侯紅紅，黃燕萍

(西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科，陜西 西安 710061)

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CTLA-4基因多態(tài)性與兒童過敏性紫癜的相關(guān)性

侯紅紅，黃燕萍

(西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科，陜西 西安 710061)

[摘要]過敏性紫癜是一種由自身免疫反應(yīng)介導(dǎo)的全身性血管炎，T細(xì)胞功能紊亂是其發(fā)病的重要因素。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4(CTLA-4)是免疫球蛋白超家族成員，人類CTLA-4基因位于2q33。CTLA-4不僅對(duì)T細(xì)胞活化起負(fù)向調(diào)節(jié)作用，還可介導(dǎo)免疫耐受，誘導(dǎo)T細(xì)胞分化，維持機(jī)體細(xì)胞/體液免疫平衡，所以CTLA-4可能與T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病有關(guān)。CTLA-4存在多位點(diǎn)的基因多態(tài)性，其多態(tài)性可影響CTLA-4的功能及其分子的表達(dá)，導(dǎo)致自身免疫性疾病，包括過敏性紫癜的發(fā)生發(fā)展，本文將對(duì)CTLA-4基因多態(tài)性與過敏性紫癜的相關(guān)性研究進(jìn)行綜述。

[關(guān)鍵詞]細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4；基因多態(tài)性；兒童；過敏性紫癜

過敏性紫癜(anaphylactoid purpura)也稱亨-舒綜合征(Henoch-Schonlein purpura，HSP)，好發(fā)于2～8歲兒童，可引起多臟器損害，臨床以皮膚紫癜、消化道癥狀(腹痛、便血)、關(guān)節(jié)腫痛和腎臟損害(血尿、蛋白尿)等為主要表現(xiàn)，其確切病因及發(fā)病機(jī)制至今尚未完全清楚，但已有眾多資料提示該病是一種由自身免疫反應(yīng)介導(dǎo)的系統(tǒng)性血管炎，以廣泛的小血管炎為病理基礎(chǔ)。

HSP患兒體內(nèi)存在免疫失衡。有研究表明，患兒急性期外周血CD4+T細(xì)胞數(shù)量降低，CD8+T細(xì)胞數(shù)量增高，CD4+/CD8+比值降低，輔助性T細(xì)胞(Th)中Thl功能低下，Th2優(yōu)勢(shì)活化，Th1/Th2的比值失衡，說明T細(xì)胞亞群功能紊亂為HSP重要的發(fā)病因素之一。在正常人體中，T細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)各細(xì)胞相互制約和協(xié)調(diào)，對(duì)免疫應(yīng)答起調(diào)節(jié)作用。HSP患兒體內(nèi)Th1/Th2、CD4+/CD8+異常，以及多種免疫分子分泌異常，打亂了機(jī)體正常的免疫平衡，導(dǎo)致多克隆B細(xì)胞異常增殖和活化，產(chǎn)生過多的IgA，循環(huán)IgA與血管內(nèi)皮細(xì)胞相互作用，通過補(bǔ)體途徑或直接損傷內(nèi)皮細(xì)胞，使血管通透性增加，液體外滲，引起組織水腫、出血等炎性病變[1-4]。

1細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4及其基因多態(tài)性

細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4(cytotoxic T lymphocyte associated ant igen-4，CTLA-4)又名CD152，是免疫球蛋白超家族成員，在激活的T淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞表面表達(dá)，目前對(duì)其與自身免疫性疾病的研究較多，因?yàn)樗赥細(xì)胞的活化及T細(xì)胞與B細(xì)胞相互轉(zhuǎn)換中起重要作用[5]，主要表現(xiàn)為：①參與下調(diào)T細(xì)胞反應(yīng)。CTLA-4與CD28在結(jié)構(gòu)上相似，共同享有B7分子配體，其中CD28識(shí)別CD80(B7-1)和CD86(B7-2)后為T細(xì)胞提供正性的共刺激信號(hào)，而CTLA-4與B7結(jié)合后則對(duì)T細(xì)胞活化起負(fù)調(diào)節(jié)作用。有直接證據(jù)為CTLA-4基因敲除的小鼠由于缺乏有效的抑制信號(hào)，于出生后2～3周淋巴細(xì)胞增生紊亂，出生后3～4周全部死亡[6-7]；②調(diào)節(jié)T細(xì)胞的分化。CTLA-4基因缺陷小鼠的CD4+T細(xì)胞以Th2細(xì)胞反應(yīng)為特征，體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CTLA-4可促使幼稚的CD4+T細(xì)胞向Th1細(xì)胞發(fā)展；③介導(dǎo)T細(xì)胞耐受。此作用為CTLA-4通過促進(jìn)FoxP3的負(fù)性信號(hào)來實(shí)現(xiàn)[8-9]。

人類CTLA-4基因位于2q33，共6 175個(gè)堿基，4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子?；?'端包括前導(dǎo)序列、Kozak序列、框內(nèi)終止密碼子(TAG)、TATA盒及2個(gè)不完全的cAT盒，其中第1外顯子為前導(dǎo)序列；第2外顯子編碼膜外功能片段，是B7分子的配體；第3外顯子編碼跨膜區(qū)；第4外顯子編碼胞漿區(qū)，其后是3'端一段長約1 150bp的非轉(zhuǎn)錄區(qū)(UTR)，含有約60個(gè)AT重復(fù)序列。CTLA-4基因存在多位點(diǎn)的基因多態(tài)性，CTLA-4的基因多態(tài)性可影響其功能及其分子的表達(dá)及功能，原理上，CTLA-4表達(dá)水平或功能異常導(dǎo)致T細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)紊亂失衡，促使自身免疫性疾病的發(fā)生。已有研究發(fā)現(xiàn)多個(gè)CTLA-4基因區(qū)域的多態(tài)性位點(diǎn)，包括啟動(dòng)子區(qū)的-1722T/C位點(diǎn)、-318C/T位點(diǎn)、-1661A/G位點(diǎn)和外顯子區(qū)的第1外顯子+49A/G位點(diǎn)、第2外顯子+2841G/A位點(diǎn)、第4外顯子微衛(wèi)星(AT)n多態(tài)性[微衛(wèi)星(AT)n位于3'非翻譯區(qū)的第642位堿基處，為串聯(lián)式的單核苷酸重復(fù)序列，若其與疾病相關(guān)聯(lián)，則會(huì)以異常高的頻率出現(xiàn)][6，10-11]。

2細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4與過敏性紫癜的相關(guān)性

HSP的主要發(fā)病機(jī)制為T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫紊亂，CTLA-4可通過負(fù)向調(diào)節(jié)T細(xì)胞活化及誘導(dǎo)T細(xì)胞分化等機(jī)制維持機(jī)體免疫平衡，而CTLA-4的基因多態(tài)性又可影響其功能，由此推斷，CTLA-4基因多態(tài)性可能與過敏性紫癜的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

已有研究表明，CTLA-4的基因多態(tài)性與某些自身免疫性疾病相關(guān)，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡[12]、自身免疫性甲狀腺疾病[13]、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[14]等，而部分相關(guān)性存在著明顯的種族差異；亦有研究表明，CTLA-4+49位點(diǎn)GG基因型與腎臟病變的微小病變型腎病、膜性腎病及局灶性節(jié)段性腎小球硬化等病理類型相關(guān)，以此推測其可能在引起腎臟病變的疾病中起重要作用[15]。

2.1啟動(dòng)子區(qū)的多態(tài)性位點(diǎn)

關(guān)于CTLA-4基因啟動(dòng)子區(qū)域多態(tài)性現(xiàn)象的確切生物學(xué)機(jī)制尚不清楚，可能是改變了轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)或其他調(diào)節(jié)區(qū)域，從而影響CTLA-4的定性或定量表達(dá)。既往研究發(fā)現(xiàn)CTLA-4基因啟動(dòng)子區(qū)-318位點(diǎn)存在C/T替換的多態(tài)性現(xiàn)象，因基因啟動(dòng)子區(qū)對(duì)基因的表達(dá)可發(fā)揮重要的調(diào)控作用，故推斷該區(qū)域的基因多態(tài)性現(xiàn)象可能會(huì)影響某些疾病的易感性。Wang等[16]對(duì)中國西部兒童(過敏性紫癜組110人，健康對(duì)照組90人)的研究結(jié)果顯示，該位點(diǎn)的基因多態(tài)性與兒童過敏性紫癜的發(fā)生無顯著相關(guān)性，但這項(xiàng)研究的樣本量較小，且可能存在地區(qū)差異，還有待大樣本、多地區(qū)(包括國外)的進(jìn)一步研究探討。

2.2外顯子區(qū)的多態(tài)性位點(diǎn)

第1外顯子+49A/G位點(diǎn)在CTLA-4基因多態(tài)性位點(diǎn)中的研究較多，其多態(tài)性改變即等位基因由A變?yōu)镚，編碼的氨基酸由蘇氨酸變?yōu)楸彼?，這可能會(huì)對(duì)CTLA-4的表達(dá)和功能造成影響。體外研究表明，等位基因G引起CTLA-4蛋白亞細(xì)胞定位異常，最終影響其功能，并導(dǎo)致CTLA-4的無效糖基化，影響其分子表達(dá)[17]。Wang等[16]對(duì)中國西部過敏性紫癜兒童(過敏性紫癜組110人，健康對(duì)照組90人)的研究認(rèn)為，該位點(diǎn)GG基因型及G等位基因與兒童過敏性紫癜腎臟損害相關(guān)，而Soylemezoglu等(2008年)對(duì)土耳其兒童(過敏性紫癜組100人，對(duì)照組156人)的研究結(jié)果顯示，該位點(diǎn)的G基因型與兒童過敏性紫癜腎臟損害相關(guān)，二者的結(jié)論一致。

HSP是兒童時(shí)期比較常見的血管炎性疾病，其發(fā)病受環(huán)境、免疫、遺傳等多方面影響，但多項(xiàng)研究表明患兒體內(nèi)因T細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)失衡存在免疫紊亂，而CTLA-4在免疫調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮著重要作用[1-4]。CTLA-4基因存在多個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，基因多態(tài)性可影響其功能及分子的表達(dá)，故推測CTLA-4基因多態(tài)性在過敏性紫癜的發(fā)病過程中起到一定作用，因此可進(jìn)一步完善從基因水平對(duì)CTLA-4基因多態(tài)性與過敏性紫癜的發(fā)病機(jī)制相關(guān)性的研究，亦可為疾病的治療提供新的方向。目前對(duì)CTLA-4基因多態(tài)性與過敏性紫癜的相關(guān)性研究顯示：-138C/T位點(diǎn)基因多態(tài)性與土耳其兒童過敏性紫癜的發(fā)生無相關(guān)性，第1外顯子+49A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性與土耳其及中國西部地區(qū)兒童過敏性紫癜的腎臟損害相關(guān)。但因?yàn)槭艿綐颖玖俊^(qū)域、種族等的限制，結(jié)果可能會(huì)存在偏倚。

在繼續(xù)對(duì)CTLA-4基因多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行與過敏性紫癜的相關(guān)性研究中，可取不同種族、地區(qū)的樣本，探討其中是否存在種族、地區(qū)差異；也可取啟動(dòng)子及外顯子區(qū)的其他位點(diǎn)進(jìn)行研究，對(duì)過敏性紫癜的發(fā)病機(jī)制及基因易感性作進(jìn)一步的探討，為對(duì)其治療及預(yù)后提供新的依據(jù)。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：帖利軍]

[收稿日期]2016-02-25

[作者簡介]侯紅紅(1989-)，女，在讀碩士研究生，主要從事兒科腎臟疾病的研究。

[通訊作者]黃燕萍，主任醫(yī)師/教授。

doi:10.3969/j.issn.1673-5293.2016.07.038

[中圖分類號(hào)]R725

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1673-5293(2016)07-0897-02

Association of CTLA-4 gene polymorphism and anaphylactoid purpura

HOU Hong-hong, HUANG Yan-ping

(Department of Pediatrics, First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Shaanxi Xi’an 710061, China)

[Abstract]Anaphylactoid purpura, also named Henoch-Schonlein Purpura (HSP), is an autoimmune-mediated systemic vasculitis with an important etiology of T-cell dysfunction. As member of super family of immunoglobulin, human cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4 (CTLA-4) is located on 2q33. CTLA-4 plays negative roles in regulating T-cell activation, mediates immune tolerance, induces T-cell differentiation and maintains the balance of cell-mediated/humoral immunity. Therefore, CTLA-4 may be associated with the T-cell-mediated autoimmune disease. Studies show that CTLA-4 presents gene polymorphism in several loci, which affect the function and expression of CTLA-4, leading to autoimmune disease including HSP. Here was a review for the association of CTLA-4 gene polymorphism and HSP.

[Key words]cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4 (CTLA-4); gene polymorphism; children; anaphylactoid purpura