李佳虹，唐旗羚，郭紀(jì)全，王其友，祝曙光，王有娣，楊　晨，高思遠(yuǎn)，劉金泳，高瑞萍，王軍業(yè)，葉曉瓊，潘雪刁，臧林泉

(廣東藥學(xué)院 1. 中藥學(xué)院、2. 藥科學(xué)院藥理系，廣東 廣州　510006, 3. 中山大學(xué)新華學(xué)院，廣東 廣州　510520；4. 廣東省人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東 廣州　510080； 5. 中山大學(xué)第三附屬醫(yī)院脊柱外科，廣東 廣州　510630；6. 廣州市南沙中心醫(yī)院藥學(xué)科，廣東 廣州　511400； 7. 廣東藥學(xué)院第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州　510080；8. 中山大學(xué)腫瘤防治中心華南腫瘤學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州　510630)

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基于受體配體結(jié)合技術(shù)研究酸棗仁鎮(zhèn)靜催眠活性成分

李佳虹1，唐旗羚3，郭紀(jì)全4，王其友5，祝曙光4，王有娣1，楊晨1，高思遠(yuǎn)2，劉金泳6，高瑞萍7，王軍業(yè)8，葉曉瓊2，潘雪刁2，臧林泉2

(廣東藥學(xué)院 1. 中藥學(xué)院、2. 藥科學(xué)院藥理系，廣東 廣州510006, 3. 中山大學(xué)新華學(xué)院，廣東 廣州510520；4. 廣東省人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東 廣州510080； 5. 中山大學(xué)第三附屬醫(yī)院脊柱外科，廣東 廣州510630；6. 廣州市南沙中心醫(yī)院藥學(xué)科，廣東 廣州511400； 7. 廣東藥學(xué)院第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州510080；8. 中山大學(xué)腫瘤防治中心華南腫瘤學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州510630)

摘要:目的利用受體配體結(jié)合法探索酸棗仁中鎮(zhèn)靜催眠的活性成分，以及該成分的鎮(zhèn)靜催眠作用機(jī)制與苯二氮卓受體的關(guān)系。方法首先，對酸棗仁中的化學(xué)成分進(jìn)行乙醇粗提；其次，制備Wistar大鼠腦組織勻漿液；根據(jù)受體-配體結(jié)合原理，采用體外飽和分子競爭的方法，利用高濃度的地西泮作為陽性競爭藥，競爭低濃度的酸棗仁中可與腦組織中苯二氮卓受體結(jié)合的配體化合物；收集這些鎮(zhèn)靜催眠有效化合物，利用HPLC和LC-MS方法對酸棗仁與腦組織孵育提取化合物、地西泮與腦組織孵育提取化合物、地西泮+酸棗仁與腦組織孵育提取化合物進(jìn)行譜圖表征差異性分析鑒定，以確認(rèn)被地西泮競爭置換出的酸棗仁中的有效鎮(zhèn)靜催眠化合物。結(jié)果HPLC檢測結(jié)果顯示，與地西泮組、酸棗仁+地西泮組對比，酸棗仁作用組在出峰時(shí)間2.71min和46.87min處出現(xiàn)特殊峰。LC-MS檢測結(jié)果表明，酸棗仁中與苯二氮卓受體結(jié)合的配體化合物分別為274.28 m/z、453.34 m/z、496.34 m/z和608.38 m/z，根據(jù)酸棗仁指紋圖譜的比對這些化合物可能是脂肪酸類物質(zhì)和三萜類化合物。結(jié)論利用受體配體結(jié)合技術(shù)的原理，結(jié)合HPLC和HPLC-MS分析技術(shù)研究酸棗仁中鎮(zhèn)靜催眠活性成分，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，酸棗仁中鎮(zhèn)靜催眠的活性成分可能是脂肪酸類物質(zhì)棕櫚酸(palmitic acid，C16H32O2)、三萜類化合物麥珠子酸(alphitolic acid，C30H48O4)和斯皮諾素(spinosin，C28H32O15)，這3種化合物由于與地西泮競爭結(jié)合苯二氮卓受體，可能具有類似的鎮(zhèn)靜催眠作用，這為進(jìn)一步開發(fā)新型鎮(zhèn)靜催眠藥奠定了理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：酸棗仁；受體配體結(jié)合；苯二氮卓受體；地西泮；鎮(zhèn)靜催眠；作用機(jī)制

當(dāng)今社會(huì)快速發(fā)展，人們的工作生活壓力越來越大，隨之產(chǎn)生的焦慮、失眠等癥狀也不斷地困擾著人們的正常生活，失眠人群在成人中非常普遍，長期的失眠是誘發(fā)抑郁癥、加速衰老、降低機(jī)體免疫力誘發(fā)癌癥等的主要誘因之一。目前用于失眠的鎮(zhèn)靜、催眠類藥物主要有巴比妥類(苯巴比妥等)、苯二氮卓類(地西泮等)、 吡咯酮類非苯二氮類(佐匹克隆等)抗失眠癥藥物，但這些鎮(zhèn)靜、催眠類化學(xué)藥物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有明顯的不良反應(yīng)，長期使用不但出現(xiàn)耐藥性，還有可能加重病情，進(jìn)而使患者產(chǎn)生耐受性，最終導(dǎo)致治療失敗[1]，因此，研究和開發(fā)中藥類養(yǎng)心安神藥調(diào)節(jié)睡眠，尤其是模擬生理性睡眠的藥物的需求顯得日益迫切。

酸棗仁是鼠李科植物酸棗的干燥成熟種子，分布于我國西北、東北、華北及南方一些地區(qū)。酸棗肉中含有大量維生素C 和19 種氨基酸，其中8 種為人體必需氨基酸。在我國，酸棗的藥用價(jià)值歷史悠久，明代大醫(yī)學(xué)家李時(shí)珍就曾指出酸棗“久服安五臟，輕身延年”、“補(bǔ)中、益肝、堅(jiān)筋骨、助陰氣、令人肥健”。我國中醫(yī)理論認(rèn)為，酸棗仁具有補(bǔ)肝寧心、斂汗生津的功效，用于治療虛煩不眠、驚悸多、體虛多汗及津傷口渴[2]。有研究證明，酸棗仁對各種病因引起的失眠癥和神經(jīng)衰弱癥均有良好的效果，是經(jīng)典的鎮(zhèn)靜催眠中藥，并且具有療效穩(wěn)定、安全等優(yōu)點(diǎn)[3-4]。

根據(jù)GABA受體對激動(dòng)劑及拮抗劑的敏感性的不同，目前將GABA受體分為A、B和C三型，這3種受體的分子結(jié)構(gòu)、藥理學(xué)特性各有所不同。地西泮是BDZ類鎮(zhèn)靜催眠藥，選擇性地作用于大腦邊緣系統(tǒng)，與中樞BDZ受體結(jié)合而促進(jìn)γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)的釋放，進(jìn)而阻止了突觸傳遞功能。GABA是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，也是目前研究最為廣泛的與睡眠相關(guān)的受體。GABA受體激動(dòng)劑能夠直接或間接通過前腦的慢波活動(dòng)和外周的張力減退及張力弛緩來促進(jìn)催眠[5]。本文根據(jù)受體-配體結(jié)合原理，用高濃度的地西泮競爭低濃度的酸棗仁中的催眠有效成分，并通過HPLC和LC-MS進(jìn)行定性鑒別，分離出酸棗仁中可與BDZ受體結(jié)合的化合物，為研究酸棗仁有效催眠物質(zhì)基礎(chǔ)闡明作用機(jī)制和藥物靶標(biāo)奠定了基礎(chǔ)。

1材料

1.1儀器FW177-中草藥粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)；FA1004-電子天平(上海良平儀器儀表有限公司)；RE52-99旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；SHZ-D(A)型循環(huán)水真空汞(天津華鑫儀器廠)；組織分散機(jī)(德國IKA T10 basic ULTRA-TURRAX?)；高速離心機(jī)(美國 Thermo Electron Corporation)；DK-8D型電熱恒溫水槽(上海一恒科技有限公司)；1200液相色譜系統(tǒng)(美國Agilent公司)；液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(Agilent 1100系列液相色譜系統(tǒng)，電噴霧離子源，離子阱質(zhì)量分析檢測系統(tǒng))。

1.2試劑與樣品酸棗仁藥材(湖北圣峰藥業(yè)有限公司)；地西泮(上海旭東海普藥業(yè)有限公司)。

1.3動(dòng)物♂ Wistar大鼠〔SCXK(粵)2013-0034〕，180～220 g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2方法

2.1中藥粗提液的制備取酸棗仁粉碎過20目，稱取酸棗仁粉0.05 kg，加10倍量50%乙醇進(jìn)行冷浸24 h，真空抽濾，濾液用旋蒸儀水浴加熱濃縮至10 mL，水浴蒸干。稱重，加水溶解，得到濃度為7.5 g·L-1的酸棗仁粗提液。

2.2腦組織勻漿的制備取♂ Wistar大鼠3只，處死后迅速取出大腦，在PBS緩沖液中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，放入50 mL燒杯中。用移液槍移取25 mL PBS緩沖液于燒杯中，用眼科小剪快速剪碎組織塊。勻漿，4℃離心1 000 r·min-1×5 min，棄去上清液，保留沉淀。

2.3體外飽和競爭實(shí)驗(yàn)將腦BDZ受體組織勻漿液分為3組，分別為酸棗仁組、地西泮組及酸棗仁+地西泮組。

酸棗仁組：取1 mL腦組織勻漿液，加酸棗仁粗提液1 mL(濃度為7.5 g·L-1)。再加PBS緩沖液稀釋至5 mL，充分混勻后分別置于4 ℃、25 ℃及37 ℃孵育1 h，通過玻璃纖維微孔濾膜過濾，用5 mL甲醇洗膜4次，保留不能通過微孔濾膜的蛋白質(zhì)大分子，收集濾液和洗脫液。

地西泮組：取1 mL腦組織勻漿液，加地西泮2 mL(濃度為5 g·L-1)。再加PBS緩沖液稀釋至5 mL，充分混勻后分別置于4 ℃、25 ℃及37 ℃孵育1 h，通過玻璃纖維微孔濾膜過濾，用5 mL甲醇洗膜4次，保留不能通過微孔濾膜的蛋白質(zhì)大分子，收集濾液和洗脫液。

酸棗仁+地西泮組：取1mL腦組織勻漿液，加酸棗仁粗提液1 mL(濃度為7.5 g·L-1)，充分混勻后分別置于4 ℃、25 ℃及37 ℃孵育1 h，再加地西泮2 mL(濃度為5 g·L-1)，加PBS緩沖液稀釋至5 mL，混勻后分別置于4 ℃、25 ℃及37 ℃孵育1 h。通過玻璃纖維微孔濾膜抽濾，用5 mL甲醇洗膜4次，保留不能通過微孔濾膜的蛋白質(zhì)大分子，收集濾液和洗脫液。

2.4HPLC檢測樣品處理：將“2.3”中收集得到的3組工作液分別過4.5 μm微孔濾膜，濾液進(jìn)樣。

色譜條件，色譜柱：Agilent Extend C18柱(150 mm×4.6 mm，5)；流動(dòng)相：乙腈-水(30 ∶70)；柱溫為30 ℃；檢測波長：204 nm；流速：0.8 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL。

2.5HPLC-MS檢測樣品處理：將“2.3”中收集得到的3組溶液分別過4.5微孔濾膜，濾液進(jìn)樣。

色譜條件，色譜柱：Agilent Extend C18柱(150 mm×4.6 mm，5)；流動(dòng)相：以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，采用梯度洗脫，具體程序見Tab1；柱溫為30 ℃；檢測波長：204 nm；流速：0.8 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL。

質(zhì)譜條件，電離源模式：電噴霧電離源；干燥氣：7 L·min-1；霧化氣壓力：241 kPa；干燥氣溫度；325 ℃。

3結(jié)果

3.1HPLC測定酸棗仁催眠有效成分將3組樣品分別用HPLC法檢測，得到以下圖譜。酸棗仁組的HPLC譜圖顯示，出峰時(shí)間為在2.713 min、3.160 min、10.727和46.870 min，見Fig 1A；地西泮組的HPLC譜圖出峰時(shí)間在3.168和10.711 min，見Fig 1B；酸棗仁+地西泮組的HPLC譜圖出峰時(shí)間在3.169、10.693 min，見Fig 1C。從3個(gè)譜圖的對比可以推測，F(xiàn)ig 1A中出峰時(shí)間為2.713 min 和46.870 min的化合物為酸棗仁中發(fā)揮鎮(zhèn)靜催眠作用的主要成分。3組樣品的出峰情況見Tab2。

A： Semen group；B： Diazepam group； C： Semen+Diazepam group

3.2HPLC-MS測定酸棗仁催眠有效成分本實(shí)驗(yàn)采用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，三組樣品的LC-MS 在正離子掃描模式下的HPLC-MS總離子流色譜圖如Fig 2。與地西泮組、酸棗仁+地西泮組的譜圖對比，酸棗仁組在Tab1的洗脫條件下在1.51、7.53和10.36 min出峰，其質(zhì)譜分析見Fig 3，其中1.51 min的化合物為m/z：453.35、m/z：608.38，7.53 min的化合物為m/z：274.28、m/z：318.30，10.36 min的化合物為m/z： 496.34、m/z：522.35。根據(jù)酸棗仁指紋圖譜的比對，化合物274.28m/z、453.34m/z、496.34m/z、608.38m/z可能分別為脂肪酸類物質(zhì)棕櫚酸(palmitic acid，C16H32O2)，三萜類化合物麥珠子酸(alphitolic acid，C30H48O4)和斯皮諾素(spinosin，C28H32O15)，化合物318.30 m/z、522.35 m/z暫未發(fā)現(xiàn)報(bào)道。

4討論

目前用于治療失眠組方中包含的中藥材頻次較多的為酸棗仁。酸棗仁別名棗仁、酸棗核，《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品，作為鼠李科植物酸棗的成熟種子分布在全國各地[6]，已有研究表明，酸棗仁具有鎮(zhèn)靜催眠作用、抗心律失常、改善心肌缺血、降血脂、降血壓、免疫增強(qiáng)作用等[7]。而酸棗仁內(nèi)具有鎮(zhèn)靜催眠的有效成分包括總生物堿、黃酮類、脂肪酸、三萜類化合物和皂苷類化合物等[8-11]。

受體理論是藥效學(xué)的基本理論之一，從分子水平解釋生命的生理和病理過程、藥物的藥理作用機(jī)制、藥物分子的結(jié)構(gòu)效應(yīng)關(guān)系[17]。受體(receptor)是指一類存在于胞膜或胞內(nèi)的，能與細(xì)胞外專一信號分子結(jié)合，進(jìn)而激活細(xì)胞內(nèi)一系列生物化學(xué)反應(yīng)，使細(xì)胞對外界刺激產(chǎn)生相應(yīng)效應(yīng)的特殊蛋白質(zhì)。與受體結(jié)合的生物活性物質(zhì)統(tǒng)稱為配體(ligand)。受體配體結(jié)合具有特異性、高度親和力、飽和性、可逆性、可競爭置換性的特點(diǎn)。特異性是受體的最基本特點(diǎn)，保證了信號傳導(dǎo)的正確性。配體和受體的結(jié)合是一種分子識別過程，它依靠氫鍵、離子鍵與范德華力的作用使兩者結(jié)合，配體和受體分子空間結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)性是特異性結(jié)合的主要因素?？赡嫘浴⒖筛偁幹脫Q性的特點(diǎn)為我們利用已知靶標(biāo)的化學(xué)藥物競爭性置換并鑒定出重要單體活性成分奠定了理論基礎(chǔ)。

A： Semen group； B： Diazepam group； C： Semen+Diazepam group

A：MS-1.459 min； B： MS-7.678 min；C：MS-10.362 min

本文檢測到的化合物m/z：453與已有研究[12]中關(guān)于酸棗仁成分的鑒定結(jié)果相接近，可能為酸棗仁中的羽扇豆丸型三萜類化合物?；衔飉/z：608[M]與劉朋朋[13]對酸棗仁化學(xué)成分的研究相一致，該化合物可能是三萜類化合物斯皮諾素(Spinosin，C28H32O15)；化合物m/z：274[M+18]與已有的研究[14]結(jié)果一致，可能為酸棗仁中脂肪酸類化合物——棕櫚酸(Palmitic acid，C16H32O2)；另外，化合物m/z：496[M+23]也可能是酸棗仁中的三萜類化合物麥珠子酸(Alphitolic acid，C30H48O4)，與曾路[9]的研究結(jié)果相一致。1957年，黃文興等[15]研究有關(guān)酸棗仁的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)，用酸棗仁灌胃大白鼠，不管白天或者黑夜，病態(tài)或者正常均可抑制其中樞神經(jīng)系統(tǒng)，表現(xiàn)出鎮(zhèn)靜催眠作用。國內(nèi)外雖然已有大量文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)有關(guān)酸棗仁活性成分和藥理作用研究，但對酸棗仁中催眠有效成分的鎮(zhèn)靜催眠機(jī)制尚未見。利用受體配體結(jié)合HPLC/HPLC-MS研究其中的鎮(zhèn)靜催眠有效成分更未見文獻(xiàn)報(bào)道。

GABA對哺乳動(dòng)物的神經(jīng)元有抑制作用，是神經(jīng)系統(tǒng)中極為重要的一種神經(jīng)遞質(zhì)，可起到鎮(zhèn)靜、催眠、抗焦慮、抗癲癇等作用。苯二氮卓類藥物尤其是地西泮通過與BDZ受體結(jié)合，起到興奮神經(jīng)元作用，促進(jìn)GABA與GABAA受體的結(jié)合而使Cl-通道開放的頻率增加，更多的Cl-內(nèi)流，使神經(jīng)細(xì)胞超極化，產(chǎn)生突觸后抑制效應(yīng)，是最常用的調(diào)節(jié)睡眠的藥物[16]。

為避免傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)先利用各種不同的有機(jī)溶劑萃取、大孔樹脂、C18柱等現(xiàn)代工藝逐個(gè)分離各種組分，再驗(yàn)證各組分活性并表征化學(xué)結(jié)構(gòu)的繁瑣步驟。本實(shí)驗(yàn)通過地西泮與酸棗仁提取物的GABA-BDZ受體競爭結(jié)合，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，酸棗仁催眠有效成分作為BDZ受體地西泮結(jié)合部位配體起到鎮(zhèn)靜催眠作用，這為酸棗仁催眠物質(zhì)基礎(chǔ)和確切機(jī)制的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。通過GABA-BDZ結(jié)合實(shí)驗(yàn)也為研制新型鎮(zhèn)靜催眠藥物提供一種新的思路。根據(jù)受體配體結(jié)合的核心技術(shù)原理建立了一種可以快速分析和鑒定天然產(chǎn)物中的作用于特征藥靶的化合物的新方法，達(dá)到了既可以明確候選天然產(chǎn)物中的活性有效成分，同時(shí)又可以闡明該化合物的作用機(jī)制/藥物靶標(biāo)，對于中藥現(xiàn)代化研究具有重要意義。

(致謝:本文是在廣東藥學(xué)院藥科學(xué)院新藥篩選與藥效學(xué)評價(jià)中心完成的，感謝葉曉瓊同學(xué)對本論文做出的重要貢獻(xiàn)。)

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Effective components of Semen Ziziphi Spinosae for sedative-hypnotic based on receptor ligand binding assay

LI Jia-hong1，TANG Qi-ling3，GUO Ji-quan4，WANG Qi-you5，ZHU Shu-guang4，WANG You-di1，YANG Chen1，GAO Si-yuan2，LIU Jin-yong6，GAO Rui-ping7，WANG Jun-ye8，YE Xiao-qiong2，PAN Xue-diao2，ZANG Lin-quan2

(1.CollegeofChineseMedicine, 2.Pharmacology,SchoolofPharmacy,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China; 3.XinhuaCollegeofSun-YatUniversity,Guangzhou510520;4.DeptofRespiratory,GuangdongProvinceHospital,Guangzhou510080; 5.TheThirdAffiliatedHospitalofSunYat-SenUniversity,Guangzhou510630; 6.MedicineDisciplineofGuangzhouNanshaCentralHospital,Guangzhou511400;7.theFirstAffiliatedHospital,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510080; 8.StateKeyLaboratoryofOncologyinSouthernChina,SunYat-SenUniversityCancerCenter,Guangzhou510630)

Key words:Semen Ziziphi Spinosae; receptor ligand binding; BDZ receptor; diazepam; sedative-hypnotic; mechanism

Abstract:AimTo determine the effective components of Semen Ziziphi Spinosae for sedative-hypnotic and its mechanism. MethodsThe extraction of Semen Ziziphi Spinosae and the rat brain homogenates were prepared. High concentrations of Diazepam competitively replaced the ligand compounds of Semen Ziziphi Spinosae combining BDZ receptor in brain tissue, and all the compounds with sedative and hypnotic effects were collected and identified by HPLC and LC-MS technique, as the compounds extracted from the brain tissue were administered with Semen Ziziphi Spinosae. The brain tissue was administered with Diazepam, and with Semen Ziziphi Spinosae and Diazepam. ResultsThe HPLC chromatograms show that the peak time of BDZ receptor ligand compounds was 2.71min and 46.87min, when compared with Diazepam. And the LC-MS chromatograms display the relative molecular weight of the ligand compounds was 274.28 m/z,453.34 m/z,496.34 m/z and 608.38 m/z respectively. According to the fingerprint of Semen Ziziphi Spinosae, these compounds may be fatty acid substances and lupine pill triterpene compounds. ConclusionsOn the basis of the principle of receptor ligand binding, we established a way to quickly analyze and identify the role of natural products in the same drug target compounds. The method not only can clearly define the effective components of natural products, but also clarify the mechanism of action of the compounds. The active ingredient of calm hypnosis in Semen Ziziphi Spinosae may be fatty acid substances Palmitic acid(C16H32O2)and lupine pill triterpene compounds Alphitolic acid(C30H48O4)and Spinosin(C28H32O15). They exert their sedative and hypnotic effects by combining with BDZ receptor, and the research has laid a theoretical foundation for the further study about mechanism of Semen Ziziphi Spinosae.

收稿日期：2015-12-22，修回日期：2016-02-21

基金項(xiàng)目：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(No 2015A020211028);吳階平基金會(huì)資助項(xiàng)目(No 320.6750.1208);廣東省醫(yī)學(xué)科研基金(No A2013320)

作者簡介：李佳虹(1989-)，女，碩士，研究方向：中藥活性成分與新藥研發(fā)，E-mail：vlijiahong2320@163.com； 臧林泉(1965-)，男，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：腫瘤藥理及多肽藥物，通訊作者，Tel：020-39352123，E-mail：zanglq@163.com

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.04.014

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1001-1978(2016)04-0508-06

中國圖書分類號：R282.71；R284.1；R392.11；R971.3

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-3-18 11:22網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160318.1122.028.html