型母嬰模式的發(fā)病率為41.35%，差異顯著。145例HDN中直接抗人球蛋白試驗陽性38例，陽性率26.21%，游離抗體試驗陽性76例，占52.41%，紅細胞抗體釋放試驗陽性144例，陽性率為99.31%，三者比較存在著顯著的差異性。結(jié)論：長沙地區(qū)ABO新生兒溶血病發(fā)病率為24.87%，男性新生兒和女性新生兒的發(fā)病率無差異性，O-A母嬰血型發(fā)病率高于O-B母嬰血型。血清學(xué)三項試驗是臨床最常用的診斷新生兒溶血病的方法，其中紅細胞抗體釋放試驗敏感度最高，游離抗體試驗次之，直接抗人球蛋白試驗敏感度最低。血清學(xué)診斷為ABO新生兒溶血病的早期預(yù)防、早期診斷和臨床治療提供依據(jù)。

新生兒溶血??；ABO；紅細胞抗體釋放試驗；直接抗人球蛋白試驗；游離抗體試驗

ABO血型新生兒溶血?。╤emolytic disease of the new-born，HDN）指的是母嬰ABO血型不合時母親體內(nèi)產(chǎn)生與胎兒或新生兒血型抗原不相容的IgG抗A抗體或IgG抗B抗體，并通過胎盤屏障到達胎兒血液循環(huán)引起胎兒或新生兒發(fā)生溶血的同族免疫性疾病。到目前為止，已發(fā)現(xiàn)的多種血型系統(tǒng)均能引起新生兒溶血病的發(fā)生，其中以ABO血型系統(tǒng)的新生兒溶血病發(fā)病最為常見。據(jù)統(tǒng)計在所有新生兒溶血病中，ABO型HDN約占85%［1］。ABO-HDN多發(fā)于O型血產(chǎn)婦，主要表現(xiàn)為新生兒黃疸、肝脾腫大和不同程度的貧血等，血清膽紅素在短時間內(nèi)迅速上升。嚴重者有嗜睡、厭食等癥狀，甚至發(fā)生膽紅素腦病或死亡［2］。因此，ABO型新生兒溶血病的產(chǎn)前檢查和出生后新生兒血清學(xué)檢測對于該病的預(yù)防和早期診斷尤其重要。血清學(xué)檢測是指新生兒溶血病的血清學(xué)三項檢測，包括直抗（直接抗人球蛋白）試驗、游離（血清游離抗體檢測）試驗、放散（紅細胞釋放抗體檢測）試驗，是診斷新生兒溶血病最常見的試驗方法［3］。本文收集了中南大學(xué)湘雅醫(yī)院2016年1月～7月疑似母嬰ABO血型不合的583例新生兒的血清學(xué)檢測結(jié)果，對其進行了統(tǒng)計分析，報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象中南大學(xué)湘雅醫(yī)院2016年1月～7月疑似母嬰ABO血型不合的583例新生兒血液標本。

1.2 主要試劑及儀器低離子抗人球微柱凝膠檢測卡，標準ABO紅細胞，低離子介質(zhì)，上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供的抗A、抗B血型定型試劑，金壇市國旺實驗儀器廠提供的420數(shù)顯三用恒溫水箱。孵育箱（Incubator 37 SⅠ）和離心機（Centrifuge 12 SⅡ）。

1.3 方法

1.3.1 新生兒ABO血型鑒定新生兒由于體內(nèi)抗A抗B抗體沒有產(chǎn)生，ABO血型鑒定采用試管法只檢測正定型，不做反定型。取潔凈小試管2支，分別標明抗A和抗B，加抗A和抗B分型血清各1滴于細胞底部，再分別加受檢者3 ～5%紅細胞懸液1滴混勻，1000r/min離心1 min觀察有無凝集。如肉眼不見凝集，將反應(yīng)物倒置在玻片上，在顯微鏡下觀察，判斷血型并記錄。

1.3.2 血清學(xué)三項檢測實驗新生兒溶血病的血清學(xué)三項檢測參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》［4］進行，三項試驗包括直接抗人球蛋白試驗（DAT）、血清游離抗體試驗、紅細胞抗體釋放試驗（采用熱放散法）。

1.3.3 HDN診斷標準［9］當血清學(xué)三項試驗中任意兩項或三項結(jié)果均為陽性時診斷為HDN陽性，若只有一項結(jié)果為陽性則只能取放散試驗陽性結(jié)果時診斷為HDN陽性。

1.3.4 統(tǒng)計學(xué)分析方法數(shù)據(jù)分析采用SPSS17.0軟件進行處理，采用χ2檢驗對結(jié)果進行比較分析，當P＜0.05時有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

583例疑似母嬰ABO血型不合的新生兒血液標本中，確診為新生兒溶血病的有145例，發(fā)病率為24.87%。其中男性患兒80例，發(fā)病率為25.64%，女性患兒65例，發(fā)病率為23.98%，兩者經(jīng)卡方檢驗P值大于0.05（χ2=0.21，P=0.645），差異無統(tǒng)計學(xué)意義。詳見表1。

表1 HDN陽性結(jié)果在不同性別新生兒中的發(fā)病率

在145例確診為ABO型新生兒溶血病的患兒中，A型血患兒90例，O-A型母嬰血型模式發(fā)病率為54.88%，B型血患兒55例，O-B型母嬰血型模式發(fā)病率為41.35%。O-A和O-B兩種母嬰血型模式發(fā)病率經(jīng)χ2檢驗后得到的P值小于0.05（χ2=5.376，P=0.020），差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明在ABO型新生兒溶血病中，O-A母嬰血型較O-B母嬰血型模式的HDN發(fā)病率高。詳見表2。

表2 O-A和O-B母嬰血型HDN陽性結(jié)果分布

血清學(xué)三項試驗均為陽性者34例，占23.45%；游離和放散實驗均為陽性的71例，占48.97%；直抗和放散實驗均為陽性的3例，占2.07%；單獨放散試驗陽性的病例數(shù)是36，占24.83%；直抗和游離實驗均為陽性的1例，占0.69%。游離和放散實驗陽性、三項實驗均陽性和單獨放散實驗陽性是最主要的檢出模式，占97.25%。145例HDN中直接抗人球蛋白試驗陽性38例，陽性率26.21%，游離抗體試驗陽性76例，陽性率52.41%，紅細胞釋放抗體試驗陽性144例，陽性率為99.31%。三項實驗中以紅細胞抗體放散實驗診斷新生兒溶血病的靈敏度最高，游離抗體實驗次之，直接抗人球蛋白實驗靈敏度最低，三者經(jīng)卡方檢驗后，P＜0.01，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果見表3。

表3 145例HDN陽性患兒的血清學(xué)試驗結(jié)果統(tǒng)計

3 討論

本實驗以ABO新生兒溶血病為研究對象，是因為ABO型母體妊娠時新生兒溶血病的發(fā)病率最高，適合小范圍的結(jié)果統(tǒng)計。結(jié)果表明，ABO新生兒溶血病的發(fā)病率為24.87%。新生兒溶血病發(fā)病率在男性新生兒和女性新生兒中沒有差別，與多數(shù)研究的結(jié)果一致。HDN在O-A型母嬰血型模式中發(fā)病率為54.88%，O-B型母嬰血型模式的發(fā)病率為41.35%，兩種母嬰血型模式發(fā)病率經(jīng)卡方檢驗后得到的P值小于0.05，說明O-A母嬰血型較O-B母嬰血型的HDN發(fā)病率更高。有研究［10，11］報道，由于胎兒紅細胞上的A型抗原決定簇比B型抗原決定簇的數(shù)量更多，并且A型抗原比B型抗原的免疫原性更強，更易誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫應(yīng)道。因此在ABO-HDN中，O-A母嬰血型模式更容易發(fā)生新生兒溶血病，與本研究的結(jié)論一致。但也有文獻報道［12］，O-A模式與O-B模式這兩者之間并無顯著差異。分析可能原因一是研究的不是大樣本數(shù)據(jù)，存在局限，樣本不具有代表性。二是不同地區(qū)人群中ABO血型分布比例存在著差異性。紅細胞上抗原與血清中抗體的結(jié)合是可逆的，如果改變某些物理條件，如加熱等抗體又可以從結(jié)合的紅細胞上放散下來，再以相應(yīng)的紅細胞鑒定放散液內(nèi)抗體的種類并測定其強度，用以判定原來紅細胞上抗原的型別，這就是抗體放散實驗。常用于ABO亞型的鑒定、類B血型的鑒定和新生兒溶血病的診斷。血清學(xué)三項試驗結(jié)果顯示，在確診的新生兒溶血病例中，直抗試驗，游離試驗和放散試驗的陽性率分別是26.21%，52.41%和99.31%，抗體放散試驗診斷新生兒溶血病的靈敏度大于游離試驗和直抗試驗。放散試驗是血清學(xué)三項試驗中診斷新生兒溶血敏感度最高的指標。

有文獻報道僅根據(jù)新生兒紅細胞直接抗人球蛋白試驗（DAT）確診新生兒溶血病，但目前普遍認為此項試驗結(jié)果靈敏度低，一般不能憑借單項DAT試驗陽性即做出新生兒溶血病的診斷結(jié)果。從本實驗結(jié)果看出，145例確診的新生兒溶血病直抗陽性的僅僅只有38例，另外107例確診病例直抗實驗均為陰性。如果僅根據(jù)直抗實驗陽性來診斷新生兒溶血病，會遺漏很多的病例。

新生兒溶血病是臨床上造成新生兒死亡的一個重要因素，其發(fā)病機制為母嬰血型不合，孕母體內(nèi)IgG類血型抗體通過胎盤進入胎兒體內(nèi)，胎兒紅細胞被母親的同種抗體所包被，造成胎兒發(fā)生以溶血為主要損害的一種被動免疫性疾?。?6-18］。臨床表現(xiàn)為黃疸、肝脾腫大和不同程度的貧血，血清膽紅素在短時間內(nèi)迅速上升，嚴重者發(fā)生膽紅素腦病甚至死亡。新生兒溶血病主要見于ABO型母嬰血型不合，ABO-HDN往往只有出現(xiàn)黃疸、核黃疸、溶血性貧血等典型臨床表現(xiàn)時才得到臨床確診，但此時的病情已經(jīng)開始惡化，嚴重影響治療效果，給我國新生兒健康造成巨大威脅。因此，對妊娠期婦女進行相關(guān)產(chǎn)前診斷以及產(chǎn)后新生兒的血清學(xué)三項檢查是非常必要的，有助于新生兒溶血病的早期預(yù)防、早期診斷和早期治療。對于我國優(yōu)生優(yōu)育，提高人口素質(zhì)非常必要。新生兒出生后及時監(jiān)測膽紅素及血清學(xué)三項實驗，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)診斷為新生兒溶血病，24～48小時內(nèi)膽紅素水平持續(xù)性升高，并伴有明顯黃疸癥狀，應(yīng)立即予以積極治療。血清學(xué)三項試驗的結(jié)果應(yīng)與臨床相結(jié)合，做到及早診斷，及時評估，選擇最佳治療方案使患者病情得到及時控制，降低危險性［19-22］。光療法是降低膽紅素最簡單有效的方法，發(fā)現(xiàn)膽紅素水平達到光療標準時及時進行光療。也有研究者認為靜脈注射丙種免疫球蛋白可作為治療新生兒溶血病的常規(guī)方法，但目前尚未得到臨床認［17，23］。糾正貧血和平衡電解質(zhì)紊亂也是治療HDN的有效措施，只有個別嚴重者需進行換血治療。

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The study of ABO Hemolytic Disease of the Newborn in serological diagnosis testABSTRACT

Liu Qiong1, Liu Mi2

(1. The First Affiliated Hospital of Hunan Normal University, Hunan Provicial People's Hospital, Changsha 410006, China;
2. Traffic Hospital of Hunan Province, Changsha 410000, China)

ObejectiveTo understand the morbidity of ABO hemolytic disease of the newborn in Changsha, discuss the clinical significance of three serologic tests to diagnose the ABO hemolytic disease of the newborn and provide evidences for the early prevention, early diagnosis and clinical treatment of the disease.MethodsCollecting the total of 583 cases of maternofetal ABO incompatibility from January 2016 to July in Xiangya Hospital of Central South University. The ABO blood group and serologic tests were determined.ResultsThere are 145 cases of HDN in the total of 583 blood samples with the incidence 24.87%. The number of male children was 80 (25.64%) and female children was 65(23.98%). There was no significance difference in their incidences. In 145 cses of ABO-HDN with positive result in 90 cases with O-A incompatible pregnancies (54.88%), 55 cases with O-B incompatible pregnancies (41.35%), as a result, there were differences between these two blood group and the incidence of type A was higher than type B. In 145 cases of ABO-HDN, the direct antiglobulin test (DAT) with positive result was 38(26.21%), free antibody test was 76 (52.41%) and the RBC antibody release test was 144(99.31%). There were differences among the three serological tests.ConclusionThe morbidity of ABO-HDN in changsha is about 24.87%. No difference was found between the male children and female children. The three serological hemolytic tests are the most important methods for diagnosis of ABO-HDN, in which the most sensitive is RBC antibody release test, followed by free antibody test and DAT. The three serologic tests are helpful in the early prevention, early diagnosis and clinical treatment of the disease.

hemolytic disease of newborn； ABO； RBC antibody release test； DAT； free antibody test

R722.1

A

1673-016X（2016）06-0017-04

2016-08-10

劉瓊，E-mail：396788418@qq.com