曹洪志 李成賢 李德立

（四川宜賓職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川宜賓 644003）

?

豬偽狂犬病的血清學(xué)診斷

曹洪志 李成賢 李德立

（四川宜賓職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川宜賓 644003）

[摘 要]在國內(nèi)，豬偽狂犬病危害豬群是嚴(yán)重的，仔豬有高發(fā)病率，成年豬隱性經(jīng)過，癥狀較輕微，為潛在的隱性傳染源。用血清學(xué)方法檢測(cè)豬血清中偽狂犬病病毒抗體，在有效診斷此癥方面有著極為重要的現(xiàn)實(shí)意義。文章應(yīng)用間接ELISA方法檢測(cè)豬偽狂犬病病毒抗體，調(diào)查了解豬偽狂犬病的流行病學(xué)特點(diǎn)，就科學(xué)防治此病做技術(shù)指導(dǎo)。

[關(guān)鍵詞]血清學(xué) 試驗(yàn) 診斷 豬偽狂犬病

1 前言

豬偽狂犬病是由豬偽狂犬病毒（Pseudorabies virus，PrV）引起的豬的急性傳染病。該病在豬呈爆發(fā)性流行。引起妊娠母豬流產(chǎn)、死胎，公豬不育，新生仔豬的大量死亡，育肥豬呼吸困難、生長(zhǎng)停滯等，是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病之一。在國內(nèi)，此病危害豬群是嚴(yán)重的，仔豬有高發(fā)病率，成年豬隱性經(jīng)過，癥狀較輕微，為潛在的隱性傳染源。用血清學(xué)方法檢測(cè)豬血清中偽狂犬病病毒抗體，在豬偽狂犬病的診斷、流行病學(xué)調(diào)查及疫苗免疫效果的檢測(cè)上有一定的意義。本試驗(yàn)應(yīng)用間ELISA方法檢測(cè)豬偽狂犬病病毒抗體，調(diào)查豬偽狂犬病的流行情況，以便有效地控制和消滅豬偽狂犬病。

2 實(shí)驗(yàn)室診斷

2.1 試驗(yàn)儀器

采血器械、離心機(jī)、酶標(biāo)儀、消毒液、微量移液器、試管等。

2.2 試驗(yàn)材料

2.2.1 待檢血清

2.2.2 病毒鑒別診斷實(shí)驗(yàn)盒

豬偽狂犬病毒gE鑒別ELISA診斷試驗(yàn)盒，主要用于檢測(cè)豬血清中抗豬偽狂犬病毒gE蛋白的抗體，用于區(qū)別臨床野毒感染豬和利用gE基因缺失疫苗免疫的豬。試劑盒由抗原包被的微孔板、酶標(biāo)羊抗豬IgG及其他試劑組成，應(yīng)用間ELISA原理檢測(cè)豬血清中抗豬偽狂犬病毒gE蛋白的抗體。

2.3 試驗(yàn)方法

2.3.1 血液采集

取準(zhǔn)備好的試管、注射器，經(jīng)滅菌處理后待用。選定的疑似感染病例，經(jīng)保定后，用酒精棉花球擦拭注射取血耳靜脈部，然后用碘酒擦拭，最后用酒精脫碘。采集血液后，放置事先準(zhǔn)備好的滅菌試管。

2.3.2 血液分離

分離血液，制備待檢血清。準(zhǔn)備好的血液，放入離心管。1500rpm離心，15min后，取上清液注入試管，冷藏備用。

2.4 診斷試驗(yàn)

（1）取預(yù)包被的微孔板，用樣品稀釋液將待檢樣品以1：40稀釋后加入板孔中，每孔100μl。再用樣品稀釋液以1：4稀釋陰、陽性對(duì)照血清，陰、陽性對(duì)照各設(shè)2孔，每孔100 μl。另設(shè)一空白對(duì)照孔，空白對(duì)照孔加100μl稀釋液。輕輕振搖孔中樣品（勿溢出），置37℃溫育30 min。

（2）掉板孔中的溶液，用洗滌液洗板5次，200μl/孔，每次靜置3 min，倒掉，最后一次在吸水紙上晾干。

（3）每孔加酶標(biāo)二抗（抗豬IgG-HRP結(jié)合物）100μl，置37℃溫育30 min。

（4）洗滌5次，方法同上3.2.2。

（5）每孔加底物A液、B液各50μl，混勻，室內(nèi)避光顯色l0 min。

（6）每孔加終止液50μl，10 min內(nèi)測(cè)定結(jié)果。

（7）結(jié)果判定。以空白孔調(diào)零，在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔OD630值。實(shí)驗(yàn)成立的條件是陽性對(duì)照孔平均OD630值大于或等于1.0，陰性對(duì)照孔平均OD630值必須小于0.2。樣品OD630值大于0.39判為陽性；樣品OD630值小于0.39判為陰性。

3 結(jié)果分析

共采集和分離血液101份，有效待檢血清99份。診斷結(jié)果顯示：母豬血清25份，其中陽性為20份，陰性為5份，陽性率達(dá)80%；仔豬血清66份，其中陽性為7份，陰性為59份，陽性率為10.6%；種豬血清8份，其中陽性為4份，陰性為4份，陽性率達(dá)50%。而且，待檢中仔豬6日齡下有2只，體內(nèi)母源抗體效價(jià)，均為陽性，陽性率達(dá)100%。

血清學(xué)檢測(cè)證實(shí)，母豬群體中抗體陽性率最高，達(dá)80%；仔豬血清陽性為7份，陽性率為10.6%。其中，仔豬6日齡下的2只，體內(nèi)母源抗體效價(jià)均為陽性，陽性率達(dá)100%；種豬陽性為4份，陽性率達(dá)50%。由此，該豬群中有一定感染偽狂犬病的比例。同時(shí)，母豬生產(chǎn)中有弱仔出現(xiàn)，可判斷為偽狂犬病病毒感染。此外，66份經(jīng)免疫仔豬群體中，仍有10.6%的陽性抗體。說明，經(jīng)免疫后的仔豬群對(duì)此病產(chǎn)生較好的免疫能力。而2只體內(nèi)母源抗體效價(jià)均為陽性，證實(shí)：重視母豬種，加強(qiáng)免疫，提升抗體能力，一定程度上可有效緩解此癥。

4 防治措施

本次調(diào)查實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)：經(jīng)免疫后豬場(chǎng)，仍有感染野毒的可能，但是，感染率要明顯低于非免疫豬場(chǎng)。由此，種免疫疫苗，能有效防控此病發(fā)生，但是不能消滅此病。臨床上感染病例的出現(xiàn)，同樣可能是免疫失敗造成的。種疫苗這個(gè)問題，國內(nèi)部分專家擔(dān)心弱毒苗有擴(kuò)散病毒的可能，更建議使用滅活疫苗。

5 結(jié)論

總之，經(jīng)血清學(xué)診斷，結(jié)果證實(shí)：該豬場(chǎng)母豬偽狂犬病陽性率達(dá)80%；仔豬偽狂犬病陽性率為10.6%；種豬偽狂犬病陽性率達(dá)50%。由此，本場(chǎng)應(yīng)加強(qiáng)豬場(chǎng)免疫，遏制此病的進(jìn)一步擴(kuò)散。

參考文獻(xiàn)

[1] 黃月香，于自民.一起豬偽狂犬病的診斷與防治[J].中國畜禽種業(yè)，2012，（11）：111-112.

[2] 張家崢，牛桂玲，劉瀟瀟，等.豬偽狂犬病及其防治[J].養(yǎng)豬，2007，（3）：45-48.

[3] 和花益，李飛龍，李忠誠.福貢縣豬偽狂犬病流行情況監(jiān)測(cè)與分析[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘，2013，（3）：34.