周　恒，李　俊，王　華，3

(安徽醫(yī)科大學(xué) 1.藥學(xué)院、2.第一附屬醫(yī)院腫瘤科、3.肝病研究所，安徽 合肥　230032)

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酒精性肝病動(dòng)物模型研究進(jìn)展

周恒1,2，李俊1，3，王華1,2，3

(安徽醫(yī)科大學(xué) 1.藥學(xué)院、2.第一附屬醫(yī)院腫瘤科、3.肝病研究所，安徽 合肥230032)

摘要：長(zhǎng)期飲酒是全世界導(dǎo)致慢性肝病的重要原因，可導(dǎo)致肝硬化和肝癌。缺乏能夠完全模擬人類酒精性肝病的動(dòng)物模型限制了酒精性肝病病理機(jī)制的研究。因此，建立或者改進(jìn)酒精性動(dòng)物模型對(duì)于研究酒精性肝病機(jī)制，進(jìn)而提出治療方案具有重要意義。目前，使用最廣泛的酒精性肝損傷模型有急性酒精灌胃模型、Lieber-DeCarli模型、Tsukamoto-French模型和Gao-binge模型等，該文總結(jié)并評(píng)價(jià)了這些酒精性肝病的動(dòng)物模型，這些動(dòng)物模型為研究酒精性肝病和開(kāi)發(fā)新的治療性藥物提供了非常有用的研究工具。

關(guān)鍵詞:酒精性肝??； 動(dòng)物模型； 脂肪肝； 肝損傷； 炎癥； 纖維化

我國(guó)是肝病大國(guó)，嚴(yán)重威脅我國(guó)人民健康，由于乙肝疫苗的普及、抗肝炎病毒藥物的應(yīng)用和傳染病防治方法的有效實(shí)施，病毒性肝炎新發(fā)病例不斷減少[1]；與之相反，隨著人民生活水平的提高，酒精濫用引起的酒精性肝病(alcoholic liver disease, ALD)的發(fā)病率迅速增加[1-2]。酒精是全球范圍內(nèi)最頻繁飲用并且被廣泛認(rèn)可具有肝臟毒害作用，ALD已經(jīng)成為世界范圍內(nèi)導(dǎo)致慢性肝病的重要原因。大約90%的重度飲酒者(酒精攝入多于60克/天)呈現(xiàn)脂肪肝，而只有10%～35%的重度飲酒者會(huì)發(fā)展成酒精性肝炎，5%～15%的重度飲酒者會(huì)發(fā)展成肝硬化[2]。美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生院酒精濫用與成癮研究所(NIAAA/NIH)最新的一份調(diào)查報(bào)告顯示，肝硬化已成為美國(guó)導(dǎo)致死亡的第12大原因。2007年共有29 925例病人死于肝硬化，這其中有48%是和酒精相關(guān)的。在我國(guó)，酒文化源遠(yuǎn)流長(zhǎng)，但其引起的健康問(wèn)題特別是酒精相關(guān)性肝損傷在我國(guó)長(zhǎng)期沒(méi)有得到應(yīng)有的重視，嚴(yán)重威脅我國(guó)人民的身體健康[1]。ALD的疾病譜很廣，包括從輕微的脂肪變性到脂肪肝、纖維化、肝硬化和肝癌[2]。臨床上，ALD的治療上缺乏有針對(duì)性的靶點(diǎn)治療方法，臨床上只能被動(dòng)的以對(duì)癥處理為主(用營(yíng)養(yǎng)支持來(lái)防治營(yíng)養(yǎng)不良和用糖皮質(zhì)激素來(lái)控制炎癥)[3]。因此，建立更接近人類ALD的動(dòng)物模型，利用這些動(dòng)物模型研究其發(fā)生機(jī)制，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)等，均具有非常重要的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)理論和臨床價(jià)值。然而，到目前為止，還沒(méi)有能夠概括ALD全進(jìn)程的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，只能用不同的?dòng)物模型模擬ALD的部分病變，見(jiàn)總結(jié)示意Fig 1。本文綜述了近年來(lái)有關(guān)ALD動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[4-7]。應(yīng)用這些動(dòng)物模型不僅已被證明是研究ALD不同階段發(fā)病機(jī)制的有用工具，還增強(qiáng)了對(duì)ALD中酒精性肝損傷及肝再生的信號(hào)通路等的認(rèn)識(shí)，而且還將被藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)用于新的藥物治療ALD的靶點(diǎn)研究。本文中，我們總結(jié)了目前常用的ALD動(dòng)物模型的優(yōu)缺點(diǎn)，重點(diǎn)介紹了有新進(jìn)展的低濃度酒精蓄積-急性酗酒小鼠模型模擬急性酒精性肝炎(alcoholic hepatitis，AH)以及慢性酒精性肝纖維化(alcoholic hepatic fibrosis，AHF)小鼠模型，討論了這些模型在研究ALD發(fā)病機(jī)制中的應(yīng)用。

1急性酒精灌胃模型

這種模型采用簡(jiǎn)單的動(dòng)物灌胃給予酒精的操作方法，最常用的酒精劑量是4～6 g·kg-1體重[8]。這種模型常用來(lái)研究酒精性肝損傷特別是急性發(fā)病的機(jī)制[7-8]。研究表明，急性酒精灌胃能明顯影響肝線粒體功能，誘導(dǎo)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)。盡管灌胃能夠?qū)е旅黠@的炎癥反應(yīng)，但這種模型的缺點(diǎn)是：只能引起血清ALT和AST的輕度升高，限制了其的廣泛應(yīng)用。但是該模型對(duì)既往沒(méi)有基礎(chǔ)酒精蓄積，單純一次性急性酒精損傷的機(jī)制研究具有很大的優(yōu)勢(shì)；特別在甄別和慢性酒精中毒導(dǎo)致的肝損傷不同的機(jī)制研究中非常有用。例如，有研究表明，急性酒精灌胃后的肝細(xì)胞可發(fā)生細(xì)胞自噬[7]，而慢性酒精性肝損傷并不能導(dǎo)致明顯的自噬增加。

2慢性酒精喂養(yǎng)模型(Lieber-DeCarli 模型)

這種模型是酒精研究領(lǐng)域的著名專家Charles S. Lieber創(chuàng)立，是應(yīng)用最為悠久和廣泛的動(dòng)物模型。最早期的動(dòng)物慢性酒精喂養(yǎng)模型是通過(guò)在飲用水中直接添加酒精實(shí)現(xiàn)的，然而由于動(dòng)物厭惡酒精的天性，造成動(dòng)物脫水、血中酒精濃度過(guò)低和營(yíng)養(yǎng)不良，更為明顯的缺陷是直接喂飲含酒精的水并不能引起明顯的肝損傷。因此，直接飲用含酒精水的動(dòng)物模型很少應(yīng)用于ALD發(fā)病機(jī)制的研究。為了克服這種模式的不足，Lieber博士的團(tuán)隊(duì)最早建立了一種動(dòng)物液體飼料喂養(yǎng)模式，在液體飲食的基礎(chǔ)上添加高濃度的酒精，克服了動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)不良的缺點(diǎn)并且增加了酒精導(dǎo)致的肝損傷程度[9]。這種模型的優(yōu)點(diǎn)為建模方法簡(jiǎn)單，使用商業(yè)化的粉末狀飼料，按說(shuō)明書(shū)方法加水配置成液態(tài)食物，臨用前加所需濃度的酒精，每天更換1次以保持酒精濃度的穩(wěn)定。該種液體飼料喂養(yǎng)模式已經(jīng)被廣泛用作研究ALD的動(dòng)物模型。通過(guò)這種喂養(yǎng)方式4～12周，可模仿人類慢性飲酒模式，最終可導(dǎo)致小鼠肝臟輕度肝損傷、肝脂肪變性和輕微的肝臟炎癥。相對(duì)于在飲用水中添加酒精的模型而言，慢性酒精液體飼料喂養(yǎng)模型的這些改進(jìn)，使得它在相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)被認(rèn)為是最適合應(yīng)用于ALD早期階段病變研究的最佳模型[7]。

雖然這種模型在直接飲用含酒精水模型基礎(chǔ)上有重大進(jìn)步，但仍存在以下缺點(diǎn)：慢性酒精液體飼料喂養(yǎng)只引起輕微肝損傷，即血清轉(zhuǎn)氨酶的輕度升高、輕度肝臟脂肪變性、少量炎癥而沒(méi)有纖維化[7,10-11]。此外，這種模型也并沒(méi)有完全規(guī)避了動(dòng)物厭惡酒精的天性。表現(xiàn)在小鼠對(duì)酒精液體飼料的消耗量要比對(duì)照組小鼠的食物消耗量小。由于上述這些局限性的存在，促進(jìn)了以下討論的ALD動(dòng)物模型的進(jìn)展。

3胃內(nèi)喂養(yǎng)模型(Tsukamoto-French模型)

為了克服動(dòng)物厭惡酒精導(dǎo)致進(jìn)食減少的缺陷，學(xué)者Tsukamoto建立了一種腸內(nèi)連續(xù)喂養(yǎng)模式，通過(guò)手術(shù)放置腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)管，直接予以含酒精流質(zhì)飲食和營(yíng)養(yǎng)供給，可使得動(dòng)物體內(nèi)能夠獲得較高的血清酒精濃度[12-13]。這種模式最初用于大鼠[12]，后來(lái)亦用于小鼠[13]。這種喂養(yǎng)方式下的小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶水平明顯增加，肝臟脂肪變性明顯，有局灶性壞死和炎癥病灶[12]。本模型的主要優(yōu)點(diǎn)是在一定條件下能夠誘導(dǎo)肝纖維化[14]，甚至和鐵聯(lián)用還可以導(dǎo)致肝硬化[15]。在此模型的基礎(chǔ)上，研究者還嘗試很多改進(jìn)，試圖增加肝損傷。French等[15]使用含有酒精的高脂飲食喂養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)了在Wistar大鼠發(fā)生了明顯的纖維化。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，與單純酒精飲食相比，含羰基鐵的高脂酒精飲食給Wistar鼠灌胃，與只用酒精飲食相比，其血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase，ALT)增高了2倍，并且有小結(jié)節(jié)性肝硬化形成，這種加重的肝損傷與脂質(zhì)的過(guò)氧化增加和鐵有關(guān)[15]。最近，美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生院酒精濫用與成癮研究所(NIAAA/NIH)的肝病實(shí)驗(yàn)室，本文作者亦參與的研究工作表明，高脂飲食的基礎(chǔ)上給予一次性高濃度酒精灌胃，模擬人類的飲食習(xí)慣即長(zhǎng)期高脂飲食加急性醉酒的生活方式，可引起嚴(yán)重的肝損傷，化學(xué)因子CXCL1在其中發(fā)揮重要作用，高脂飲食加急性酒精灌胃可引起肝臟和血清CXCL1的劇烈升高，進(jìn)而吸引中性粒細(xì)胞遷移入肝臟引起炎癥損傷[18]。

這種胃腸直接置管給予酒精液體飲食造成酒精性肝損傷的動(dòng)物模型具有以下優(yōu)點(diǎn)：不僅能夠修改各種參數(shù)，如營(yíng)養(yǎng)成分的組成等，尤為重要的是可以在動(dòng)物體內(nèi)保持一個(gè)較高的酒精含量，這樣就能夠?yàn)檠芯烤凭c其他營(yíng)養(yǎng)素或環(huán)境因素的共同作用提供一個(gè)較為理想的模型，為進(jìn)一步研究ALD早期病變機(jī)制研究鋪平了道路。然而，這種模型仍然存在技術(shù)難度大，動(dòng)物飼養(yǎng)條件高等缺點(diǎn)。因?yàn)橛星忠u性的手術(shù)，需對(duì)動(dòng)物進(jìn)行密切照顧防止并發(fā)癥，需要有昂貴的配套設(shè)備，限制了其推廣應(yīng)用[12-13]。

4“二次打擊”或“多次打擊”模型

由于上述兩種經(jīng)典的ALD動(dòng)物模型造成的肝損傷程度仍然不能達(dá)到人類ALD后期的嚴(yán)重的肝臟病變程度，很多科研工作者試圖使用“二次打擊”的酒精喂養(yǎng)模型去模仿晚期更嚴(yán)重的疾病階段[16]。 “二次打擊”模型的建立是基于以下理論基礎(chǔ)：?jiǎn)渭兙凭桂B(yǎng)大多情況下只能誘發(fā)脂肪變性，而這種脂肪病變是ALD后期嚴(yán)重病變的基礎(chǔ)，如想達(dá)到更嚴(yán)重的損傷往往需要第二波打擊即二次損傷?！暗诙ü簟钡姆椒òI(yíng)養(yǎng)成分修改、藥物因素(如伴刀豆球蛋白A或四氯化碳)、激素、CYP誘導(dǎo)劑、TLR配體、基因操作(轉(zhuǎn)基因或基因敲除)和病毒感染[16]?！岸未驌簟被颉岸啻未驌簟蹦Ｐ蛯?duì)研究酒精性肝纖維化和肝炎特別有用，因?yàn)闊o(wú)論是肝纖維化還是明顯的炎癥都很難由單純的慢性酒精誘導(dǎo)，但酒精加四氯化碳即可誘導(dǎo)明顯的肝纖維化[17]。然而，這種 “二次打擊”模型存在的缺點(diǎn)顯而易見(jiàn)，由于“二次打擊”中有非酒精因素的作用，因此，其結(jié)果可能與單純酒精引起的機(jī)制和病理變化有一定的區(qū)別。所以，研究者在解釋獲得的研究結(jié)果時(shí)必須小心謹(jǐn)慎，因?yàn)楹茈y確定研究數(shù)據(jù)是來(lái)源于酒精還是二次打擊的因素引起。

5慢性酒精喂養(yǎng)加急性酒精灌胃模型(Gao-binge模型)

許多酒精性肝炎患者都有長(zhǎng)期慢性飲酒史，最近有酗酒醉酒的病史。這一發(fā)病過(guò)程是之前任何ALD酒精喂養(yǎng)模型所不能模擬的。為了解決這一問(wèn)題，作者在美國(guó)NIH/NIAAA工作時(shí)參與建立了一種新的慢性酒精積累加一次急性酒精灌胃酗酒的ALD模型，這一模型與人類的飲酒方式高度接近，可模仿臨床上的慢性酒精依賴患者一次醉酒后酒精性肝炎的急性發(fā)作[5-6]。這種模型的建立方法簡(jiǎn)單：首先給予小鼠5 d的液體飲食適應(yīng)期，然后接受10 d的5%～6%酒精液體飼料喂養(yǎng)，d 11早上給予一個(gè)高劑量酒精灌胃(5～6 g·kg-1體質(zhì)量)，9 h后處理動(dòng)物，取血、肝臟標(biāo)本。這一模型的優(yōu)點(diǎn)有：可模擬人酒精性肝炎的發(fā)病過(guò)程，血清ALT水平明顯升高、肝臟有較嚴(yán)重的脂肪變性和炎癥，肝臟中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，血清中酒精濃度較高[5,19]。目前，這個(gè)模型已經(jīng)開(kāi)始廣泛推廣應(yīng)用[20-21]。這個(gè)模式的喂養(yǎng)方案還可以將慢性酒精喂養(yǎng)的時(shí)間延長(zhǎng)至8～12周，然后給予一次高劑量的酒精灌胃，可產(chǎn)生更嚴(yán)重的肝損傷(待發(fā)表)。

這種Gao-binge模型與以往經(jīng)典的Lieber-DeCarli 和Tsukamoto-French模型相比，能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生更高水平的脂肪變性、血清ALT和肝臟炎癥反應(yīng)(Tab1)[5-6]。Gao-binge模型另外一個(gè)重要特點(diǎn)是中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)明顯[1,5-6,19]，而其他慢性酒精喂養(yǎng)模型的損傷與肝的巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)有關(guān)[7-8,12-13,16]。中性粒細(xì)胞標(biāo)記的Ly6的肝表達(dá)和MPO陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量在慢性酒精喂養(yǎng)之后保持不變，但在Gao-binge模型中明顯升高了[19]。E-選擇素表達(dá)上調(diào)對(duì)中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)有協(xié)同作用[19]。目前，已有學(xué)者通過(guò)Gao-binge模型研究急性酒精性肝損傷的新機(jī)制及ALD治療的新靶點(diǎn)。Bin Gao實(shí)驗(yàn)室除了發(fā)現(xiàn)的E-選擇素在ALD中的關(guān)鍵作用外，還探討了白介素-22在Gao-binge模型中對(duì)ALD的保護(hù)作用[22]。最近，該實(shí)驗(yàn)室利用該模型檢驗(yàn)了糖皮質(zhì)激素潑尼松龍?jiān)谥委熅凭愿螕p傷中的作用[23]。潑尼松龍用于急性酒精肝的治療已經(jīng)40多年，但結(jié)果有喜有憂，潑尼松龍表現(xiàn)出能加劇由Gao-binge模型或四氯化碳誘導(dǎo)的肝炎[23]。潑尼松龍的有害作用是因?yàn)樗軌蛞种聘卧偕陀绊懼行粤＜?xì)胞與巨噬細(xì)胞的吞噬作用。這些結(jié)果表明，潑尼松龍可能不適合用于肝毒素誘導(dǎo)的肝損傷的治療；相反，它能夠改善由刀豆蛋白A誘導(dǎo)的T/NKT細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性肝炎[23]。

6慢性酒精性肝病和肝纖維化模型

重度酒精依賴病人長(zhǎng)期大劑量飲酒，且有反復(fù)多次酗酒醉酒史，呈現(xiàn)醉酒-恢復(fù)-醉酒模式。作者一直試圖建立一種慢性酒精肝損傷再生模型以模擬這類病人，進(jìn)而利用動(dòng)物模型研究其發(fā)生機(jī)制。此外，到目前為止仍然缺乏單純酒精引起的慢性酒精性肝纖維化模型，特別是小鼠。我們課題組已在大鼠上初步建立了酒精性肝纖維化模型[24-25]，但仍需要和國(guó)際通用的液體飼料喂養(yǎng)接軌，建立規(guī)范的實(shí)驗(yàn)流程，該項(xiàng)工作正在進(jìn)行中。作者建立的慢性酒精性肝炎模型的方法：在一直給予低濃度乙醇(5%)的流質(zhì)喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上，給予每周2次的高濃度酒精(30%)灌胃(5～6 g·kg-1體重)，一共8～12周。這種方法的小鼠死亡率較高，限制了更多酒精的給予和更重小鼠酒精性肝損傷的誘導(dǎo)。該模型與Gao-binge模型比較，血清轉(zhuǎn)氨酶水平反而下降，肝臟脂肪變更為嚴(yán)重，肝臟中中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)更為彌散，機(jī)制與氧化應(yīng)激有關(guān)。在成年小鼠(3月齡)并不能誘導(dǎo)出明顯的肝臟纖維化病理改變，僅僅有與纖維化反應(yīng)有關(guān)的mRNA表達(dá)增加。然而，令我們感興趣的是在老年小鼠(12～16月齡)，同樣的酒精處理方式(5%酒精喂飼/天+5 g·kg-1灌胃2次/周)8～12周后在肝臟形成了典型的酒精性肝纖維化改變(“chicken wire” fibrosis，雞籠樣纖維化)。上述結(jié)果提示使用12月齡的小鼠，給予慢性酒精積累加多次高劑量酒精灌胃可以建立酒精性肝纖維化小鼠模型。目前，作者正利用該模型研究酒精性肝纖維化產(chǎn)生機(jī)制。

與小鼠相比較，大鼠對(duì)酒精的耐受性更好，國(guó)內(nèi)有科學(xué)工作者采用以下方法對(duì)大鼠進(jìn)行酒精灌胃飼養(yǎng)：即隨著飼養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷加大酒精劑量，具體方法是，1～4周的酒精飼養(yǎng)劑量為5 g·kg-1體重/天，然后，從5～8周開(kāi)始，劑量上升到7 g·kg-1體重/天；9～12周劑量為9 g·kg-1體重/天；最后，從13～24周劑量為9.5 g·kg-1體重/天[25]。通過(guò)這種遞增式的高濃度長(zhǎng)時(shí)間酒精灌胃，比較容易誘導(dǎo)急性肝損傷，同時(shí)可以誘導(dǎo)較為嚴(yán)重的酒精性肝纖維化[26]。

7結(jié)論與展望

綜上所述，ALD的動(dòng)物模型按疾病進(jìn)程階段分類見(jiàn)Fig 1。一次性酒精灌胃模型可引起輕微的血清轉(zhuǎn)氨酶升高，肝臟有炎癥反應(yīng)。Lieber-DeCarli模型只能誘導(dǎo)輕度脂肪肝，輕度升高的血清轉(zhuǎn)氨酶，非常輕微的肝臟炎癥。Tsukamoto-French模型可引起較為嚴(yán)重的脂肪肝、肝臟炎癥和損傷，但復(fù)雜的操作和對(duì)動(dòng)物房的嚴(yán)格要求限制了其推廣。Gao-binge模型能誘發(fā)更嚴(yán)重的肝脂肪變性、肝細(xì)胞損傷和肝中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)。慢性酒精積累加多次高劑量酒精灌胃可模擬真正意義的慢性酒精性肝病的病變，使用老年小鼠還可以建立酒精性肝纖維化模型。到目前為止，仍然缺乏單純酒精造成的酒精性肝癌的動(dòng)物模型。這些模型能被用于探索不同階段或不同嚴(yán)重程度的ALD的發(fā)病機(jī)制，為發(fā)現(xiàn)有潛在治療ALD藥物新靶點(diǎn)提供研究工具。

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Animal models of alcohol liver diseases

ZHOU Heng1,2, LI Jun1,3, WANG Hua1,2,3

(1.CollegeofPharmacyofAnhuiMedicalUniversity, 2.DeptofOncology,theFirstAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity, 3.InstituteforLiverDiseasesofAnhuiMedicalUniversity,Hefei230032,China)

Key words:alcoholic liver diseases; animal models; fatty liver; liver injury; inflammation; fibrosis

Abstract:Chronic alcohol consumption is a leading cause of chronic liver diseases worldwide, resulting in cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Almost all heavy drinkers develop fatty liver, but only 20%～40% of them develop more severe forms of alcoholic liver diseases such as alcoholic hepatitis and alcoholic fibrosis, and the underlying mechanisms that contribute to the disease progression remain largely unknown. The animal models which can mimic human alcoholic liver diseases are very necessary tools for better understanding and exploring the therapy strategy of the disease. Currently, the most widely used models for alcoholic liver injury are Lieber-DeCarli model, Tsukamoto-French model, Gao-binge model and others. Here we summarize the recent advances in animal models recapitulating different features and etiologies of human alcoholic liver diseases. These animal models will be very useful for the mechanism study of alcoholic liver diseases and further new therapeutic drug screening.

收稿日期:2015-12-01,修回日期:2016-02-02

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金優(yōu)秀青年基金項(xiàng)目(81522009/H0317)；新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃(No NCET-13-0644)；安徽省皖江學(xué)者計(jì)劃資助。

作者簡(jiǎn)介：周恒(1988-)，男，碩士生, 研究方向：肝臟藥理學(xué)，E-mail:912358033@qq.com; 王華(1978-)，男，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：肝臟藥理學(xué)，通訊作者，E-mail: wanghua@ahmu.edu.cn； 李俊(1960-)，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：藥理學(xué)，通訊作者，Tel: 0551-65161001，E-mail: lijun@ahmu.edu.cn

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.04.006

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-1978(2016)04-0468-05

中國(guó)圖書(shū)分類號(hào)：R-05；R322.47；R363-332；R575

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-3-18 11:22網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160318.1122.012.html