胡曉蕾，趙志鋼，駱方軍，朱濤輝

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·論著 ·

浙江省麗水市強(qiáng)直性脊柱炎患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞程序性死亡因子1的表達(dá)及意義研究

胡曉蕾，趙志鋼，駱方軍，朱濤輝

【摘要】目的檢測浙江省麗水市強(qiáng)直性脊柱炎(AS)患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞程序性死亡因子1(PD-1)陽性率，分析其與疾病活動性臨床指標(biāo)的關(guān)系，初步探討其在AS發(fā)生發(fā)展中的作用。方法收集2013年12月—2014年4月浙江省麗水市中心醫(yī)院收治的AS患者35例，根據(jù)Bath強(qiáng)直性脊柱炎活動指數(shù)(BASDAI)分為活動組(BASDAI>4)21例和穩(wěn)定組(BASDAI≤4)14例，另選取同時期本院體檢健康者20例為對照組。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率，分析AS患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率與疾病活動性臨床指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果活動組CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率高于對照組和穩(wěn)定組(P<0.05)；穩(wěn)定組和活動組CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率高于對照組(P<0.05)。AS患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率與CD4+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+/CD8+呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與CD8+T淋巴細(xì)胞百分比、BASDAI、紅細(xì)胞沉降率(ESR)呈正相關(guān)(P<0.05)，與C反應(yīng)蛋白(CRP)無直線相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。AS患者外周血CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率與CD4+T淋巴細(xì)胞百分比、CD8+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+/CD8+、BASDAI、ESR、CRP無直線相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。結(jié)論浙江省麗水市AS患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1表達(dá)增加，CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率在AS活動期明顯增加，與疾病的炎性反應(yīng)指標(biāo)相關(guān)，可能在AS的免疫病理中起重要作用。

強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是一種慢性進(jìn)行性疾病，多發(fā)于青壯年，致殘率高，尚未找到根治方法[1]。目前認(rèn)為，免疫炎癥導(dǎo)致疾病反復(fù)發(fā)作是AS特征之一，其中T淋巴細(xì)胞活化起關(guān)鍵作用，但其發(fā)病機(jī)制尚未完全明確[2]。程序性死亡因子1(programmed death-1，PD-1，CD279)是B7家族新成員，與配體PD-L1(B7-H1，CD274)和PD-L2(B7-DC，CD273)相互作用，誘導(dǎo)性表達(dá)在活化的CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞等細(xì)胞中，維持周圍免疫耐受[3]，在與AS類似的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中起重要作用。另外，AS患者PD-1基因和PD-L1基因有明顯的地域差異[4-5]。目前對特定地區(qū)AS患者外周血PD-1表達(dá)水平尚缺乏完整的資料[6]。本研究通過檢測AS患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率，分析其與疾病活動性臨床指標(biāo)的關(guān)系，旨在探討PD-1在浙江省麗水市AS患者的表達(dá)特點(diǎn)及其在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用。

1資料與方法

1.1臨床資料收集2013年12月—2014年4月浙江省麗水市中心醫(yī)院收治的AS患者35例為研究對象，其中男29例，女6例；年齡16～63歲，平均年齡(37.2±12.1)歲；病程1～31年。診斷均符合2003年我國修訂的《強(qiáng)直性脊柱炎診治指南(草案)》[7]?；颊卟杉瘶?biāo)本前30 d均未接受免疫抑制劑和糖皮質(zhì)激素治療。根據(jù)Bath強(qiáng)直性脊柱炎活動指數(shù)(BASDAI)[8]分為活動組(BASDAI>4)21例和穩(wěn)定組(BASDAI≤4)14例。另選取同時期本院體檢健康者20例為對照組，其中男16例，女4例；年齡17～65歲，平均年齡(39.7±14.2)歲。納入與排除標(biāo)準(zhǔn)：各項(xiàng)常規(guī)體檢項(xiàng)目正常，并且人類白細(xì)胞抗原(HLA)-B27陰性，CD4+/CD8+正常，排除自身免疫性疾病、感染和腫瘤等存在免疫炎癥的患者。3組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見表1)。均簽署知情同意書。

1.2主要試劑和儀器CD4-異硫氰酸熒光素(FITC)(批號：3225784)、CD8-FITC(批號：33206612)及其同型對照Mouse IgG1-FITC(批號：33172601)，PD-1-PE(批號：33235573)及其同型對照Mouse IgG1-PE(批號：33186626)，均購自美國BD公司。紅細(xì)胞裂解液OptiLyse?C和Cytomics FC500型流式細(xì)胞儀購自美國Beckman Coulter公司。

表1　3組性別、年齡比較

注：a為F值

1.3檢測方法真空管采集乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝血2 ml。取3支試管，分別加入同型對照Mouse IgG1-FITC和Mouse IgG1-PE各20 μl、CD4-FITC和PD-1-PE各20 μl、CD8-FITC和PD-1-PE各20 μl，各管加全血100 μl；混勻后室溫避光孵育15 min；加OptiLyse?C 0.5 ml，混勻后室溫孵育10 min；加鞘液至2 ml，500×g離心5 min，棄上清液，加0.5 ml磷酸鹽緩沖液(PBS)，立即上機(jī)檢測PD-1陽性率、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞百分比，收集10 000個細(xì)胞。紅細(xì)胞沉降率(ESR)采用自動ESR儀檢測；C反應(yīng)蛋白(CRP)水平采用免疫熒光干式定量法檢測。

2結(jié)果

2.13組外周血CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率比較PD-1在T淋巴細(xì)胞連續(xù)性表達(dá)(見圖1～3)。3組外周血CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中活動組CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率高于對照組和穩(wěn)定組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；穩(wěn)定組和活動組CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表2)。

Table 2Comparison of the PD-1 positive rates of CD4+T cells and CD8+T cells among the three groups

組別例數(shù)CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率對照組2020.7±6.121.0±6.3穩(wěn)定組1423.2±6.130.7±11.3a活動組2132.3±8.6ab33.0±13.4aF值14.5167.582P值<0.0010.001

注：PD-1=程序性死亡因子1；與對照組比較，aP<0.05；與穩(wěn)定組比較，bP<0.05

2.2AS患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率與疾病活動性臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析AS患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞百分比18.0%～46.5%，CD8+T淋巴細(xì)胞百分比12.3%～44.2%，CD4+/CD8+0.59～3.15，BASDAI 1～8，ESR 4～90 mm/1 h，CRP 0.5～152.3 mg/L。AS患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率與CD4+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+/CD8+呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與CD8+T淋巴細(xì)胞百分比、BASDAI、ESR呈正相關(guān)(P<0.05)，與CRP無直線相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。AS患者外周血CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率與CD4+T淋巴細(xì)胞百分比、CD8+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+/CD8+、BASDAI、ESR、CRP無直線相關(guān)關(guān)系(P>0.05，見表3)。

3討論

PD-1/PD-L1通路能夠以多種方式控制自身免疫耐受，動物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)均有力證明，非造血細(xì)胞PD-L1在介導(dǎo)組織免疫耐受方面起關(guān)鍵作用[9]。自身免疫性疾病是自身免疫耐受被破壞的后果，但是相關(guān)研究普遍報(bào)道，自身免疫性疾病患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率不降反升[10-11]，這可能是患者整體免疫狀態(tài)被激活的體現(xiàn)，機(jī)體免疫網(wǎng)絡(luò)的正負(fù)調(diào)節(jié)通路均被不同程度地激活，但最終表現(xiàn)為免疫耐受還是自身免疫性疾病則是多向合力的結(jié)果，而PD-1/PD-L1通路可能在疾病的某個階段或某個免疫性疾病病理環(huán)節(jié)起關(guān)鍵作用；也有可能如王元元等[11]分析，CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)等自身免疫性疾病中扮演的角色與在慢性感染及腫瘤中扮演的角色可能不一樣，在自身免疫性疾病中其為致病T淋巴細(xì)胞。AS與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎這一自身免疫性疾病的免疫病理極為相似。本研究中，活動組AS患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率較穩(wěn)定組AS患者和對照組健康體檢者升高，并且AS患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率與AS活動性臨床指標(biāo)BASDAI和ESR呈正相關(guān)，可見CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率在AS患者病情活動期明顯升高，并且隨炎性反應(yīng)嚴(yán)重程度的增加而升高，可推測CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1在AS的免疫炎性反應(yīng)中起重要作用，可作為判斷疾病活動性的參考指標(biāo)。本結(jié)果與目前報(bào)道的CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1在SLE中的變化特點(diǎn)[11-12]一致；與一項(xiàng)針對臺北地區(qū)患者的研究報(bào)道結(jié)果[6]存在差異，可能與患者所處的不同病程階段以及患者例數(shù)的差異有關(guān)，也可能是因?yàn)锳S患者的PD-1基因多態(tài)性存在地域差異[4-5]。本研究結(jié)果還顯示，穩(wěn)定組和活動組AS患者CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率均明顯高于對照組健康體檢者，但AS患者外周血CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率與AS活動性臨床指標(biāo)之間未見直線相關(guān)關(guān)系，與艾國等[10]對自身免疫性肝炎的研究結(jié)果相似，提示CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率升高是AS整體免疫功能紊亂的表現(xiàn)，但不能作為判斷疾病活動性的參考指標(biāo)。

表3　AS患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率與疾病活動性臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析

注：BASDAI=Bath強(qiáng)直性脊柱炎活動指數(shù)，ESR=紅細(xì)胞沉降率，CRP=C反應(yīng)蛋白

注：PD-1=程序性死亡因子1

圖1流式細(xì)胞術(shù)檢測對照組外周血CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+淋巴細(xì)胞PD-1的表達(dá)

Figure 1PD-1 expression of CD4+T and CD8+T cells in the peripheral blood of control group observed by flow cytometry

圖2　流式細(xì)胞儀檢測穩(wěn)定組AS 患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1的表達(dá)

圖3　流式細(xì)胞儀檢測活動組AS 患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1的表達(dá)

本研究中，AS患者CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率與CD4+T淋巴細(xì)胞百分比和CD4+/CD8+呈負(fù)相關(guān)，與CD8+T淋巴細(xì)胞百分比呈正相關(guān)。趙丹等[13]報(bào)道，處于炎性反應(yīng)期的AS患者CD8+T淋巴細(xì)胞百分比較正常對照組升高，并且該變化隨病情加重愈發(fā)明顯。據(jù)此可推測，在AS的炎性反應(yīng)期，CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1表達(dá)增加，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞活化障礙，CD8+T淋巴細(xì)胞百分比增加，使機(jī)體不能及時徹底地清除異物，從而導(dǎo)致炎癥的反復(fù)及疾病遷延不愈。Chen等[6]研究發(fā)現(xiàn)，CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1在改良型Stokes強(qiáng)直性脊柱炎脊椎分?jǐn)?shù)<30的AS患者中高于改良型Stokes強(qiáng)直性脊柱炎脊椎分?jǐn)?shù)≥30的AS患者，并推測CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1表達(dá)可能與AS患者的病理損傷相關(guān)?？梢?，CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1可能在AS的免疫病理發(fā)展過程中，尤其是反復(fù)遷延的免疫炎性反應(yīng)中起重要作用。其具體作用機(jī)制和意義有待加大樣本量并結(jié)合病理特點(diǎn)做進(jìn)一步分析。PD-1/PD-L1通路具有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用，本研究反而顯示，CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率與CD8+T淋巴細(xì)胞百分比呈微弱的正相關(guān)趨勢，可能是因?yàn)楸狙芯坎捎玫闹笜?biāo)是CD8+T淋巴細(xì)胞百分比這一相對量而不是CD8+T淋巴細(xì)胞絕對計(jì)數(shù)；并且在免疫反應(yīng)中，CD8+T淋巴細(xì)胞主要是效應(yīng)細(xì)胞，而CD4+T淋巴細(xì)胞是主要的調(diào)節(jié)細(xì)胞，所以CD8+T淋巴細(xì)胞百分比可能更多地取決于其他因素的調(diào)節(jié)，而非PD-1導(dǎo)致的凋亡。這也提示了CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1在AS患者免疫紊亂中的主導(dǎo)作用。然而本研究樣本量有限，有待加大樣本量明確結(jié)果。

綜上所述，PD-1在AS患者外周血T淋巴細(xì)胞表達(dá)異常，CD4+T淋巴細(xì)胞PD-1陽性率在AS活動期明顯升高，與患者的免疫功能紊亂相關(guān)，可能在AS的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，而其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

作者貢獻(xiàn)：胡曉蕾進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)施、資料收集整理、撰寫論文、成文并對文章負(fù)責(zé)； 趙志鋼進(jìn)行試驗(yàn)實(shí)施、評估和質(zhì)量控制； 駱方軍進(jìn)行質(zhì)量控制及審校； 朱濤輝進(jìn)行試驗(yàn)實(shí)施、資料收集。

本文無利益沖突。

參考文獻(xiàn)

[1]Wu QX,Qi Y,Zhou T,et al.Treatment compliance of patients with ankylosing spondylitis and its influencing factors[J].Chinese General Practice，2013，16(9)：3041-3044.(in Chinese)

吳清香，亓英，周陶，等.強(qiáng)直性脊柱炎患者治療依從性現(xiàn)狀及影響因素研究[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2013，16(9)：3041-3044.

[2]Mamedov IZ,Britanova OV,Chkalina AV,et al.Individual characterization of stably expanded T cell clones in ankylosing spondylitis patients[J].Autoimmunity,2009,42(6):525-536.

[3]Gianchecchi E,Delfino DV,Fierabracci A.Recent insights into the role of the PD-1/PD-L1 pathway in immunological tolerance and autoimmunity[J].Autoimmun Rev,2013,12(11):1091-1100.

[4]Yang Q,Liu Y,Liu D,et al.Association of polymorphisms in the programmed cell death1(PD-1) and PD-1 ligand genes with ankylosing spondylitis in a Chinese population[J].Clin Exp Rheumatol,2011,29(1):13-18.

[5]Qian BP,Wang XQ,Qiu Y,et al.An exon polymorphism of programmed cell death 1 gene is associated with both the susceptibility and thoracolumbar kyphosis severity of ankylosing spondylitis in a Chinese Han population[J].J Orthop Sci,2013,18(4):514-518.

[6]Chen MH,Chen WS,Lee HT,et al.Inverse correlation of programmed death 1(PD-1) expression in T cells to the spina radiologic changes in Taiwanese patients with ankylosing spondylitis[J].Clin Rheumatol,2011,30(9):1181-1187.

[7]Chinese Medical College of Rheumatology.Ankylosing spondylitis treatment guidelines (draft)[J].Chin J Rheumatol,2003,7(10):641-644.(in Chinese)

中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病學(xué)會.強(qiáng)直性脊柱炎診治指南(草案)[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,2003,7(10):641-644.

[8]Garrett S,Jenkinson T,Kennedy LG,et al.A new approach to defining disease status in ankylosing spondylitis:the bath ankylosing spondylitis disease activity index[J].J Rheumatol,1994,21(12):2286-2291.

[9]Dai S,Jia R,Zhang X,et al.The PD-1/PD-Ls pathway and autoimmune diseases[J].Cell Immunol,2014,290(1):72-79.

[10]Ai G,Xiao F,Wang P,et al.Percentage of programmed cell death receptor 1 on CD8+T lymphocytes in patients with autoimmune hepatitis[J].J Clin Hepatol,2013,16(4):320-322.(in Chinese)

艾國,肖芳,汪鵬,等.自身免疫性肝炎患者外周血CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1表達(dá)及意義[J].實(shí)用肝臟病雜志,2013,16(4):320-322.

[11]Wang YY,Xie CH,Sun MQ,et al.Expression and significance of PD-1 on CD4+and CD8+T cells from the peripheral blood of patients with systemic lupus erythematosus[J].Chin J Cell Mol Immunol,2013,29(9):962-965.(in Chinese)

王元元,謝長好,孫美群,等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血CD4+和CD8+T細(xì)胞PD-1的表達(dá)和意義[J].細(xì)胞與分子免疫雜志,2013,29(9):962-965.

[12]張豪偉，秦文華.流式細(xì)胞儀檢測HLA-B27抗原在診斷強(qiáng)直性脊柱炎中的應(yīng)用[J].中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2013，16(4)：618-619.

[13]Zhao D,Yang XM,Ma WS,et al.T cell subsets in peripheral blood of HLA-B27 positive rheumatoid arthritis and ankylosing spondylitis patients[J].Int J Lab Med,2011,32(2):150-153.(in Chinese)

趙丹,楊小猛,馬文松,等.HLA-B27陽性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和強(qiáng)直性脊柱炎患者外周血T細(xì)胞亞群分析[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011,32(2):150-153.

(本文編輯：陳素芳)

【關(guān)鍵詞】脊柱炎,強(qiáng)直性；CD4陽性T淋巴細(xì)胞；CD8陽性T淋巴細(xì)胞；程序性死亡因子1

胡曉蕾，趙志鋼，駱方軍，等.浙江省麗水市強(qiáng)直性脊柱炎患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞程序性死亡因子1的表達(dá)及意義研究[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2016，19(6)：678-682.[www.chinagp.net]

Hu XL,Zhao ZG,Luo FJ,et al.Expression and significance of programmed death-1 of CD4+and CD8+T cells in the peripheral blood of patients with ankylosing spondylitis in Zhejiang Lishui[J].Chinese General Practice，2016，19(6)：678-682.

Expression and Significance of Programmed Death-1 of CD4+and CD8+T Cells in the Peripheral Blood of Patients With Ankylosing Spondylitis in Zhejiang LishuiHUXiao-lei,ZHAOZhi-gang,LUOFang-jun,etal.ZhejiangLishuiCentralHospital,ZhejiangUniversityLishuiHospital,theFifthAffiliatedHospitalofWenzhouMedicalUniversity,Lishui323000,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of programmed death-1(PD-1)of CD4+and CD8+T cells in the peripheral blood of patients with ankylosing spondylitis (AS) and analyze its relation with disease activity and its role in the development of AS in Zhejiang Lishui.MethodsEnrolled 35 AS patients who were admitted into Zhejiang Lishui Central Hospital from December 2013 to April 2014.According to BASDAI score,the patients were divided into active AS group (BASDAI>4,n=21) and stable AS group(BASDAI≤4,n=14).Another 20 people who received physical examination in the same hospital in the same period were enrolled as control group.The PD-1 positive rates of CD4+and CD8+T cells in peripheral blood of the patients were analyzed.Correlation between the positive rates of peripheral blood CD4+T and CD8+T lymphocytes and each clinical indicator was analyzed.ResultsActive AS group was higher than control group and stable AS group in the PD-1 positive rate of CD4+T cells (P<0.05);stable AS group and active AS group were higher than control group in PD-1 positive rate of CD8+T cells(P<0.05).The PD-1 positive rates of CD4+T cells in the peripheral blood of AS patients was negatively correlated (P<0.05) with the proportion of CD4+T cells and CD4+/CD8+and positively correlated (P<0.05) with the proportion of CD8+T cells,BASDAI and ESR and had no linear correlation with CRP (P>0.05).The PD-1 positive rate of CD8+T cells in the peripheral blood of AS patients had no linear correlation (P>0.05) with the proportion of CD4+T cells,the proportion of CD8+T cells,CD4+/CD8+,BASDAI,ESR and CRP.ConclusionAS patients have higher PD-1 expression in CD4+T cells and CD8+T cells.The PD-1 positive rate of CD4+T cells increases significantly during AS activity period and has correlation with the indexes of inflammatory reaction,and it may has important role in the immunopathogenesis of AS.

【Key words】Spondylitis,ankylosing；CD4-positive T-lymphocytes；CD8-positive T-lymphocytes；Programmed death-1

(收稿日期：2015-02-21；修回日期：2015-10-08)

【中圖分類號】R 593.23

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.06.011

通信作者：駱方軍,311800浙江省諸暨市，溫州醫(yī)科大學(xué)附屬諸暨醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科；E-mail:zjzjlfj@163.com

基金項(xiàng)目：浙江省公益性技術(shù)應(yīng)用研究計(jì)劃(2013C33099)
作者單位：323000浙江省麗水市中心醫(yī)院浙江大學(xué)麗水醫(yī)院溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第五醫(yī)院(胡曉蕾，趙志鋼，朱濤輝)；溫州醫(yī)科大學(xué)附屬諸暨醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科(駱方軍)