隗金玲

(黑龍江省賓縣畜牧獸醫(yī)局，黑龍江 哈爾濱 150400)

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牛結(jié)核病的診斷方法

隗金玲

(黑龍江省賓縣畜牧獸醫(yī)局，黑龍江 哈爾濱 150400)

牛結(jié)核的診斷有臨床診斷、血清學(xué)診斷、細(xì)菌學(xué)診斷和變態(tài)反應(yīng)診斷等方法，其中最有實(shí)際意義的是變態(tài)反應(yīng)診斷。至于臨床和細(xì)菌學(xué)診斷只對少數(shù)有明顯癥狀的牛才有一定的診斷價(jià)值，血清學(xué)方法目前對結(jié)核病的診斷意義不大，很少應(yīng)用。本文對幾種常用的診斷方法進(jìn)行簡要介紹，以供參考。

牛；結(jié)核病；診斷

1　臨床診斷

結(jié)核病畜多數(shù)不呈現(xiàn)明顯癥狀，對于這種隱性的結(jié)核病是不易診斷的，在結(jié)核病的防治中占有特別重要的位置，所以必須仔細(xì)地進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查和臨床觀察。體表淋巴結(jié)劇烈腫大時(shí)，則可能為全身性結(jié)核；乳房淋巴結(jié)腫大或乳房后兩個(gè)乳腺區(qū)發(fā)生境界不明的無痛無熱的硬結(jié)，表面凹凸不平或乳頭萎縮，可能感染乳房結(jié)核；胸部叩診呈現(xiàn)實(shí)音或半實(shí)音，并有雜音、摩擦音，以及直腸檢查發(fā)現(xiàn)體壁腹膜有密發(fā)的珍珠樣結(jié)節(jié)時(shí)，可能是感染漿膜結(jié)核；陰道流出混濁的黏液，其中混有白色或黃色浮游物甚至血絲，常配不孕，發(fā)情不正常，流產(chǎn)以及輸卵管變硬時(shí)，可能是感染生殖器官的結(jié)核；如果發(fā)生消化障礙，習(xí)慣性腹痛，慢性腹瀉與便秘交替或糞便稀薄，混有黏液、膿汁或血汁，以及直腸檢查觸知腸系膜淋巴結(jié)腫大時(shí)，可能是感染腸結(jié)核。

2　細(xì)菌學(xué)診斷

對確定開放性結(jié)核病特別重要。對可疑為開放性肺結(jié)核進(jìn)行細(xì)菌學(xué)診斷時(shí)，可用棉拭子采取氣管黏液或用病牛噴出的干痰塊涂片作抗酸性染色進(jìn)行細(xì)菌檢查，必要時(shí)制成乳劑進(jìn)行動物接種試驗(yàn)。病畜常吞咽從肺內(nèi)咳出的痰汁，細(xì)菌即可經(jīng)過胃腸隨著糞便而排出體外。因此通過糞便也可以檢出開放性結(jié)核病畜。① 硫酸法：在痰液內(nèi)加2倍量的6%的硫酸溶液后遠(yuǎn)心沉淀20min，用3%的苛性鈉溶液1～2滴將沉淀物中和。②安替佛尼法：病料內(nèi)加2倍量的安替佛尼液，放置溫箱1～2h后遠(yuǎn)心沉淀，用3%醋酸溶液中和沉淀物或用蒸餾水洗滌幾次即可，處理后的痰液可作動物接種。

對開放性腸結(jié)核的細(xì)菌學(xué)診斷，一般可用烏蘭浩特法。取被檢動物的糞便30g加入安替佛尼液15mL和蒸餾水55mL，經(jīng)2～3h后遠(yuǎn)心沉淀30min，傾去上層液體，于沉淀物中加10mL點(diǎn)眼反應(yīng)的判定標(biāo)準(zhǔn)。

陽性反應(yīng)：有2個(gè)大米粒大或2×10mm以上的呈黃白色的膿性分泌物自眼角流出，或散布在眼的周圍，或積聚在結(jié)膜囊及眼角內(nèi)；或上述反應(yīng)較輕，但有明顯的結(jié)膜充血、水腫、流淚并有全身反應(yīng)者，判定為陽性反應(yīng)。

疑似反應(yīng)：有2個(gè)大米粒大或2×10mm以上的灰白色、半透明的粘液性分泌物積聚在結(jié)膜囊內(nèi)或眼角處，并無明顯的眼瞼水腫及其他全身癥狀者，判定為疑似反應(yīng)。

陰性反應(yīng)：無任何反應(yīng)或僅有結(jié)膜輕微充血、流出透明漿液性分泌物者，判定為陰性反應(yīng)。

對用老結(jié)核菌素皮內(nèi)注射與點(diǎn)眼2種方法結(jié)合進(jìn)行檢疫的牛只在2種方法中的任何一種呈陽性反應(yīng)者，即判定為結(jié)核菌素陽性反應(yīng)牛。2種方法中任何一種方法為疑似反應(yīng)者，判定為疑似反應(yīng)。對疑似反應(yīng)的牛，也應(yīng)該單獨(dú)隔離飼養(yǎng)，在30～45天后再作一次皮內(nèi)注射和點(diǎn)眼試驗(yàn)，如果連續(xù)2次均為疑似反應(yīng)時(shí)，判為陽性。

3　靜脈內(nèi)注射結(jié)核菌素反應(yīng)

靜脈注射結(jié)核菌素除在一般牛群檢疫外也可在曾經(jīng)感染結(jié)核病的牛群中進(jìn)行，會引起發(fā)熱性全身反應(yīng)，反應(yīng)發(fā)生和經(jīng)過比較迅速。當(dāng)發(fā)生陽性反應(yīng)時(shí)，體溫從3～4h后開始上升，于第六小時(shí)增高1.5～3.0℃達(dá)到最高度，至第十二小時(shí)又降至常溫，陽性反應(yīng)伴有劇烈的機(jī)體反應(yīng)和顯著的灶性反應(yīng)，本法特別適用于迅速找出患進(jìn)行性結(jié)核病牛。

提純結(jié)核菌素(PPD)的制造方法：將經(jīng)過選擇的牛型結(jié)核菌標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株的菌膜，接種于普通培養(yǎng)基表面上(pH值為7.2)，培養(yǎng)2.0～2.5個(gè)月，待所有的培養(yǎng)物全部發(fā)育良好時(shí)，以高壓蒸氣消毒3h后濾過。濾液用三氯醋酸沉淀，將沉淀的蛋白用氫氧化鈉溶解，再用pH值為7.2磷酸緩沖液稀釋到原體積的4%。濾液用微量凱氏定氮法測定其每毫升的蛋白量，最后稀釋為每毫升含1mg結(jié)核蛋白(50000IU)，此濾液即是提純結(jié)核菌素(PPD)。再經(jīng)過無菌試驗(yàn)、安全試驗(yàn)、效力試驗(yàn)：①用致敏豚鼠測定國際單位(每毫升含2mg結(jié)核蛋白，10萬IU)。②用結(jié)核牛進(jìn)行效力試驗(yàn)；用健康牛做特異性試驗(yàn)，合格后分裝即成。

提純結(jié)核菌素(PPD)皮內(nèi)試驗(yàn)，目前多數(shù)國家用頸部皮內(nèi)注射方法(犢牛亦可注射肩胛部)，每毫升含50000個(gè)IU的提純結(jié)核菌素原液0.1mL用注射用水或滅菌蒸餾水稀釋的每毫升含25000個(gè)IU的提純結(jié)核菌素0.2mL注射于牛頸側(cè)中部的皮內(nèi)。注射前用卡尺測量術(shù)部中央皮厚度，作好記錄。注射后72h觀察反應(yīng)，觀察時(shí)，以卡尺測量術(shù)部皮皺厚度(皮差)及術(shù)部腫脹面積的大小，并應(yīng)仔細(xì)觀察局部有無熱、痛、腫脹等炎性反應(yīng)，作好詳細(xì)記錄。

提純結(jié)核菌素皮內(nèi)反應(yīng)判定標(biāo)準(zhǔn)：① 陽性反應(yīng)：皮差超過4mm或以上或皮差不到4mm，但局部呈彌漫性水腫者為陽性反應(yīng)。②疑似反應(yīng)：皮差在2.1～3.9mm，炎性水腫不明顯者，為疑似反應(yīng)。③陰性反應(yīng)：皮差為≤2mm，無炎性水腫者，或僅有堅(jiān)實(shí)冷硬小結(jié)、鈕扣狀腫者為陰性反應(yīng)。

2016-06-15

隗金玲(1976-)，女，高級獸醫(yī)師，本科，主要從事畜牧獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)與推廣工作。

10.19369/j.cnki.2095-9737.2016.09.113

S858.23

B

2095-9737(2016)09-0124-01