顧進(jìn)華

(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 ， 北京海淀100081)

獸醫(yī)中藥的標(biāo)準(zhǔn)化之路

顧進(jìn)華

(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 ， 北京海淀100081)

中藥理論獨特，作用機(jī)理難于用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論闡明；中藥成分復(fù)雜、炮制規(guī)范不統(tǒng)一；處方種類繁多、制劑工藝多樣，導(dǎo)致中藥質(zhì)量難于量化控制。

中藥標(biāo)準(zhǔn)化是歷史命題，從最早的中藥標(biāo)準(zhǔn)《神農(nóng)本草經(jīng)》，最早的中藥材炮制標(biāo)準(zhǔn)《雷公炮制論》，到李時珍的《本草綱目》[1]，《元亨療馬集》，再到現(xiàn)代的《中國藥典》、《中國獸藥典》，為保證中藥的安全性和有效性做出了貢獻(xiàn)。中藥標(biāo)準(zhǔn)化是時代發(fā)展要求，《中醫(yī)藥創(chuàng)新發(fā)展規(guī)劃綱要(2006-2020)》把中藥技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)研究作為優(yōu)先發(fā)展領(lǐng)域。

實現(xiàn)獸醫(yī)中藥研究開發(fā)、生產(chǎn)、銷售的標(biāo)準(zhǔn)化，是中藥產(chǎn)品安全有效、質(zhì)量可控的重要保證。標(biāo)準(zhǔn)化是獸藥評審中客觀評價、科學(xué)衡量一個新藥的重要依據(jù)，是關(guān)系到中藥生存的關(guān)鍵問題。標(biāo)準(zhǔn)化可以為中藥獲得知識產(chǎn)權(quán)保護(hù)提供良好的技術(shù)參照規(guī)范[2]，可有效增強(qiáng)我國中藥產(chǎn)業(yè)的國際競爭力。

1 藥材、飲片的標(biāo)準(zhǔn)化是獸醫(yī)中藥標(biāo)準(zhǔn)化的基礎(chǔ)

我國復(fù)雜的氣候和地理環(huán)境孕育了眾多療效獨特的道地藥材，從《神農(nóng)本草經(jīng)》到20世紀(jì)初，藥材的“道地”一直是行之有效的質(zhì)量控制思路和方法[3]。道地藥材理論是中藥材質(zhì)量控制的重要理論。中藥材的標(biāo)準(zhǔn)化應(yīng)該重視傳統(tǒng)方法，結(jié)合產(chǎn)地、加工、炮制，甚至適應(yīng)癥等進(jìn)行綜合評價和質(zhì)量控制。目前，按照GAP要求種植藥材是保證藥材質(zhì)量的重要手段。在現(xiàn)有基本標(biāo)準(zhǔn)之上，研究制定優(yōu)質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，選用優(yōu)質(zhì)藥材。按照中藥道地藥材理論建立綜合質(zhì)量評價指標(biāo)體系，嚴(yán)格遵守采收季節(jié)、采收加工要求，這已經(jīng)不是一般的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，而是優(yōu)質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。貨真而質(zhì)優(yōu)，是中藥材質(zhì)量控制的一項獨特而又值得肯定的標(biāo)準(zhǔn)。

飲片的標(biāo)準(zhǔn)化要通過炮制的規(guī)范化來實現(xiàn)。炮制是發(fā)揮中藥藥性的重要手段，在制劑中使用國家標(biāo)準(zhǔn)或地方標(biāo)準(zhǔn)藥材應(yīng)遵守有關(guān)炮制規(guī)范；研究新藥材，應(yīng)結(jié)合療效，加強(qiáng)炮制研究，嚴(yán)格規(guī)定藥材飲片的炮制工藝標(biāo)準(zhǔn)。

2 生產(chǎn)工藝與提取物的標(biāo)準(zhǔn)化是獸醫(yī)中藥標(biāo)準(zhǔn)化的關(guān)鍵

現(xiàn)代化大生產(chǎn)對獸醫(yī)中藥生產(chǎn)工藝的規(guī)?；?、標(biāo)準(zhǔn)化提出了迫切需求。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)來看，中藥具有多組分、多途徑、多靶點的特點，不僅是成分不清晰，甚至是主要作用也不明晰。對于成分復(fù)雜及藥理作用多樣的中藥及制劑，僅對單一或少數(shù)指標(biāo)成分進(jìn)行定性、定量分析，并不能控制質(zhì)量。

工藝及劑型研究過程中，應(yīng)該堅持以療效為導(dǎo)向，深入研究中藥化學(xué)成分的提取、分離和精制技術(shù)，絕不能以犧牲療效為代價來換取劑型的進(jìn)步。對超微粉、透皮劑等新出現(xiàn)的劑型要盡早研究制定制劑通則，確立新標(biāo)準(zhǔn)。必須加強(qiáng)中藥質(zhì)量全程控制技術(shù)研究，嚴(yán)格按照GMP要求進(jìn)行生產(chǎn)，從原材料、生產(chǎn)工藝和條件、半成品、包裝等全程標(biāo)準(zhǔn)化的角度來控制中藥質(zhì)量。

中藥提取物可以是制劑生產(chǎn)過程中的中間產(chǎn)品，也可以是獨立的成品或制劑，與炮制品一樣可以配伍入藥使用。提高中藥提取物標(biāo)準(zhǔn)化程度，是促進(jìn)中藥制劑標(biāo)準(zhǔn)化的重要手段。經(jīng)過努力，2010年版《中國獸藥典》新增人參莖葉總皂苷、丹參酮提取物、茵陳提取物等植物油脂和提取物16個[4-5]，并首次將“植物油脂和提取物”單列，集中收載22個中藥提取物品種，中藥提取物的特殊性及其在制劑應(yīng)用中的重要地位凸顯。

獸藥研發(fā)已經(jīng)開始使用中藥提取物配伍制劑，如黃芪多糖粉、博落回散，以及由“黃芩提取物”、“黃藤素”兩種提取物配伍處方的新獸藥制劑“芩藤注射液”。

目前生產(chǎn)實踐中，提取物種類繁多，應(yīng)該綜合考慮各類提取物的定位，盡量統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。2015年版《中國藥典》正文收載中藥提取物47種，一些制劑后附專用提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，大多有明確的制劑指向，有較完整的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，可以大量借鑒并移植為獸藥。

3 中藥質(zhì)量評價及其檢測方法標(biāo)準(zhǔn)研究

中藥的質(zhì)量集中體現(xiàn)在療效，控制質(zhì)量是為了確保療效，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立是中藥標(biāo)準(zhǔn)化的核心問題。

獸醫(yī)中藥國家標(biāo)準(zhǔn)主要采用“基源”、“處方”、“性狀”、“鑒別”、“檢查”、“特征(指紋)圖譜”、“含量測定”等對中藥質(zhì)量進(jìn)行控制。

“獸藥規(guī)范”1978年版開始采用顯微鑒別、薄層層析法；《中國獸藥典》1990年版開始采用薄層色譜(TLC)鑒別，用分光光度法做含量測定；2000年版收載對照藥材的TLC鑒別，用TLC和高效液相色譜法(HPLC)做含量測定；2005版大幅度增加TLC鑒別方法；2010年版大幅度增加TLC、HPLC方法，增加了特征(指紋)圖譜的測定；2015年版進(jìn)一步完善了顯微鑒別，增加了質(zhì)譜法、二氧化硫殘留量測定法。

獸醫(yī)中藥標(biāo)準(zhǔn)中的控制方法除化學(xué)定量、儀器分析方法之外，廣泛應(yīng)用顯微、薄層等定性方法，以及生物學(xué)方法。概括起來，可以分為“性狀評價”、“化學(xué)評價”、“生物評價”幾個大類。

3.1 性狀評價

3.1.1 外觀性狀不可或缺 規(guī)定和評價藥品的外觀、氣、味、一般穩(wěn)定性、溶解度以及物理常數(shù)等。包括藥材的經(jīng)驗鑒別。

3.1.2 顯微性狀鑒別簡便可行 利用顯微鏡觀察藥材(飲片)切片、粉末、解離組織或表面制片的組織構(gòu)造、細(xì)胞形狀、內(nèi)含物的特征，以及顯微化學(xué)反應(yīng)，用以鑒別藥材、制劑的真?zhèn)闻c純度的顯微鑒別技術(shù)。

顯微鑒別有著快速、簡便、準(zhǔn)確的特點。不少中成藥所具有的顯微綜合特征專屬性強(qiáng)，不易發(fā)生混淆。應(yīng)用顯微鑒別技術(shù)，既可檢測出中成藥所列出的組分，還能夠通過指標(biāo)性鑒別特征檢測出處方中某些未列出的組分，用于處方外非法添加物的檢測。隨著顯微鑒定與顯微化學(xué)、高性能顯微鏡與數(shù)碼技術(shù)的結(jié)合應(yīng)用，顯微鑒別技術(shù)還會得到更廣泛的應(yīng)用。

3.2 理化評價 中藥的鑒別，除依據(jù)藥材來源，以及利用經(jīng)驗鑒別法、顯微鑒別法外，大量采用理化方法、色譜法、特征(指紋)圖譜等方法以及某些理化常數(shù)的測定，來判斷藥材、植物油脂和提取物、制劑的真?zhèn)巍?/p>

3.2.1 薄層色譜應(yīng)用廣泛 薄層色譜為目前中藥制劑質(zhì)量控制采用最多也是非常有效的定性檢測方法。一般中藥制劑中2/3以上的藥材都可以借鑒單個藥材薄層特點建立薄層鑒別方法，新藥開發(fā)中應(yīng)廣泛開展試驗，驗證或探索薄層展開系統(tǒng)條件。確實分離度不好或薄層陰性干擾太大的，應(yīng)在申報資料中說明不作為鑒別內(nèi)容的理由。

3.2.2 指紋圖譜/特征圖譜主要運用于提取物 中藥指紋圖譜/特征圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)示其化學(xué)特征的色譜圖或光譜圖。目前主要應(yīng)用于中藥提取物，三七總皂苷、丹參總酚酸提取物、丹參酮提取物的指紋圖譜；人參莖葉總皂苷、連翹提取物、茵陳提取物的特征圖譜。

3.2.3 含量測定存在一定的局限性 采用化學(xué)、儀器測定的方法測定獸醫(yī)中藥有效成分或指標(biāo)成分的含量，是獸醫(yī)中藥質(zhì)量控制的重要手段。在新藥研究過程中要確定部分含量指標(biāo)，通過測定原料和最終產(chǎn)品的含量，計算目標(biāo)成分的轉(zhuǎn)移率，以考察工藝的合理性。面對成分復(fù)雜的獸醫(yī)中藥，對單一甚或多個指標(biāo)成分進(jìn)行含量測定，都存在一定的局限性。采用簡單含量標(biāo)準(zhǔn)難以適應(yīng)多治療目的質(zhì)量評價要求，中藥質(zhì)量控制模式不應(yīng)拘泥于單一的“找成分，測含量”的化學(xué)評價模式[7]。

3.2.4 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的精準(zhǔn)與模糊控制 目前，對單一或少數(shù)指標(biāo)成分進(jìn)行定性、定量分析是獸醫(yī)中藥質(zhì)量分析常用方法。對于成分復(fù)雜及藥理作用多樣的中藥及制劑，單一或少數(shù)指標(biāo)成分的定性、定量分析，并不能控制質(zhì)量，不能全面反映其臨床功效；制定一個或多個量化指標(biāo)也無法準(zhǔn)確指導(dǎo)臨床應(yīng)用。中藥成分復(fù)雜，各味藥甚至一味藥的不同成分之間都可能有相互的配伍效應(yīng)，既要重視定性定量指標(biāo)，又要注重與藥理臨床結(jié)合的綜合評價指標(biāo)[8]。

對于藥材而言，所含成分95%以上是不清楚的，規(guī)定有效成分或指標(biāo)成分的含量，在絕大多數(shù)情況下，缺少可行性。由于生物多樣性影響，不少藥材所測含量變化幅度極大。黃連中的小檗堿、山茱萸中的熊果酸、牡丹皮中的丹皮酚等，由于產(chǎn)地、氣候、土壤等原因經(jīng)常達(dá)不到國家標(biāo)準(zhǔn)，即所謂“不合格的真品藥材”[3]。美國第24版藥典對番瀉葉、番瀉葉浸膏和番瀉葉糖漿均未要求測定番瀉苷含量，對番瀉葉藥材質(zhì)量控制著重在形態(tài)特征、非藥用部位灰分等指標(biāo)上。

如何根據(jù)獸醫(yī)中藥標(biāo)準(zhǔn)化特色要求，運用非線性科學(xué)、模糊數(shù)學(xué)、灰色系統(tǒng)理論等，實現(xiàn)獸醫(yī)中藥質(zhì)量的精確而又模糊的整體控制是今后研究的重要命題。

3.3 生物評價 生物評價具有藥效相關(guān)、整體可控等優(yōu)勢，符合中醫(yī)藥特點的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制模式及方法，是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化的重要發(fā)展方向[9]。

中藥質(zhì)量生物評價可分為兩大類：一是基于遺傳信息的中藥基源DNA分子鑒定，如RAPD、DNA條形碼等，主要用于中藥基源鑒定；二是基于生物效應(yīng)的中藥生物效價或活性檢測，主要用于中藥質(zhì)量的優(yōu)劣評價。

2005年版藥典中水蛭的含量測定，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中的消栓腸溶膠囊的效價測定，均為借鑒生物制品中酶效價測定方法。早在20世紀(jì)90年代，農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的新藥黃芪多糖注射液就開始采用小鼠脾增重方法測定生物活性。中國藥典已經(jīng)對清熱解毒類、活血化瘀類中藥制定了一些生物評價標(biāo)準(zhǔn)，以及動物藥如蘄蛇的模板DNA提取、PCR反應(yīng)等等，都可以借鑒使用。對于另外的中醫(yī)藥的基礎(chǔ)理論，如寒熱溫涼，中醫(yī)證的辨證論治，現(xiàn)在沒有確切的現(xiàn)代概念的認(rèn)識，但其本質(zhì)也是一種生物體的過程和反應(yīng)，隨著現(xiàn)代科學(xué)的發(fā)展，如基因組學(xué)、蛋白組學(xué)、混沌醫(yī)學(xué)等的發(fā)展，也許可以將中藥的藥性、功能與主治等關(guān)聯(lián)起來，出現(xiàn)新的、具有變革性的生物檢定方法。

我們要深入研究，在加強(qiáng)現(xiàn)代檢測手段應(yīng)用的同時，重視傳統(tǒng)技術(shù)手段；在采用物理、化學(xué)評價技術(shù)的同時，大力發(fā)展生物評價技術(shù)。在傳統(tǒng)理論和技術(shù)手段基礎(chǔ)上，綜合運用現(xiàn)代物理、化學(xué)、生物學(xué)技術(shù)手段，創(chuàng)新理論與方法，完全可以按照中醫(yī)藥基本理論，建立符合中藥特點的科學(xué)、合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)評價體系，趟出一條中藥研究、生產(chǎn)與質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)化新路。

[1] 王茂，沈紹武，常凱，等.我國中藥標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀及發(fā)展對策研究[J].醫(yī)學(xué)信息學(xué)雜志，2013，34(3)：52-54.

[2] 史怡然，王一濤，卞鷹，等. 中藥現(xiàn)代化的兩大基石-中藥標(biāo)準(zhǔn)化和中藥知識產(chǎn)權(quán)保護(hù)[J]. 中國藥業(yè).2005，14(4)：2-3.

[3] 胡世林.道地藥材與中藥標(biāo)準(zhǔn)化[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2005，1(1)：39-42.

[4] 丁安偉.中藥現(xiàn)代化發(fā)展歷程的回顧與思考[J].江蘇中醫(yī)藥,2004，25(10)：1-4.

[5] 中華人民共和國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典2010年版[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2011.

[6] 顧進(jìn)華，段文龍，胡元亮，《中華人民共和國獸藥典》(2010年版)二部解讀[J].中國獸藥雜志，2011，45(9)：4-9.

[7] 肖小河，王伽伯，代春美，等.面向臨床的中藥標(biāo)準(zhǔn)化研究 [J]. 世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2010，12(4)：617-621.

[8] 華鷹.中藥標(biāo)準(zhǔn)化與中藥專利保護(hù)[J].科技管理研究,2007(4)：220-222.

[9] 肖小河，王伽伯，鄔丹.生物評價在中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化中的研究與應(yīng)用[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2014，16(3)：514-518.

2016-06-08