鄧建新，蘇仕軍，韋方劍（江蘇省連云港市贛榆區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇 連云港 222100）

豬偽狂犬病診斷技術(shù)研究進(jìn)展

鄧建新，蘇仕軍，韋方劍
（江蘇省連云港市贛榆區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇 連云港 222100）

本文主要通過對(duì)豬偽狂犬病的綜述，概述了目前對(duì)偽狂犬病的診斷技術(shù)，通過對(duì)臨床診斷方法、病原學(xué)診斷方法、免疫學(xué)診斷方法及分子生物學(xué)診斷方法等方法的具體分析，探討目前豬偽狂犬病診斷技術(shù)的研究進(jìn)展。

豬偽狂犬病；診斷技術(shù)；研究進(jìn)展

中國(guó)是養(yǎng)豬大國(guó)，養(yǎng)豬數(shù)量位居世界前列。豬肉是國(guó)人餐桌上最主流的肉食品，養(yǎng)豬又是廣大農(nóng)牧民脫貧致富的主要途徑。由于養(yǎng)殖技術(shù)問題以及對(duì)環(huán)境的影響等問題，豬的發(fā)病率在一定程度上制約了我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。其中，豬偽狂犬病便是影響?zhàn)B殖戶收益的主要疾病之一，因此，了解豬偽狂犬病的傳染狀況和診斷方法對(duì)我國(guó)防控豬偽狂犬病和增加養(yǎng)殖戶收益有十分重要的意義。

1　豬偽狂犬病

豬偽狂犬?。≒seudorabies，PR），又稱Aujeszky氏病，是由豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病。18世紀(jì)偽狂犬病毒第一次出現(xiàn)在人們的視野中，我國(guó)1947年劉永純首次從豬體分離到PRV，20世紀(jì)60年代，偽狂犬病病毒已席卷了全球近60多個(gè)國(guó)家以及地區(qū)。該病多種家畜和野生動(dòng)物都可以感染，以豬感染最為普遍，損失也最嚴(yán)重。

偽狂犬病病毒是皰疹病毒科中抵抗力較強(qiáng)的一種。在8℃可存活46d，在25℃干草、樹枝、食物上可存活10～30d，但短期保存病毒時(shí)，4℃較-15℃和-20℃凍結(jié)保存更好。病毒在pH4～9之間保持穩(wěn)定。5%石炭酸2min滅活，但0.5%石炭酸處理32d后仍具有感染性。0.5%～1%氫氧化鈉迅速使其滅活。對(duì)乙醚、氯仿等脂溶劑以及福爾馬林和紫外線照射敏感。

PRV屬于皰疹病毒科甲型皰疹病毒亞科，潛伏周期較長(zhǎng)，豬感染后，則會(huì)出現(xiàn)繁殖障礙、腦脊髓炎等典型的臨床癥狀，且病死率可達(dá)100%。由于豬偽狂犬病的臨床癥狀很復(fù)雜雜，比較容易誤診，因此給養(yǎng)殖戶帶來(lái)的損失也較大。另外，由于豬偽狂犬病的發(fā)生會(huì)使豬肉質(zhì)量下降，從而對(duì)人們的生活造成影響。所以加強(qiáng)對(duì)豬偽狂犬病的診斷和防控技術(shù)的研究，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展十分重要。

2　豬偽狂犬病的診斷技術(shù)

提高豬偽狂犬病的診斷技術(shù)以及診斷準(zhǔn)確率是養(yǎng)豬業(yè)防控豬偽狂犬病的先決條件，只有早發(fā)現(xiàn)和早防控才能更加有效地避免養(yǎng)豬業(yè)遭受巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前有關(guān)豬偽狂犬病的診斷技術(shù)主要有以下幾個(gè)方面。

2.1臨床診斷

臨床診斷就是根據(jù)典型的臨床癥狀、流行病學(xué)特點(diǎn)、病理剖檢、發(fā)病史等信息判斷豬只是否患有豬偽狂犬病的過程。不同生長(zhǎng)時(shí)期、不同性別的豬只患病后的臨床癥狀不同。孕期母豬患病后會(huì)出現(xiàn)流產(chǎn)甚至是產(chǎn)死胎的現(xiàn)象；仔豬感染后則會(huì)出現(xiàn)發(fā)熱、嘔吐、厭食、呼吸困難等臨床癥狀，其中2～3周的仔豬的死亡率高達(dá)100%；公豬感染會(huì)出現(xiàn)繁殖力下降等癥狀。隱性感染的公豬沒有明顯的臨床癥狀，需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷確診，以便及時(shí)隔離已感染豬只，控制感染的蔓延。

2.2病原學(xué)診斷

病原學(xué)診斷包括病毒分離與鑒定和動(dòng)物實(shí)回歸驗(yàn)。病毒分離與鑒定就是采集病樣的腦、扁桃體、腎和脾等組織剪碎后研磨，經(jīng)滅菌處理且加有抗生素的平衡鹽溶液或生理鹽水稀釋后接種在培養(yǎng)成單層的適宜細(xì)胞上，觀察直至出現(xiàn)特征性細(xì)胞病變。一般情況下，2～5d即可分離到病毒。有病變的細(xì)胞用H.E染色，鏡檢可觀察到嗜酸性核內(nèi)包涵體，也可進(jìn)一步以電鏡等方法鑒定。動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)就是把從豬的部分組織上分離出的病毒接種到實(shí)驗(yàn)鼠身上，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)鼠在經(jīng)過超過十代的繁殖后，所有的鼠類均出現(xiàn)了典型病毒，并可以在醫(yī)學(xué)電鏡下觀察到明顯的偽狂犬病病毒的存在。

2.3分子生物學(xué)方法

分子生物學(xué)診斷技術(shù)是近些年發(fā)展起來(lái)的，主要是根據(jù)病毒的特異性進(jìn)行診斷，目前基本所有的流行性傳染病都可以利用分子生物學(xué)診斷技術(shù)進(jìn)行診斷。當(dāng)偽狂犬病毒處于隱性狀態(tài)時(shí)，僅靠臨床診斷方法是無(wú)法準(zhǔn)確判別的，此時(shí)分子生物學(xué)診斷技術(shù)便可以根據(jù)偽狂犬病病毒的敏感性以及特異性進(jìn)行最為細(xì)致的判別，從而可以將病豬及時(shí)的隔離，保障養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)效益。

目前所采用的分子生物學(xué)診斷技術(shù)主要包括核酸探針技術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（PCR）、基因芯片技術(shù)以及環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，其中核酸探針技術(shù)主要是依靠DNA雜交，從而檢測(cè)病毒的存在；而聚合酶聯(lián)反應(yīng)技術(shù)適合PRV臨床診斷以及流行病學(xué)調(diào)查且檢查速度較快。PCR技術(shù)又包括常規(guī)PCR、鑒別PCR和定量PCR。基因芯片技術(shù)是基于PCR技術(shù)的多核酸雜交的原理，從而進(jìn)行基因檢測(cè)，判斷病毒的存在；環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)利用DNA擴(kuò)增技術(shù)可快速檢測(cè)偽狂犬病病毒的存在。

2.4免疫學(xué)診斷

免疫學(xué)診斷是指采用血清學(xué)反應(yīng)的方法，對(duì)某些疾病進(jìn)行的診斷。主要是利用抗原抗體特異性結(jié)合的性質(zhì)，用已知的抗原測(cè)定患者血清中的未知抗體，來(lái)診斷患者是否患某種傳染病，也可用已知的抗體測(cè)定患者血清中是否含有相應(yīng)的抗原，來(lái)診斷疾病。檢測(cè)豬偽狂犬病病毒的方法有免疫熒光技術(shù)（FA）、反向間接血凝（抑制）試驗(yàn)（RPHA/RPHI）、單抗夾心ELISA、雙抗夾心ELISA；檢測(cè)豬偽狂犬病病毒抗體的方法有血凝和血凝抑制試驗(yàn)（HA-HI）、微量血清中和試驗(yàn)（MSN）、免疫電泳技術(shù)（IE）、瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID）、間接ELISA、競(jìng)爭(zhēng)ELISA。中和試驗(yàn)主要是診斷隱性感染，檢測(cè)的特異性比較高、反應(yīng)靈敏，但可操作性低；凝集性試驗(yàn)主要通過利用抗原的特異性來(lái)檢測(cè)偽狂犬病病毒的存在，其中常用的輔助品為瓊脂、乳膠以及血凝劑來(lái)檢測(cè)抗原的存在；而標(biāo)記抗體技術(shù)主要通過標(biāo)記抗體，從而觀測(cè)病原體的存在，其中利用熒光進(jìn)行標(biāo)記以及酶的特異性來(lái)觀測(cè)抗體；利用血清診斷技術(shù)的準(zhǔn)確度相對(duì)較高。

3　豬偽狂犬病診斷技術(shù)的研究進(jìn)展以及前景展望

除了上述已相對(duì)成熟的診斷技術(shù)外，還有鑒別技術(shù)以及電子顯微鏡技術(shù)等診斷技術(shù)，目前在各國(guó)使用最為廣泛的是膠體金免疫層析技術(shù)，由于其檢測(cè)時(shí)間短、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確率高，從而被獸醫(yī)所青睞。

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.08.005

江蘇省三新工程SXGC（2015）136

［1］王小強(qiáng)，等.用于診斷4種豬病毒病的寡聚核酸芯片的研制［J］.中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2007，37（3）：241-246.

［2］汪招雄，等.檢測(cè)偽狂犬病病毒雙抗體夾心間接ELISA方法的建立與應(yīng)用.中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2006，28（2）：220-224.