吳 鋒王武臺劉惠靜高國訓(xùn)王清源林建華郝建全陳立升

（1天津科潤蔬菜研究所，蔬菜種質(zhì)創(chuàng)新國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384；2天津市薊縣良種繁殖場，天津301900）

芹菜雜交種生產(chǎn)的純度控制

吳 鋒1王武臺1劉惠靜1高國訓(xùn)1王清源1林建華2郝建全1陳立升1

（1天津科潤蔬菜研究所，蔬菜種質(zhì)創(chuàng)新國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384；2天津市薊縣良種繁殖場，天津301900）

選擇理想的基地、使用合格的繁殖材料是控制芹菜雜交種生產(chǎn)純度的基礎(chǔ)，做好田間去雜、防止機(jī)械混雜是手段，進(jìn)行種子生產(chǎn)的全程監(jiān)督檢驗(yàn)是保障。同時，提高種子生產(chǎn)人員的整體素質(zhì)、理順基地和生產(chǎn)商的關(guān)系與雜交種生產(chǎn)的品質(zhì)也息息相關(guān)。

近年來，天津科潤蔬菜研究所利用自主研制的胞質(zhì)雄性不育雜交育種技術(shù)先后選育出賽娜、津瑞1號、快嫩60等多個芹菜一代雜種，這些新品種雜種優(yōu)勢明顯，產(chǎn)量高，品質(zhì)好，已在全國多地區(qū)開始推廣。由于芹菜雜交制種生產(chǎn)周期長、環(huán)節(jié)多、種粒極小、發(fā)芽時間長等多種客觀原因，以及芹菜雜交制種技術(shù)推廣時間較短，制種農(nóng)戶還沒有完全掌握技術(shù)要領(lǐng)，使得目前芹菜雜交種生產(chǎn)的純度容易出現(xiàn)問題。芹菜雜交種田間生產(chǎn)和采種后加工與包裝是一個系統(tǒng)工程，整個過程的每個環(huán)節(jié)都要認(rèn)真做好芹菜雜交種生產(chǎn)的純度控制，才能保證芹菜雜交種純度，最終為生產(chǎn)提供高品質(zhì)的芹菜良種。

1 確保親本種性純正

芹菜雜交種生產(chǎn)的親本包括CMS不育系母本及其相應(yīng)保持系和父本。CMS不育系母本由于自身沒有花粉，必須與相應(yīng)保持系配對繁殖。保持系和父本都必須是純合型自交系，可以分別自交繁殖。確保親本種性純正是芹菜雜交種純度控制的基礎(chǔ)，可以從以下幾方面采取措施。

1.1 采用高世代親本材料 保持系和父本都應(yīng)該是4代以上的高代自交系，CMS不育系母本必須經(jīng)過4代以上的回交轉(zhuǎn)育，各個親本群體表現(xiàn)必須整齊一致，前、后代的表現(xiàn)也要保持相同一致。

1.2 種株培育 親本原種培育一般是結(jié)合秋季或冬春季品種鑒定同時進(jìn)行。定植以后進(jìn)行常規(guī)管理，保證充足肥水供應(yīng)，促使原種植株充分生長，品種特征特性得到充分表現(xiàn)。在此過程中，嚴(yán)格篩選，一旦發(fā)現(xiàn)雜株或疑似雜株，及時拔除，保證每個親本群體整齊一致，種性純正，確保沒有雜株。

1.3 親本擴(kuò)繁 經(jīng)過連續(xù)幾代親本材料種性鑒定，證明已經(jīng)達(dá)到100%純合，即可進(jìn)行擴(kuò)繁。親本擴(kuò)繁采用的材料必須是品種特征特性十分典型的大株，而且要通過低溫春化。親本擴(kuò)繁量不大時，可以安排在原種圃內(nèi)進(jìn)行；如果需要擴(kuò)繁的數(shù)量較大，也可以選擇在隔離條件和管理?xiàng)l件都有絕對保障的地方進(jìn)行，要求交通較為便利，技術(shù)人員可以隨時前往檢查和落實(shí)工作。種子采收后進(jìn)行嚴(yán)格精選，低溫保存，并做好記載。

1.4 田間去雜 從親本定植到開花初期這一階段，隨時到雜交制種田進(jìn)行田間檢查，母本行和父本行中發(fā)現(xiàn)異質(zhì)雜株必須及時拔除。重點(diǎn)對母本株的不育性進(jìn)行逐一檢查，一旦發(fā)現(xiàn)母本行中出現(xiàn)可育株，及時清除。

2 雜交制種基地建設(shè)與隔離安全

芹菜為異花授粉植物，蟲媒或風(fēng)媒都能幫助其完成傳粉，不同品種之間很容易發(fā)生天然生物學(xué)混雜。因此，必須采取安全的隔離措施。

在親本自交或不育系回交轉(zhuǎn)育過程中，必須在具有嚴(yán)格隔離條件的原種圃內(nèi)進(jìn)行，所有自交系必須利用特定規(guī)格的高目數(shù)尼龍網(wǎng)紗袋套嚴(yán)，防止花粉外溢飄移。不育系與保持系種株成對定植，進(jìn)入花期后先用10～20目網(wǎng)紗袋將不育株套上，再連同保持系一起用一個60～80目網(wǎng)紗袋套嚴(yán)，這樣既可保證袋內(nèi)不育株授粉效果，又可以達(dá)到隔離袋之間彼此隔離的目的。

原種圃一般設(shè)立在由塑料大棚或溫室改造的隔離網(wǎng)室內(nèi)，具有較好隔離條件。秋冬季結(jié)合棚室保護(hù)地生產(chǎn)培育原種種株，春夏季用網(wǎng)紗代替塑料棚膜改成隔離網(wǎng)室，進(jìn)行原種采種。

在建設(shè)芹菜雜交制種基地時，同樣需要設(shè)置嚴(yán)格的自然隔離條件。如果制種田地勢較為開闊，隔離距離要保持大約2 000 m，如果制種田周圍有防護(hù)林等高大屏障，隔離距離可適當(dāng)縮短到1 000 m左右。目前，芹菜雜交制種基地一般都是在常規(guī)種制種基地的基礎(chǔ)上進(jìn)行升級建設(shè)，先充分利用制種基地原有的各種基礎(chǔ)條件，再進(jìn)一步優(yōu)先考察其安全隔離、成方連片、土地肥沃且排灌方便、制種技術(shù)嫻熟、便于技術(shù)指導(dǎo)、具有較好種子初加工和短時倉儲條件等因素。制種基地的安全隔離工作是否能夠充分落實(shí)到位，很大程度上取決于基地負(fù)責(zé)人，他們必須具有很強(qiáng)的責(zé)任心和工作能力。

3 對農(nóng)戶進(jìn)行雜交制種技術(shù)培訓(xùn)

在初建芹菜雜交制種基地時，需要對制種農(nóng)戶集中進(jìn)行系統(tǒng)性技術(shù)培訓(xùn)，向他們詳細(xì)介紹芹菜雜交制種過程中的各個技術(shù)要點(diǎn)和關(guān)鍵環(huán)節(jié)，講解芹菜雜交制種與常規(guī)制種的相同點(diǎn)和不同點(diǎn)，使制種農(nóng)戶對芹菜雜交制種技術(shù)有一個總體了解。在各個雜交制種關(guān)鍵時期，還要進(jìn)行實(shí)地技術(shù)咨詢和指導(dǎo)。

4 嚴(yán)格防止機(jī)械混雜

芹菜雜交制種生產(chǎn)要比常規(guī)制種復(fù)雜，加之芹菜種粒極小，發(fā)芽時間長，在整個制種過程中，許多工作環(huán)節(jié)都可能出現(xiàn)材料間的機(jī)械混雜，必須嚴(yán)加防范。4.1 防止隔離網(wǎng)紗袋殘存種子造成混雜 在親本原種利用網(wǎng)紗袋隔離采種時，由于芹菜種子極小，極容易殘存在網(wǎng)紗袋的邊角處，當(dāng)網(wǎng)紗袋在下一年再用于其他親本材料采種時，殘存的個別種子就會造成混雜。為防止此類問題發(fā)生，一是使用全新的網(wǎng)紗袋；二是將網(wǎng)紗袋外翻后再使用，這樣既可以保證袋內(nèi)沒有殘存種子，效率高，效果好，而且網(wǎng)紗袋又可以重復(fù)使用；三是在重復(fù)使用之前，仔細(xì)檢查并徹底清理干凈網(wǎng)紗袋內(nèi)殘存種子，這種方法效率偏低，一般只作為輔助手段。

4.2 防止親本播種時出現(xiàn)混雜 一種情況是用于親本播種的地塊曾播種或繁制過其他芹菜品種，由于芹菜種子在田間的生活力可保持1～2 a（年），以前殘留下來的種子則很可能造成混雜；另一種情況是兩個親本播種苗床相鄰太近，在播種時種子可能相互飛串，播種后至出苗期間可能會隨水漂移，造成兩親本之間互串。因此，親本播種時必須避免重茬，同時兩個親本苗床應(yīng)該適當(dāng)拉開1 m以上的距離，最好是結(jié)合花期調(diào)整進(jìn)行錯期播種。

4.3 防止親本定植時出現(xiàn)混雜 芹菜雜交制種父母本的定植比例一般為2∶6，即2行父本配置6行母本。定植時要先集中把數(shù)量少的父本定植完，再在預(yù)留的定植行上定植母本，決不能同時定植，以防由于人為因素造成的父母本相互混雜。另外，定植時澆穩(wěn)苗水的水量不宜過大，以防小苗被沖離原來位置而進(jìn)入另一個親本行，造成混雜。

4.4 防止雜交種采收時出現(xiàn)混雜 一要適當(dāng)拉大父本行與母本行的間距，保證父本株花枝不與母本株發(fā)生攪擾；二要在母本株采收種子前約20 d（天），將父本株全部收割并清理出去。收割時間不可過早，否則會影響不育系母本授粉結(jié)籽，降低種子產(chǎn)量；亦不能太晚，否則會增加混雜機(jī)會。

4.5 防止采后清選加工過程出現(xiàn)混雜 采種前要先清理運(yùn)輸車輛、曬場、清選加工機(jī)械和包裝袋。禁止幾個品種在同一場地晾曬，運(yùn)輸車輛、清選加工機(jī)械和二次使用的包裝袋在使用之前必須嚴(yán)格清理干凈，不能有其他種子殘留，以免混雜。

4.6 防止貯存過程出現(xiàn)混雜 為防止包裝物意外破損造成種子混雜，要根據(jù)不同品種的數(shù)量劃定品種存放區(qū)域，做到分區(qū)貯存；同時，要做好入庫計劃，避免一庫多品種交叉或同時入庫；散落地面的種子及時清理淘汰。

5 做好純度檢驗(yàn)

純度檢驗(yàn)是雜交種出售之前必須做的一項(xiàng)重要工作。目前最常用的檢驗(yàn)方法仍然為田間種植法。種子回收后立即按照不同采種單位分別播種，從苗期開始進(jìn)行持續(xù)檢驗(yàn)，一般在苗期即可發(fā)現(xiàn)明顯雜株。由于同一芹菜品種在不同環(huán)境中的性狀表現(xiàn)會略有不同，因此純度檢驗(yàn)要在不同季節(jié)、不同環(huán)境條件下安排多次，對雜交種特征特性進(jìn)行全面鑒定，以確保其種性純正，嚴(yán)防不合格種子流入市場。

近幾年，分子標(biāo)記法作為一種高效快速的現(xiàn)代純度檢驗(yàn)手段已在芹菜常規(guī)種上開始試驗(yàn)應(yīng)用，雜交種純度的分子檢測方法正在試驗(yàn)摸索中。

6 建立雜交種生產(chǎn)檔案

芹菜雜交種生產(chǎn)檔案包括親本名稱與來源、親本擴(kuò)繁、雜交種生產(chǎn)年份、地點(diǎn)、數(shù)量、生產(chǎn)操作程序與要點(diǎn)、雜交種收購、運(yùn)輸、入庫、加工、包裝、質(zhì)量與純度檢驗(yàn)、銷售情況、信息反饋等全過程的相關(guān)數(shù)據(jù)信息，記載盡量詳實(shí)準(zhǔn)確、系統(tǒng)全面、條理清晰，以便于查閱。一旦種子出現(xiàn)問題，可根據(jù)檔案記載，及時找出原因，查明紕漏環(huán)節(jié)，采取相應(yīng)補(bǔ)救措施，從而控制質(zhì)量。

國家科技支撐計劃項(xiàng)目（2014BAD01B0802），天津市農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化資金項(xiàng)目（14ZXNZNC00042），天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院院長基金重點(diǎn)項(xiàng)目（12ZD1）

吳鋒，男，助理研究員，主要從事芹菜遺傳育種研究，電話：022-23784682，E-mail：wfeng1290@163.com

2016-01-29；接受日期：2016-03-29